TT肝炎病毒及5种输血相关病毒感染云南省静脉吸毒者的分子流行病学调查研究

目的 :旨在探讨云南省静脉吸毒者 (intravenous drug users,IVDUs)的 HIV、HBV、HCV、HGV、HTL V和 TTV等6种病毒的感染现状及其 TTV核酸序列的特征。方法 :用选自云南省某戒毒所 15 8名 IVDUs的血清标本 ,用取自于 TTVDNA的基因组开放读码框架 1区 (ORF1 )合成的引物经半套式 PCR法检测 TTV DNA,并对 TTV DNA阳性标本全部进行了核酸序列分析和分子进化基因分析 ;还同步测试了 HIV、 HBV、 HCV、 HGV和 HTL V等 5种病毒感染的标志物 (分别用PA法、 PAH法、EIA法、WB法和 PCR法 )。结果 :TTV DNA阳性为 31/ 15 8(19.6 % ) ,抗 - HIV、 HBs Ag、抗 - HBs、抗- HBc、抗 - HCV、HGV- RNA和抗 - HTL V等 5种病毒的 7项标志物测试出阳性分别为 34 / 15 8(2 1.5 % )、 6 / 15 8(3.8% )、 98/15 8(6 2 .0 % )、 76 / 15 8(4 8.1% )、 136 / 15 8(86 .1% )、 6 5 / 15 8(4 1.1% )和 0 / 15 8(0 )。 31例 TTV DNA阳性者均合并上述5种病毒之一种以上的共同感染 ;31例 TTV DNA阳性者经测序和构建绘制分子进化同源序列树状图进行种系发生学分析表明 ,2 7/ 31(87.1% )为 TTV基因型 型中的 G1a、G1b、G1c、G1d型的四个基因亚型 ;4/ 31(12 .9% )为 TTV基因型2型中的 G2 a、 G2 b、 G2 c型的 3个基因亚型。结论

锥虫早老素蛋白亲水区的克隆和表达纯化

目的体外表达锥虫早老素蛋白亲水区肽段,以制备抗血清用于功能研究。方法根据锥虫早老素蛋白二级结构特性,设计引物分别扩增N端及C端片段的亲水区肽段基因,装入原核表达载体进行表达,并通过变性纯化方法获得足够量表达蛋白,制备兔抗血清。结果成功扩增并克隆锥虫早老素蛋白亲水区片段L2及L7,并分别采用变性磁珠法和变性树脂法进行大量蛋白产物纯化,浓缩纯化产物制备兔抗血清经Western blot杂交验证,出现目的蛋白大小阳性条带。结论成功表达锥虫早老素蛋推测N端及C端亲水肽段,并成功制备抗血清,可用于锥虫早老素蛋白功能分析。

酵母双杂交筛选锥虫早老素蛋白相互作用蛋白

目的筛选寻找锥虫早老素蛋白相互作用蛋白,以了解锥虫早老素蛋白功能。方法体外表达锥虫早老素蛋白片段,装入pGBKT7诱饵质粒,与随机肽库系统共转化酵母,筛选阳性克隆并测序,通过与基因库锥虫功能序列比较,推导可能的相互作用蛋白。结果获得108个阳性克隆,对其中50个进行了序列测定和比较,获得最有可能的4个候选基因,分别为:丝/苏氨酸性磷酸酶2b催化亚基A2;钙激活蛋白,含锚蛋白重复序列蛋白以及一个具有与APP跨膜区结合位点特征序列的功能未知蛋白。结论成功利用随机肽库酵母双杂交系统筛选锥虫早老素蛋白相互作用基因,其相互作用仍有待进一步确认。

广西乙型肝炎病毒基因分型及其临床意义的研究

目的 了解广西乙型肝炎病毒 (HBV)基因型流行情况及其临床意义。方法 用套式PCR扩增检测广西南部和北部 [桂南和桂北 ]的各型乙型肝炎患者和慢性无症状HBV携带者共 16 1份血清HBVDNA ,阳性者用限制性片段长度多态性 (RFLP)方法、直接测序法或克隆测序法进行基因分型。结果 广西HBV各种基因型分布比例 :基因型A占 3 7% ,基因型B 2 1 7% ,基因型C 72 7%、基因型D 1 2 % ;未发现基因型E、F、G和H。基因型C在慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者组中流行呈增加趋势 ,基因型B的流行与基因型C比较呈相反趋势 (主要在慢性无症状HBV携带者和急性肝炎流行率相对较高 ) ;基因型C组的HBeAg阳性率显著高于基因型B组 ,而基因型C组抗 HBe阳性率显著低于基因型B组。在基因型C组的肝脏损伤 (ALT)比基因型A和B组更为严重 ;而在慢性无症状HBV携带者组中 ,基因型C在桂南的流行率显著高于桂北 ,基因型B的情况则相反。结论 ①广西主要流行的HBV主要为基因型B和C ,桂南主要为HBV基因型C ,桂北则主要为HBV基因型B ,提示广西HBV基因型由于其流行分布的不同与广西肝癌发病率桂南高于桂北有关。②基因型C与较严重的肝脏疾病如肝癌的发生有关。③首次发现广西的急性肝炎、慢性肝炎存在少量的HBV基因型A型、D型和B +C的混合型的?

广西庚型肝炎病毒的分子生物学研究

近来美国的两个研究小组分别独立地发现同一种新型的肝炎病毒,其一为Genelabs公司命名的庚型肝炎病毒(HGV);另一为Abbott公司命名的GB肝炎病毒C-(GBV-C)。HGV与GBV-C的核苷酸测序比较表明,这两株肝炎病毒具有较高的同源性。

广西吸毒者、肝病患者及献血员丙型肝炎病毒血清学基因型和基因型的分子生物学研究

选择283名静脉注射(静注)吸毒者、103例肝病患者和355名献血员(其中有110名为丙型肝炎病毒抗体阳性)进行丙型肝炎病毒(HCV)抗体免疫学检测、HCV血清学基因型和基因型的分子生物学研究。结果表明:283名静注吸毒者、103例肝病患者和355名献血员的抗-HCV阳性检出率分别为97.2%(275/283)、11.7%(12/103)和4.6%(11/240)。这三组人群的HCV血清学基因型Ⅰ型者分别为221/270(81.9%)、4/12(33.3%)和60/91(65.9%);HCV基因型在119例HCV感染者的静注吸毒者的HCV基因型1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、5a、6a和6b分别检出率为28.6%(34/119)、38.7%(46/119)、10.9%(13/119)、14.3%(17/119)、26.9%(32/119)、40.3%(48/119)、0(0/119)、0(0/119)、8.4%(10/119)、26.7%(31/119);12例HCV肝病患者检出1a为50.0%(6/12)、1b为100.0%(12/12)和3a为8.3%(1/12);在41例HCV感染的献血员中1a为24.4%(10/41)、1b为80.5%(33/41)、2b为2.4%(1/41)和3a为7.3%(3/41),5例(12.2%)不能确定型别。

广西HCV高危人群庚型肝炎病毒的新基因型核苷酸序列分析

目的 探讨广西HCV高危人群庚型肝炎病毒 (HGV)的感染情况及其新基因型的核苷酸序列。方法 静脉药瘾者 (IVDAs) 85份、肝病患者 (PLDs) 80份和献血员 (BDs) 5 0份血清标本 ,用PCR法检测庚型肝炎病毒RNA ,EIA法检测HBsAg、抗 HCV和抗 HIV ;随机选出 6 2份庚型肝炎病毒RNA阳性标本进行核苷酸序列分析 ,构建种系发生树作基因分型。结果 2 15份血清中HGV阳性者85份 (39 5 3% ) ,HBsAg、抗 HGV和抗 HIV的阳性率分别为 39 0 7%、4 2 79%和 0 ;11份HGVRNA的测序结果证实其有 3种基因型 ,其中 5株为新基因型 (亚洲型 ) ,5 1份补测序 ,其中GBV C型占 3 2 3% ,HGV型占 30 6 5 % ,亚洲型占 6 4 5 1%。结论 HGV的 3种基因型中存在不同的基因亚型 ;广西IVDAs、PLDs和BDs中感染庚型肝炎病毒以亚洲型和HGV型为主。