牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植

对第 7d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养 ,分离筛选类ES细胞 ,并对其进行了传代培养。接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞 ,在传代的 2 4h内增殖形成小集落 ,2～ 3d有雀巢状的集落出现 ,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养 ,4～ 5代后 ,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落。将传 4～ 5代的细胞集落接种到无饲养层的 4孔培养皿中培养 ,2 4h出现多细胞单层集落 ,4～ 7d长满皿底 ,并形成上皮样细胞 ,呈网状 ,将其作为核供体细胞进行核移植实验。结果有 80 % (40 5 0 )核 质融合的移核重构胚发生卵裂 ,5 % (2 4 0 )发育至桑椹胚期 ,2 5 % (1 4 0 )发育至囊胚期 ,92 5 % (37 4 0 )停止在 2～ 4细胞期。结果表明 :采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植 。