参地降糖颗粒对高果糖大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:观察参地降糖颗粒对具有胰岛素抵抗(IR)伴高血压模型高果糖大鼠胰岛素敏感性的影响。方法:用6周龄的雄性SD大鼠,分别以标准餐(正常对照组)和高果糖(实验组)喂养6周,实验组又分为实验对照组和中药实验组;用ATPase染色法对骨骼肌纤维成分进行分析。结果:参地降糖颗粒对高果糖大鼠的收缩压无明显改善作用;对胰岛素敏感性指标有明显提高作用;对两种骨骼肌成分有显著影响,即Ⅰ型骨骼肌纤维成分增加,Ⅱ型骨骼肌纤维成分减少。结论:参地降糖颗粒对高果糖大鼠的胰岛素抵抗有明显改善作用,即通过改善骨骼肌纤维成分的变化而提高胰岛素的敏感性,提示胰岛素抵抗产生的机制之一可能是骨骼肌纤维成分的变化。

2011年和2013年武汉市病毒性胃肠炎病原监测与分析

目的监测和分析2011年和2013年武汉市婴幼儿和成人病毒性胃肠炎病原。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳及RT-PCR对胃肠炎患者腹泻大便样本进行轮状病毒、诺如病毒、星状病毒以及札幌样病毒检测,部分样本测序并比对同源性。用PCR检测腺病毒。结果轮状病毒、诺如病毒、星状病毒、札幌样病毒检出率分别为21.6%（296/1 368）、35.7%（488/1 368）、10.2%（140/1 368）和7.7%（105/1 368）;肠道腺病毒在儿童患者中的检出率为8.2%（70/853）。诺如病毒和轮状病毒易感人群为13～24月龄和7～24月龄儿童,及40～59岁成人。轮状病毒检出高峰在秋冬季。星状病毒、札幌样病毒和腺病毒多发于2岁以下的婴幼儿,无明显季节分布。196人份A组轮状病毒基因型以G9P[8]为主（40.8%）,其次为G1P[8]（26.5%）,G3P[8]（16.3%）和G2P[4]（11.7%）。经测序比对诺如病毒基因型分别为GⅡ.4型（7/12）,GⅡ.3型（5/12）;星状病毒为1型（8/13）,8型（4/13）和5型（1/13）;札幌样病毒为GI.1型（2/6）,GI 2型（2/6）和GⅡ.1型（2/6）。结论 2011年和2013年武汉市婴幼儿和成人胃肠炎主要病原是诺如病毒,其次是轮状病毒。

ROS在小白菊内酯诱导MM细胞凋亡中的作用

目的研究倍半萜内酯小白菊内酯(parthenolide,PL)对多发性骨髓瘤原代细胞和细胞株诱导的凋亡作用及其机制。方法以多发性骨髓瘤原代细胞及细胞株为研究对象,利用台盼蓝染色检测细胞存活率,用DAPI染色法检测细胞凋亡率,流式细胞仪检测反应氧(ROS)和线粒体膜电位水平变化。结果2.5μmol.L-1PL引起多发性骨髓瘤(multi-ple myeloma,MM)细胞明显凋亡及线粒体膜电位下降,而正常淋巴细胞在同等条件下不受影响。用2.5μmol.L-1PL作用10 h后,KMM-1和MM1S细胞ROS水平明显增加。用自由基清除剂L-N-乙酰半胱氨酸(L-NAC)预处理可抑制ROS的产生,对两种细胞存活率、凋亡率无影响。用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂二亚苯基烟碱氯化物(diphenylene iodonium chloride,DPI)预处理KMM-1和MM1S,可明显抑制PL介导的ROS的产生,并对两种细胞凋亡率无影响。结论PL诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,而正常淋巴细胞在同等条件下不受影响。PL的凋亡活性是通过引起MM细胞氧化应激而介导的,并进一步推测NADPH氧化活性与PL介导的MM细胞ROS的产生相关。

人B组轮状病毒vp7基因的克隆和序列分析

利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增了人B组轮状病毒WH-2vp7基因,连接到克隆载体pUCm-T,并对其基因序列进行了分析。WH-2与ADRV的同源性达98％,与印度加尔各达分离株CAL-1达92％,而与动物B组轮状病毒同源性差别较大,如与IDIR(鼠)同源性仅为58％,与WD653(牛)B组轮状病毒同源性为63％,与ATI(牛)同源性为61％。对vp7基因的二级结构分析发现其mRNA折叠形成多达18个发卡环状结构。VP7蛋白是249个氨基酸组成,分子量为28.4kDa,含有3个潜在的N连接的糖基化位点和多个磷酰化位点,从氨基酸序列的同源性来看,WH-2与ADRV的同源性达99％,与CAL-1达95％,而IDIR仅为51％,说明了WH-2和ADRV的起源相同。此研究对了解B组轮状病毒基因的进化和变异规律具有重要意义,也将为B组轮状病毒预防性疫苗的研制提供科学的依据。

44株人A组轮状病毒武汉流行株的培养鉴定及其意义

目的对A组轮状病毒武汉流行毒株进行培养增殖并确定其基因型和血清型。材料经RT-PCR确定基因型和ELISA确定VP6亚组血清型后初步判定的57株不常见型、混合型及未确定型别的A组轮状病毒流行毒株。方法MA104细胞分离培养病毒;聚丙烯酰胺凝胶电泳确定电泳型;逆转录巢式聚合酶链反应确定G、P、VP6和NSP4基因型;ELISA确定VP6亚组血清型。结果分离率77.2%(44/57)。分离了一株具备双重亚组血清型特征的人轮状病毒R479。分离后基因混合型、非常见基因型别或非常见G、P组合、不能确定的基因型别及VP6亚组血清混合型的样本数量与分离前相比显著减少。结论轮状病毒流行毒株的分离培养有助于提高其基因分型的敏感性,减少基因分型和血清分型的非特异性反应。

从骨骼肌纤维组成成分变化探讨糖肾胶囊对胰岛素抵抗改善的机制

目的:从骨骼肌纤维组成变化探讨中医复方糖肾胶囊对胰岛素抵抗伴高血压模型大鼠(FFR)的胰岛素抵抗改善的作用机制。方法:用6周龄的雄性SD大鼠,以标准餐和高果糖餐喂养将其分为对照组和实验组,实验组又分为实验对照组和中药治疗组;用ATP酶染色法对各组骨骼肌(比目鱼肌)纤维组成成分进行分析。结果:糖肾胶囊对1型和2型骨骼肌纤维成分有显著的影响,且两种纤维组成成分与胰岛素敏感性指标M值呈显著的相关关系。结论:糖肾胶囊对胰岛素抵抗改善的作用机制可能与骨骼肌纤维组成成分的变化有关。

C组轮状病毒主要基因全片段扩增及武汉地方株Wu82的VP6和VP7编码基因序列分析

目的建立C组轮状病毒VP6、VP7、VP4和NSP4基因全片段扩增方法;明确武汉地方株Wu82与其他毒株的系统发生关系。腹泻患者大便。方法PAGE筛查病毒;设计9对引物RT-PCR扩增VP6、VP7、VP4和NSP4基因;VP6、VP7序列及亲水位点分析。结果Wu82VP6和VP7基因核酸序列与其它人C组轮状病毒相比同源性分别为98.45%～97.12%和99.34%～94.83%。结论C组轮状病毒基因非常保守,进化缓慢。2001年武汉地方株Wu82与1995年武汉地方株208株相比,VP7和VP6抗原表位存在差异。

最大熵方法-功率谱密度分析法在时间序列资料研究中的应用

目的介绍一种应用较为广泛的新的时间序列分析方法"最大熵方法-功率谱密度分析法"。方法对时间序列资料在频域分析中采用最大熵方法进行功率谱分析,并结合在时域分析中对非线性最小二乘法采用线性化方法进行分析、预测。结果介绍了该方法的理论柜架、操作步骤,并通过英国伦敦1948～1967年麻疹报告发病的时间序列进行了演示,还对此方法与传统的频域分析法和时域分析法进行了比较。结论本方法可对时间序列资料的内在特征深入分析,在了解序列内部结构的基础上进行拟合预测分析,在时间序列资料分析中具有广泛的应用前景。

孕鼠接触苯乙烯对其仔代神经行为毒性影响的研究

本研究采用一组行为试验方法,观察Wistar孕鼠吸入苯乙烯对后代发育和行为的影响。50ppm苯乙烯(相当我国车间容许浓度5倍)已引起大鼠后代早期行为发育迟缓、活动性和情绪改变及学习能力低下。

镉对大鼠肠粘膜中三价运铁蛋白形成的影响

通过经口投给100ppm氯化镉与不投给镉的两组Wistar雄性大鼠研究镉对大鼠肠粘膜中三价运铁蛋白形成的影响。结果表明,镉可降低脏器中贮藏铁的含量,可阻止铁进入肠全粘膜中,镉引起动物铁不足与其枯膜中铁蛋白及其它未知蛋白结合的关系应给以重新评价,而在体外试验中,即使给于高浓度氯化镉,对前运铁蛋白转为运铁蛋白也仅仅表现轻微的抑制作用。

Catalase活性在PTL诱导MM凋亡不同敏感性中的作用研究

目的研究小白菊内酯(PTL)对多发性骨髓瘤细胞敏感性的不同及机制,为PTL的联合化疗策略提供理论依据。方法以多发性骨髓瘤细胞KMM-1、MM1S、NCI-H929、KMS-5为研究对象,利用DAPI检测细胞凋亡、Weston blot检测过氧化氢酶(Catalase)蛋白的表达、流式细胞仪检测活性氧水平、Catalase-520和GPX-340试剂盒检测Catalase和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果KMS-5、NCI-H929与KMM-1、MM1S对2.5μmol/L、5μmol/L PTL凋亡率具有显著差异性(P<0.01)。在PTL 2.5μmol/L时活性氧增高与药物作用时间关系中,KMM-1、MM1S与KMS-5、NCI-H929相比,峰值显著升高(P<0.01)。在MM1S和KMM-1细胞Catalase的表达水平、活性与NCI-H929,KMS-5相比明显降低,Catalase抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑提高NCI-H929,KMS-5对PTL介导的细胞凋亡。结论Catalase活性是PTL敏感性的关键因素,与Catalase抑制剂药物合用可以提高PTL更有效的抗MM的作用。

锌指蛋白KOX12的克隆及表达

目的:在大肠杆菌中表达KOX12蛋白,为进一步研究它的功能奠定基础。方法:根据GenBank中KOX12的基因序列设计相应的引物,用RT-PCR的方法从肺癌细胞株中扩增得到KOX12片段,将它克隆到PcDNA3.1F2/FOXM1质粒,然后经BamHI和XhoI双酶切,得到修饰过的KOX12基因片段,构建原核表达质粒PQE30/KOX12,以大肠杆菌M15为宿主菌表达目的蛋白,并采用Ni-NTA agarose亲和层析对目的蛋白进行了纯化。结果:构建了PQE30/KOX12原核表达体系,并检测到KOX12蛋白的有效表达。结论:成功地构建了原核表达质粒PQE30/KOX12并表达了KOX12蛋白,为进一步研究它的功能奠定了基础。

胃平滑肌瘤与平滑肌肉瘤的超声内镜定量化判定

目的 :应用超声内镜对胃平滑肌瘤、胃平滑肌肉瘤作一鉴别。方法 :4 8例胃平滑肌瘤或平滑肌肉瘤患者 ,应用超声内镜检查后 ,根据肿瘤大小、边缘的整齐与否、内部回声是否均匀、有无液化四方面 ,用计分的办法 ,定量化评价良恶性。结果 :本组平滑肌瘤的积分一般都很低 (<2 .0分 ) ;积分 >3.0分者 ,均为平滑肌肉瘤 ;积分范围在 2 .0～ 3.0分之间的肿瘤 ,超声内镜与病理结果相差较大。结论 :超声内镜检查结合计算肿瘤积分评价其良恶性的方法是可行的 。

应用多聚酶链反应研究人轮状病毒第4基因的分布

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法，采用一套针对第４基因的４种代表性等位基因的寡聚核苷酸引物对１６株人轮状病毒代表株进行了试验。结果证明对ＶＰ４基因型具有特异性。用此方法对１９９份日本和泰国的婴儿粪便样品进行了ＶＰ４的分型研究，其中Ｐ１Ａ型最多见，其次为Ｐ１Ｂ型；并分别在泰国和日本的样品中检出２株Ｐ２型和１株Ｐ３型。

锌指蛋白KOX12单克隆抗体的制备及在肿瘤组织中的表达

目的:制备重组锌指蛋白KOX12(肿瘤相关蛋白),并制备其特异性的单克隆抗体,用免疫组化观察它在肿瘤组织中的表达。方法:通过逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)得到KOX12 cDNA片段,构建真核表达质粒和原核表达质粒,在大肠杆菌M15和293T细胞中进行表达。以KOX12蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,用聚乙二醇(PEG)融合法进行细胞融合制备产生抗KOX12单克隆抗体的杂交瘤细胞株;该抗体用免疫组化法对结肠癌、肺癌组织进行染色。结果:构建了含KOX12的真核细胞和原核细胞的表达质粒,并表达及纯化了KOX12重组蛋白,建立了产生抗KOX12单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C8,酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)显示6C8对KOX12有高度的特异性,免疫组化染色结果提示在结肠癌组织和肺癌组织切片中有少数细胞呈阳性反应。结论:6C8单克隆抗体是锌指蛋白KOX12特异的单克隆抗体,该抗体为IgG1型、k链亚类免疫球蛋白。在肺癌组织及对肠癌组织中有阳性细胞可见。该文为KOX12蛋白的研究工作创造了一个平台,为肿瘤的防治提供了一条新的可能途径。

颅内动脉瘤三维CT血管造影术与MRA、DSA的对照观察

颅内动脉瘤三维ＣＴ血管造影术与ＭＲＡ、ＤＳＡ的对照观察关俊宏潘蔚然王成林赵崇智王朋１刘贵军２田边纯嘉３端和夫３（第二临床学院神经外科，沈阳１１０００１）关键词颅内动脉瘤；三维ＣＴ血管造影术；磁共振血管造影术；数字减影血管造影术三维ＣＴ血管造影术（Ｔｈ...

RTPCR技术检测人B组轮状病毒的方法研究

目的：建立一种快速灵敏的方法来检测人B组轮状病毒。方法：参照文献，设计并合成了8对不同引物，利用RT-PCR技术同时扩增相应的基因片段。结果：经过一轮RT—PCR后，均扩增出与引物对应的大小不一的DNA条带。结论：由于常规B组轮状病毒的免疫诊断和聚丙烯酰胺凝胶电泳存在各自的缺点，不能很好的应用于临床和实验室诊断。RT-PCR是一种高灵敏度的检测方法，8对特异性引物同时用于人B组轮状病毒的检测，其灵敏度和特异度相当高，且使用一个配方和一样的扩增程序，这使得在实验室诊断变得更为便捷和简单。

从人胃癌细胞株NUGC2培养液中检出内皮细胞生长因子

Folkman等在1972年提出:“实体瘤的生长依赖于血管生长现象,一旦肿瘤发生,每增加肿瘤细胞数,都一定先有新生毛细血管向肿瘤聚集”。这个假设很快被大家接受。

胃癌细胞产生的一种新型内皮细胞生长因子的分离

人胃癌细胞株 NUGC 2的培养上清液对内皮细胞及纤维细胞有生长刺激作用.收集 NUGC 2的培养上清液,然后经硫酸铵盐析。等电聚焦(IEF)、Mono Q 阴离子交换层析柱、凝胶过滤层析柱(TSK Gel G3000 SW)等方法分离蛋白,得到一种只对内皮细胞有生长刺激作用,对纤维细胞没有生长刺激作用化学不均一的内皮细胞生长因子,其等电点(PI)为2.07～2.90,分子量在45 000～66 000范围,盐洗脱浓度为0.1～0.25M NaCl.它不同于酸性纤维细胞生长因子,也不同于碱性纤维细胞生长因子.

抗热休克蛋白抗体H3F识别分子的分析及意义

研究目的探讨肿瘤相关抗原的表达及在肿瘤免疫中的作用。研究设计用人Hela细胞株提取含热休克蛋白的ATP结合蛋白,制取单抗,分析相应热休克蛋白在肿瘤细胞株及人体肿瘤中的表达。研究对象 Hela、W14、Brash-2等肿瘤细胞株,WFB、BALB_3T_3正常细胞株,人食管、胃等癌组织。处理方法按Garsia法将提取的ATP结合蛋白免疫BALB/c小鼠,制取杂交瘤,所得单抗对肿瘤细胞株及人体肿瘤作免疫组化及流式细胞分析。结果获取一株稳定分泌IgM的杂交瘤H3F。H3F抗原具有热及化学诱导性,是一种分子量为90kD的热休克蛋白,可在多种肿瘤细胞株及人体肿瘤细胞表面表达,并与浸润性γδT淋巴细胞呈正相关系。H3F在正常细胞株及人体细胞表面阴性。结论 H3F为一种瘤相关抗原,可介异γδT淋巴细胞对肿瘤的免疫监视作用。