国产水痘减毒活疫苗株即刻早期基因ORF62的特征

目的：通过比较国产水痘减毒活疫苗株（ vOka ）与其父系株（ pOka ）即刻早期基因（ IE） ORF62启动子区序列及其启动活力、编码区序列及其反式激活力差别，探讨vOka株ORF62突变在其减毒机制中的可能作用。方法分别构建pOka株、长春百克生物科技股份公司vOka-BK株、上海生物制品研究所vOka-SH株和葛兰素史克公司vOka-GSK株（对照） ORF62启动子-报告子质粒和ORF62编码区表达质粒，通过测序分析ORF62启动子区和编码区序列差异，再应用基因转染瞬时表达技术分析3株vOka与pOka株ORF62启动子活力及ORF62编码IE62对即刻早期基因ORF4、早期基因ORF28和晚期基因ORF67启动子的反式激活力差异。结果与pOka株比较，3株vOka 一致存在ORF62启动子区110050位点T缺失突变，该突变未导致启动子区的转录因子结合基序改变，但3株vOka ORF62启动子的启动活力显著低于pOka株；3株vOka ORF62编码区存在一致的碱基置换突变并分别产生SmaⅠ、NaeⅠ和BssHⅡ新酶切位点；除vOka-SH株IE62在CV-1细胞中对ORF4启动子的反式激活力显著低于pOka株外，3株vOka IE62在CV-1和MeWo细胞中对ORF4、ORF28、ORF67启动子的反式激活力均显著高于pOka株。结论3株vOka ORF62启动子区110050位点T缺失突变可能是启动子活力降低和IE62反式激活力改变的原因之一，vOka与pOka株ORF62启动子活力和IE62反式激活力差异与转染细胞类型关系不大。