尿Ⅳ型胶原测定的方法学评价及分析前因素对于测定的影响

目的对一步法酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒进行功能评价，建立参考范围并对分析前和可能影响测定的一些因素进行研究。方法采用ELISA对尿液中的Ⅳ型胶原进行测定。对试剂盒的敏感性，测量线性，精密度，特异性，回收率进行了测定和评价，并进行干扰试验和初步建立参考范围。同时评价分析前因素，包括采样、离心、保存条件和时间，以及冻融和昼夜节律对于测定的影响。结果该方法具有令人满意的敏感性（0．2ng／m1），测量线性（0．8～50ng／m1），精密度（CV〈7％），特异性和回收率（82．84％～97．45％）。精液的污染对于Ⅳ型胶原的测定没有显著影响。尿内Ⅳ型胶原的量呈明显的昼夜节律，晨尿内含量最低，白天含量达到最高，睡前再次下降。Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定，但长时间室温保存也可被各种蛋白酶的降解。冻融对于Ⅳ型胶原的影响不大，但离心可以造成测量值下降。将尿液与一定量的缓冲液（pH7．5的TRIS-HCI）混合（10：1）可以得到一个满意的回收率，避免Ⅳ型胶原被降解。结论该试剂盒具有良好的性能；Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定，但如需长期保存，应加入缓冲液并在-80℃保存。