普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒(英文)

目的 为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。 方法 用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。 结果 眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。 结论 HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。

PCR法分子克隆及序列分析广西产眼镜王蛇蛇毒α-神经毒素基因(英文)

目的 为了获得眼镜王蛇 (Ophiophagushannah ,Oh)蛇毒α 神经毒素 (α Neurotoxin ,α NT)的基因序列。方法 我们通过比较了基因库中已知眼镜蛇科不同种类毒蛇来源的α NT基因 ,发现它们有较高的同源性 ,特别是 5 和 3 非翻译区及引导肽部分高度保守 ,据此设计了包括翻译起始点的上游引物 ,以及为了得到 3 端较完整非编码部分而设计了基本上属于d (T)的反意链下游RACE PCR引物。为了克服引物所带来的模糊扩增 ,还在蛋白编码部分再设计一对上下游引物 ,由此组成P1、P2、P3和P4四对引物。采用NacleospinRNAKit法分别从 3条活Oh蛇毒腺中提取mRNA ,以 3 端引物合成cDNA的第一链 ,并以此作为模板 ,分别用四对引物进行PCR扩增反应 ,得到了目的基因不同长度的PCR产物 ,产物经精制后进行测序 ,对比分析其结果。结果 获得了全长 4 74bp的Oh .cDNA的基因核苷酸序列 ,包括 5 端 6 0bp ,信号肽伴启动子ATG 6 3bp ,蛋白质密码部分 2 16bp和 3 端 186bp并含有TGA终止码。经基因库信息计算机分析其信号肽与眼镜蛇树属(Pseudonnajatextilis,Pt.)海蛇 (Laticaudasemifasciata ,Ls)10 0 %同源 ,96 8%与眼镜蛇南洋亚种 (Najasputatrix ,Ns)和银环蛇 (Bungarusmulticinctus,Bm)同源 .蛋白密码部分83 3%与Ns ,79 2