微囊藻毒素Microcystin-LR体外遗传毒性

背景与目的:应用人类淋巴母细胞TK6研究微囊藻毒素(Microcystin_LR,MCLR)的体外遗传毒性。材料与方法:MCLR体外染毒TK6细胞4h或24h后检测细胞毒性、微核及tk位点突变频率。结果:4h染毒未引发明显细胞毒性,24hMCLR染毒导致TK6细胞相对存活率下降,细胞微核率及TK基因突变频率明显上升,并有剂量-反应关系。最高浓度组(80μg/ml)的细胞微核率及TK基因突变频率分别是对照组的4.8及5.1倍。MCLR诱发tk位点两种不同表型的突变细胞集落,即正常生长集落及缓慢生长集落,并以后者为主。结论:24h染毒MCLR可以诱发TK6细胞微核及基因突变,揭示MCLR可能是一种断裂剂。

二乙基亚硝胺(DEN)诱发λ/lacZ转基因小鼠微核和基因突变实验研究

目的 应用λlacZ转基因小鼠检测二乙基亚硝胺(DEN)诱发体内遗传毒性。方法 小鼠腹腔注射DEN(2. 5mg kg) ,每周1次,连续4周。染毒4 8小时后检测外周血微核细胞率。末次染毒7天后处死动物,提取组织DNA ,通过体外包装反应获得并测定肝脏、肺脏、膀胱lacZ基因突变频率。结果 DEN诱发微核率与对照组无显著性差异,肝脏组织lacZ基因突变(MF)为2 6 8 .4×10 - 6 ,是对照组的6 .13倍,肺脏MF也明显高于对照,是其3 6 6倍,而膀胱组织MF则与对照无显著性差异。结论 肝脏、肺脏均是DEN致突变的靶器官,但对其敏感度并不相同。

微囊藻毒素MCLR导致TK6细胞tk位点杂合性丢失的分析

目的:应用人类淋巴母细胞TK6研究微囊藻毒素Microcystin -LR (MCLR)的体外遗传毒性分子机理。方法:藻毒素MCLR (80 μg/ml)体外染毒TK6细胞2 4h后检测tk位点突变频率并进行TK基因缺失突变体LOH的分析。结果:MCLR染毒导致TK6细胞相对存活率下降,TK基因突变频率明显上升,达到对照的5 1倍。MCLR诱导产生半合子LOH(41 7% )的比例是对照(2 0 7% )的两倍。结论:体外2 4h染毒TK6细胞MCLR可致突变并表现出断裂剂特性,诱发杂合性丢失而非点突变。

微囊藻毒素联合DEN诱发转基因小鼠体内遗传毒性实验研究

目的:应用λ/lacZ转基因小鼠检测MCLR是否具有增强DEN致突变能力。方法:实验分为DEN (2 5mg/kg) ,DEN加MCLR (1mg/kg)及生理盐水组,每周给药1次,连续4周。染毒4 8h后检测外周血微核细胞率。末次染毒7d后处死动物,提取组织DNA ,通过体外包装反应获得并测定肝脏、肺脏lacZ基因突变频率。结果:两个实验组诱发微核率与对照组相比差异无显著性,MCLR联合DEN实验组动物肝脏组织lacZ基因突变(MF)为2 0 9 6×10 -6,是对照组的4 7倍,肺脏MF也明显高于对照,是其3 4倍,但与DEN处理组相比差异无统计学意义。结论:MCLR联合DEN染毒并不能增加由DEN诱发的靶基因突变频率。

环磷酰胺诱导TK6细胞TK基因杂合性丢失的实验研究

目的 应用人类淋巴母细胞TK6研究环磷酰胺(CP)遗传毒性分子机理。方法 CP+S9体外染毒TK6细胞4 h后检测细胞相对存活率、tk位点突变频率并进行TK基因缺失突变体杂合性丢失(L OH)的分析。结果 环磷酰胺染毒导致TK 6细胞相对存活率下降,TK基因突变频率上升,并呈现剂量-反应关系。正常及缓慢生长突变集落倍增时间分别为(14 .6±1.74 ) h及(35 .8±3.78) h。环磷酰胺诱导产生半合子L OH的比例(5 0 % )是对照(2 0 .7% )的2 .4倍。结论 环磷酰胺对TK基因较大范围的损伤是导致基因突变的主要原因。

人类淋巴母细胞TK6检测环磷酰胺诱发微核及TK基因突变的体外实验研究

目的建立TK6细胞检测环境诱变剂诱发微核及TK基因突变的实验方法。方法用诱变剂环磷酰胺(CP)体外染毒TK6细胞4h后检测细胞毒性,微核及tk位点突变频率。结果CP处理导致TK6细胞的相对存活率下降,细胞微核率及TK基因突变频率明显上升,并均有剂量-反应关系。最高浓度组(4.0μg/ml)的细胞微核率及TK基因突变频率分别是对照组的8.8和15.7倍。CP诱发tk位点两种不同表型的突变细胞集落,即正常生长突变体集落及缓慢生长突变体集落,并以后者为主。结论CP可以诱发TK6细胞微核及TK基因突变,揭示CP可能是一种断裂剂。TK6细胞可用于评估环境化学物细胞水平遗传改变及TK基因突变。

生物芯片在遗传毒理学中的应用

目的应用基因芯片技术,探索遗传毒性生物标志物,用于预测和早期发现候选药物的遗传毒性。考察SNP芯片技术在染色体分析中的应用。方法基因芯片试验中,选择7个阳性药物、5个对照化合物作为受试物。使用预试验设计的剂量对小鼠单次给药,采集不同时间点的不同脏器的tRNA,使用Affymetrix基因芯片(MOE430A)进行分析。根据基因表达改变的特异性和改变程度等选择候选基因。对所选择的候选基因用RT-PCR验证芯片结果的重现性。使用其他阳性化合物用RT-PCR考察候选基因的有用性。SNP芯片试验中,以HL60细胞与其亚型HL60RG细胞作为研究对象,使用Affymetrix 10KSNP芯片考察细胞染色体的异常。结果基因芯片试验中,选出约50个标志物基因,RT-PCR试验验证了重现性和有用性。SNP芯片试验中,检测出HL60细胞的18号染色体为3倍体,亚型HL60RG细胞的1号染色体为单亲二倍体,11号染色体短腕缺失。结论基因芯片技术可用于探索药物毒性标志物。SNP芯片技术可检测细胞多倍体、染色体缺失和杂合性缺失(LOH),优于其他染色体分析技术。

联苯及其分解代谢产物对SIRC细胞毒性作用的比较研究

用SIRC细胞对biphenyl（联苯）及其7种分解代谢产物的细胞毒性作用进行测试比较，结果表明biphenyl的7种分解代谢产物的细胞毒性作用均大于biphenyl。

基因治疗用腺病毒载体

腺病毒载体转基因效率高 ,不受靶细胞是否为分裂细胞所限 ;容易制得高滴度病毒载体 ;生物活性评价较简便 ;在临床基因治疗方面有了越来越多的应用。但由于较高的免疫原性 。

应用λ/lacZ转基因小鼠研究微囊藻毒素体内遗传毒性

目的应用λ/lacZ转基因小鼠研究环境化合物微囊藻毒素MCLR是否可诱发动物体内遗传毒性。方法实验分为MCLR(1mg/kg)染毒及生理盐水对照组,每组各有5只MutaTM小鼠(平均体重25g),每周给药一次,连续4周。染毒48h后检测外周血微核细胞率。末次染毒7d后处死动物,提取组织DNA,通过体外包装反应获得并测定肝脏、肺脏cII基因突变频率,以突变噬菌斑的DNA为模板进行cII基因序列分析。结果实验组诱发微核率与对照组相比差异无统计学意义,MCLR及对照组肝脏cII基因突变(MF)分别为21.1×10-6,20.5×10-6,肺脏MF分别为36.9×10-6,25.7×10-6,实验组与对照组相比差异无统计学意义。MCLR诱发突变与对照较为相似,主要类型是碱基置换,自发突变40个突变体有37个(89%),其中转换突变有26个(62%),颠换突变有11个(27%),在CpG位点G:CtoA:T转换达到自发突变的40%。MCLR诱发突变34个突变体碱基置换有28个,占82%,转换、颠换比例分别为62%、21%,其中在CpG位点发生的G:CtoA:T转换比例略高于对照达到52%。结论MCLR在小鼠体内即不能诱发点突变也不能造成染色体损伤。