广西产眼镜王蛇毒α-神经毒素基因的分子克隆及序列分析

为获得眼镜王蛇 (Ophiophagus hannah ,简称 Oh)蛇毒 α-神经毒素 (α- NT)的基因序列 ,依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的 α- NT基因有较高的同源性 ,设计 1对上下游引物 ,为克服引物带来模糊扩增 ,在蛋白编码部分再设计 1对上下游特异引物 ,用 Nacleospin RNA Kit法从 3条活眼镜王蛇毒腺中提取 m RNA,以 3′端引物合成的 c DNA作为模板进行 PCR扩增反应 ,测定产物的核苷酸序列 ,得到全长 4 74 bp的眼镜王蛇 c DNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属 Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇 L aticauda semif asciata (L s) 10 0 %同源 ,与眼镜蛇南洋亚种 N aja sputatrix (Ns)、银环蛇 (Bungarusmulticinctus) (Bm) 96 .8%同源 ;蛋白密码部分有83.3%与 Ns、79.2 %与 Pt、76 .4 %与 L s、74 .1%与 Bm同源。信号肽后紧接着的 72个氨基酸有 90 .3%与已发现的眼镜王蛇毒长链α- NT Toxin a同源 ,大约有 73.6 %与 Toxin b、6 9.7%与 Oh- 4、6 6 .7%与 Oh- 5、5 6 .9%与 Oh-6 A和 6 B同源 ,并与 α-银环蛇毒素 5 4 .2 %同源。说明新发现的眼镜王蛇 c DNA是一条长链 α- NT基因。