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尿素酶预处理-气相色谱-质谱法在甲基丙二酸尿症诊断中的应用 被引量:16
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作者 郝虎 宋元宗 +2 位作者 肖昕 张春花 王自能 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期574-576,共3页
目的探讨尿素酶预处理-气相色谱-质谱法(UP-GC-MS)在甲基丙二酸尿症(MMA)诊断、治疗中的价值。方法留取8例MMA患儿和15例同年龄健康儿童晨尿2mL,尿液标本经尿素酶去尿素、加内标正十七酸、除蛋白、真空干燥处理,残余物用双(三甲基... 目的探讨尿素酶预处理-气相色谱-质谱法(UP-GC-MS)在甲基丙二酸尿症(MMA)诊断、治疗中的价值。方法留取8例MMA患儿和15例同年龄健康儿童晨尿2mL,尿液标本经尿素酶去尿素、加内标正十七酸、除蛋白、真空干燥处理,残余物用双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷(BSTFA/TMCS)衍生后进样,分析仪器为Finnigan GC-MS联用仪,每次取样0.5-1.0μL,扫描模式为全扫描加选择离子扫描模式,分流比10∶1,起始温度60℃,然后以17℃/min的速度升温至320℃。质谱电离方式为电子解离模式,扫描范围为m/z50-m/z650。应用SPSS12.0软件进行t检验。结果患儿尿液中可检测到明显的甲基丙二酸、甲基枸橼酸等MMA患儿尿液标志物信号。在总离子流图上,其绝对保留时间(相对保留时间)分别是6.78min(0.396min)和11.53min(0.24min)。在质谱图上,甲基丙二酸的特征离子(三甲基硅烷化后质荷比,TMSm/z)分别为73、147、247。8例MMA患儿尿液甲基丙二酸水平为1.72-18.2nmol/mgCr;健康对照组15例儿童为0.001-0.202nmol/mgCr。经过lg(x+5)对数转换后(其中x为原始数据),病例组尿液甲基丙二酸水平为(0.703±0.005),健康对照组为(0.973±0.184),二组比较差异具有统计学意义(t=4.10P〈0.01)。结论建立UP-GC-MS分析尿液代谢成分超越了有机酸萃取法的一些局限,是MMA确诊的重要方法。 展开更多
关键词 遗传代谢病 甲基丙二酸尿症 尿素酶预处理-气相色谱-质谱法
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Citrin缺陷引起的新生儿肝内胆汁淤积症两例临床特点及家系基因分析 被引量:4
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作者 闫秀梅 黄开宇 +4 位作者 李云芳 胡伟国 张春花 郑必霞 郭惟 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第29期3483-3485,共3页
目的探讨2例Citrin缺陷引起的新生儿肝内胆汁淤积症患儿的临床特点,了解其家系基因突变情况。方法在2例患儿及其父母血样中提取DNA,根据文献中报道的12种已知突变在基因上的分布位置,将其所在区域分成6个片段扩增,扩增后行琼脂糖凝胶电... 目的探讨2例Citrin缺陷引起的新生儿肝内胆汁淤积症患儿的临床特点,了解其家系基因突变情况。方法在2例患儿及其父母血样中提取DNA,根据文献中报道的12种已知突变在基因上的分布位置,将其所在区域分成6个片段扩增,扩增后行琼脂糖凝胶电泳,纯化后直接测序,确定患儿及其父母基因类型。结果 2例患儿均因皮肤黄染入院;入院查体:皮肤、巩膜黄染;实验室检查:转氨酶升高,胆红素双向升高,血常规提示贫血,凝血功能正常,甲胎蛋白升高。例1患儿为851del4/851del4纯合突变,父母均为携带者;例2患儿为[Ⅰ]851del4/[Ⅱ]IVS11+IG>A的复合变异,父母均为携带者。2例患儿经特殊饮食配方喂养,预后良好。结论 2例患儿的父母均为SLC25A13基因突变携带者,其中例1患儿为851del4纯合突变,例2患儿为[Ⅰ]851del4/[Ⅱ]IVS11+IG>A杂合突变。 展开更多
关键词 CITRIN缺陷病 新生儿肝内胆汁淤积症 黄疸 SLC25A13基因
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肥胖犬白细胞中相关基因及血浆生化指标的变化 被引量:2
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作者 李格宾 山本一郎 +1 位作者 新井敏郎 陈武 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第4期75-80,共6页
目的观察不同肥胖时期的犬血浆中相关生化指标和外周血液白细胞(peripheral blood leukocytes,PBL)中胰岛素和脂联素通路、能量和脂类代谢相关基因的变化,为开发肥胖犬代谢紊乱的早期诊断法提供依据。方法选用到动物医院进行常规体检的... 目的观察不同肥胖时期的犬血浆中相关生化指标和外周血液白细胞(peripheral blood leukocytes,PBL)中胰岛素和脂联素通路、能量和脂类代谢相关基因的变化,为开发肥胖犬代谢紊乱的早期诊断法提供依据。方法选用到动物医院进行常规体检的不同品种的犬59只,按照5分制的身体评分指数分为正常犬(26只)、超重犬(28只)和肥胖症犬(5只),分别检测血浆中生化代谢指标(葡萄糖、血尿素氮、肌氨酸酐、总胆固醇、总蛋白质、三酸甘油酯、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、非酯化脂肪酸、脂联素和免疫反应胰岛素)和PBL中相关基因[胰岛素受体底物(IRS-1,-2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K p85α),苹果酸脱氢酶(malate de-hydrogenase,MDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6DPH)、脂肪酸合酶(FAS)、脂联素受体(ADIPOR1,2)]mRNA表达量。结果与对照犬相比,超重犬和肥胖犬血浆中的胰岛素含量显著升高,肥胖犬非酯化脂肪酸、总胆固醇和三酸甘油酯显著升高。肥胖犬PBL中胰岛素下游相关基因IRS-2、脂类代谢基因FAS和能量代谢基因MDH的mRNA表达量显著下降。结论肥胖犬患有高胰岛素血症和严重的脂类代谢紊乱,胰岛素下游基因和其他代谢相关基因的显著下降可能提示肥胖犬患有胰岛素抵抗和能量代谢紊乱。 展开更多
关键词 肥胖症 代谢紊乱 外周血白细胞 基因表达
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反复抽搐导致严重脑损伤的枫糖尿症患者1例 被引量:2
4
作者 张晓威 张春花 于清慧 《中国实验诊断学》 2012年第10期1935-1935,共1页
1患者资料患儿男,4岁,以间歇性抽搐3年,加重10天为主诉就诊收住院。入院时不会走路,只能说简单儿语,抽搐发作前无明显诱因,无发热,表现为双目凝神,意识丧失,点头,四肢强直,抽搐时间多不足1分钟后自行缓解,1年前曾在北京某医院诊断为癫痫... 1患者资料患儿男,4岁,以间歇性抽搐3年,加重10天为主诉就诊收住院。入院时不会走路,只能说简单儿语,抽搐发作前无明显诱因,无发热,表现为双目凝神,意识丧失,点头,四肢强直,抽搐时间多不足1分钟后自行缓解,1年前曾在北京某医院诊断为癫痫,给予口服"德巴金"5个月,病情无明显改善,近10天抽搐加重来诊。患儿为足月、顺产,生后窒息约1-2分钟,经抢救后缓解,患儿4-5个月抬头,8个月会坐,2岁会走,现近4周岁,只会说简单两个字语言。既往史无特殊记载。查体无特异性阳性体征。 展开更多
关键词 反复抽搐 患者资料 严重脑损伤 枫糖尿症 自行缓解 意识丧失 抽搐时间 医院诊断
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Qi盐对尿酸形成和排泄的影响 被引量:1
5
作者 刘骁 李端 +2 位作者 黄维蓉 佐藤稔 上田秀夫 《中国临床药学杂志》 CAS 2003年第6期339-342,共4页
目的 :探讨Qi盐对尿酸 (UA)形成和排泄的影响。方法 :通过体外测定黄嘌呤氧化酶 (XO)抑制率来观察Qi盐对UA形成的影响 ;通过对高尿酸血症模型大鼠的血清和尿液UA含量的测定 ,以及大鼠酚红 (PSP)排泄试验来观察Qi盐对UA排泄的影响。结果 ... 目的 :探讨Qi盐对尿酸 (UA)形成和排泄的影响。方法 :通过体外测定黄嘌呤氧化酶 (XO)抑制率来观察Qi盐对UA形成的影响 ;通过对高尿酸血症模型大鼠的血清和尿液UA含量的测定 ,以及大鼠酚红 (PSP)排泄试验来观察Qi盐对UA排泄的影响。结果 :①同等浓度下 ,Qi盐对XO的抑制百分率显然高于海盐 ;同时XO的抑制百分率随Qi盐的含量增加而增大 ;Qi盐的IC50 为 174 .7mg·L-1;阳性药物别嘌醇的IC50 为 1.0 7mg·L-1。②用氧嗪酸钾盐制备的高尿酸血症大鼠模型中 ,Qi盐大、中、小剂量 ( 1.6 ,0 .8,0 .4g·kg-1)组在 1~ 5h期间能显著降低血清UA水平 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,且呈一定的量 效关系。Qi盐 3个剂量组和海盐组均能显著地增加高尿酸模型大鼠的排尿量和UA排泄总量 (P均 <0 .0 1)。③Qi盐 (在 0 .1~0 .4g·kg-1)对大鼠的PSP排泄试验 ,未观察到对肾小管重吸收和分泌功能的影响。结论 :Qi盐在体外具有一定的抑制XO的活性 ,能降低高尿酸血症模型大鼠的血清UA水平并可增加UA排泄量 ,且呈一定的量 效关系 ; 展开更多
关键词 Qi盐 尿酸 形成 排泄 影响 黄嘌呤氧化酶 别嘌醇 血清尿酸 氧嗪酸钾
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云纹石斑鱼封闭式苗种培育技术研究 被引量:2
6
作者 张春禄 陈超 +6 位作者 王鲁 黄蓉 盐崎雅史 神谷高广 邵彦翔 张梦淇 张廷廷 《水产科技情报》 2016年第6期291-297,共7页
采用封闭式育苗技术进行了云纹石斑鱼苗的人工培育试验,即在整个育苗过程中不换水,通过向水体中注入纯氧、添加EM菌和水产养殖环境改善剂调节育苗水体中的理化因子,并通过油膜收集装置及时清理污物,保持水质稳定。试验过程中测定了育苗... 采用封闭式育苗技术进行了云纹石斑鱼苗的人工培育试验,即在整个育苗过程中不换水,通过向水体中注入纯氧、添加EM菌和水产养殖环境改善剂调节育苗水体中的理化因子,并通过油膜收集装置及时清理污物,保持水质稳定。试验过程中测定了育苗水体中相关理化因子和鱼苗数量的变化,观察并记录了鱼苗的生长和摄食情况。苗种培育试验中,水温为24.0~30.2℃,p H 6.31~7.98,盐度30~32,溶氧量在6 mg/L以上,理化因子基本稳定。试验结果表明:云纹石斑鱼仔稚鱼的全长、肛前距、体高和日龄之间存在显著相关关系。全长与日龄的关系式为y=0.0095x^2+0.0407 2x+2.093 8,R^2=0.988 7;肛前距与日龄的关系为y=0.0050x^2+0.005 0x+0.925 0,R^2=0.990 0;体高与日龄的关系为y=0.002 0x^2-0.000 0x+0.829 0,R^2=0.993 0。云纹石斑鱼7日龄仔鱼的胃肠饱满度平均为1.087,平均摄食量为16.7个轮虫;18日龄仔鱼胃肠饱满度平均为1.877,平均摄食量为87个轮虫,与7日龄仔鱼相比,其摄食量明显增加。云纹石斑鱼仔鱼摄食具有明显的昼夜节律,摄食高峰在16:00~18:00,属于白天摄食型,晚上基本停止摄食。苗种生产试验结果:受精卵总量为1.604 kg,共孵化仔鱼1.01×10~6尾,孵化率为57.7%;初孵仔鱼经41 d培育后,共获得稚鱼1.70×10~5尾,成活率为16.8%,畸形率10%。 展开更多
关键词 云纹石斑鱼 封闭式 苗种培育 EM菌
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Qi盐对正常及糖尿病模型大鼠血糖的影响(英文)
7
作者 翁鸿博 张一鸣 +4 位作者 李端 程能能 黄维蓉 佐藤稔 上田秀夫 《中国临床药学杂志》 CAS 2004年第4期196-198,共3页
目的:观察Qi盐对正常小鼠和糖尿病模型大鼠的降血糖作用。方法:尾静脉注射四氧嘧啶制作大鼠糖尿病模型,连续灌胃给Qi盐14 d,葡萄糖氧化酶法测血糖。结果:Qi盐1.6,0.8,0.4 g·kg-1对正常小鼠血糖及糖耐量均无明显影响,但0.8,0.4 g... 目的:观察Qi盐对正常小鼠和糖尿病模型大鼠的降血糖作用。方法:尾静脉注射四氧嘧啶制作大鼠糖尿病模型,连续灌胃给Qi盐14 d,葡萄糖氧化酶法测血糖。结果:Qi盐1.6,0.8,0.4 g·kg-1对正常小鼠血糖及糖耐量均无明显影响,但0.8,0.4 g·kg-1可降低四氧嘧啶模型大鼠血糖,改善糖耐量。结论:Qi盐对糖尿病模型大鼠有降血糖作用。 展开更多
关键词 Qi盐 糖尿病 动物模型 大鼠 降血糖
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Qi盐对肾性和自发性高血压大鼠血压的影响(英文)
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作者 翁鸿博 张一鸣 +5 位作者 李端 程能能 黄维蓉 佐藤稔 上田秀夫 张瑞雯 《中国临床药学杂志》 CAS 2005年第1期6-8,共3页
目的 观察Qi盐对肾性和自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用。方法 通过缩窄左肾动脉而制备2K1C夹的肾性高血压模型,同时选用16周龄的SHR ,2种实验鼠均连续给予Qi盐0 . 4、0 .2、0 .1g·kg-1,14d(ig,qd) ,观察其对肾性和SHRBP的影... 目的 观察Qi盐对肾性和自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用。方法 通过缩窄左肾动脉而制备2K1C夹的肾性高血压模型,同时选用16周龄的SHR ,2种实验鼠均连续给予Qi盐0 . 4、0 .2、0 .1g·kg-1,14d(ig,qd) ,观察其对肾性和SHRBP的影响。结果 Qi盐各剂量组及普通盐组对肾性高血压模型鼠BP在用药d 7、14均无明显的影响,而对SHR ,Qi盐0 .4、0 .2g·kg-1给药7d后可显著降低BP ,与对照组相比,P <0 .0 5 ,但14d后BP有所回升。结论 Qi盐对肾性高血压模型无明显的治疗作用,但在给药7d后能显著地降低SHR的BP。 展开更多
关键词 Qi盐 肾性高血压 自发性高血压
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β-脲基丙酸酶缺陷症的研究进展 被引量:12
9
作者 赵宁 张春花 《发育医学电子杂志》 2017年第2期114-117,共4页
尿嘧啶和胸腺嘧啶的代谢过程需要二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DHPDH)、二氢嘧啶酶(dihydropyrimidinase,DHP)和β-脲基丙酸酶(β-Ureidopropionase,β-UPse)的参与。
关键词 酸酶 缺陷症 二氢嘧啶脱氢酶 二氢嘧啶酶 代谢过程 胸腺嘧啶 尿嘧啶
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蔗糖酯作增塑剂制备生物可降解塑料的研究(淀粉/聚已酸内酯掺混物)
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作者 Sriroth,K Chollakup,R +4 位作者 Piyachcmkwan,k Tokiwa,Y C.G.Oates 韦振雷 梁智 《木薯精细化工》 2000年第1期10-16,共7页
用部分水合木薯淀粉(PS,10%H2O)和水合木薯淀粉(HS,30%H2O)与聚已酸内酯(PCL)制备成木薯淀粉/聚已酸内酯掺混物。以蔗糖硬脂酸酯即蔗糖酯(SE)作增塑剂包埋(添加)入(添加量为10-20%w/w)木薯淀粉/聚已酸内酯掺混物中,研究其增塑... 用部分水合木薯淀粉(PS,10%H2O)和水合木薯淀粉(HS,30%H2O)与聚已酸内酯(PCL)制备成木薯淀粉/聚已酸内酯掺混物。以蔗糖硬脂酸酯即蔗糖酯(SE)作增塑剂包埋(添加)入(添加量为10-20%w/w)木薯淀粉/聚已酸内酯掺混物中,研究其增塑效果。差示扫描量热计测量该均匀掺混物的热行为表明,添加SE对PCL/PS和PCL/HS的热性质有影响,表现为起始软化温度、峰值温度及焓均降低,且降低值大小决定于SE添加量。以抗张强度和伸长率表示的力学性能,即使掺混物中SE添加量高达20%,其力学性能也没有降低。PCL/PS的热熔融粘度高于PCL/HS。但是添加SE后,此两种掺混物均表现为相似的低粘度,易于机械加工。两种掺混物水溶性和脂肪酶降酶降解性也同样相似,且包埋入SE对其不产生影响。相反的是,α-淀粉酶对PCL/HS的生物可降解性高于PCL/PS,但添加入SE后,α-淀粉酶对PCL/HS的生物可降解性低至接近PCL/PS,可能是添加SE后改变了淀粉包埋于掺混物中的颗粒结构所致。扫描电子显徽镜观察添加SE的PCL/HS掺混物表明,其包埋的淀粉颗粒结构和PCL/PS掺混物一样,仍保持颗粒的完整性。这可能是因为SE和HS两者之间对水亲合竞争的结果引起。改变SE添加量,可优化掺混物粘度,也可控制掺混物中淀粉颗粒的包埋结构。 展开更多
关键词 蔗糖酯 木薯淀粉 聚已酸内酯 生物可降解塑料 增塑剂
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麻疹病毒中国株与日本株的H蛋白及抗原性比较 被引量:9
11
作者 周剑惠 陈超 +8 位作者 刘桂艳 傅军 林琳 刘影 郝旭 谢伟 田丽敏 王兆南 中山哲夫 《中国计划免疫》 2003年第2期105-108,共4页
198 4年以来日本分离的本土麻疹野病毒为C1、D3、D5基因型 ,中国自 1993年以来流行的绝大多数麻疹野病毒为H1基因型。 2 0 0 0年在日本东京检测到 1株由中国输入的H1基因型麻疹野病毒。对该中国株H1基因型与日本株C1、D3、D5基因型的H... 198 4年以来日本分离的本土麻疹野病毒为C1、D3、D5基因型 ,中国自 1993年以来流行的绝大多数麻疹野病毒为H1基因型。 2 0 0 0年在日本东京检测到 1株由中国输入的H1基因型麻疹野病毒。对该中国株H1基因型与日本株C1、D3、D5基因型的H蛋白及抗原性进行了比较 ,结果表明 :H1基因型H蛋白的分子量为 78kD ,与A、C1基因型相似 ;D3、D5基因型的H蛋白的分子量为 80~ 82kD ,一些D3基因型在 39℃与在 33℃、37℃生长一样好 ,但其它基因型在 39℃生长却减少到 33℃、37℃的 1/ 10 0或 1/ 10 0 0。实验证实 ,一些D3、H1基因型能从较低的中和抗体水平逃逸 ,证明最近流行的麻疹病毒有轻微的抗原改变。 展开更多
关键词 麻疹病毒 中国株 日本株 H蛋白 抗原性比较
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女性鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症一例 被引量:13
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作者 王颖 罗亮 +2 位作者 张春花 郭在晨 杨艳玲 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期349-349,共1页
关键词 鸟氨酸甲酰基转移酶缺乏 OPCD 病例报告 儿童
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不同光照条件黄鳍鲷仔鱼摄食行为及其规律初探 被引量:2
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作者 张春禄 陈超 +6 位作者 李炎璐 王鲁 陈世峰 张梦琪 邵彦翔 大田智 盐崎雅史 《齐鲁渔业》 2015年第11期1-5,共5页
对不同光照强度下的黄鳍鲷(Sparuslatus)仔鱼摄食量进行了初步测定,在0~1500lx的光照强度范围内,黄鳍鲷仔鱼摄食的适宜光照强度范围为100~500lx,低于或高于此照度范围,都会影响黄鳍鲷仔鱼的摄食,其摄食效率在第一时间段(0-10... 对不同光照强度下的黄鳍鲷(Sparuslatus)仔鱼摄食量进行了初步测定,在0~1500lx的光照强度范围内,黄鳍鲷仔鱼摄食的适宜光照强度范围为100~500lx,低于或高于此照度范围,都会影响黄鳍鲷仔鱼的摄食,其摄食效率在第一时间段(0-10分钟)达到最高,其后随着时间的延长,仔鱼的摄食效率逐渐降低,直至停止摄食。在不同光照强度的实验里,100~250lx的光照强度范围内,仔鱼各个时段的平均摄食褶皱臂尾轮虫量均高于7个/尾。结合实验和日常生产观察,黄鳍鲷仔鱼属于晨昏型摄食类型,即在清晨和黄昏时,摄食强烈。 展开更多
关键词 黄鳍鲷 光照 摄食行为 摄食规律
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中国麻疹野病毒基因型快速诊断方法的建立 被引量:9
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作者 周剑惠 陈超 +13 位作者 刘桂艳 许强 张燕 朱贞 张运祥 田鑫 曹凤瑞 宋和 徐羽迪 王兆南 于瑞兰 徐力 中山哲夫 许文波 《中国计划免疫》 2004年第6期366-370,共5页
研究建立了一种适用于中国现流行麻疹野病毒基因型的基因型别筛查、定型的分析方法 ,即逆转录 聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 (RT PCR RFLP)。首先对RT PCR方法的敏感性和特异性进行了实验证明 ,对 1 1株麻疹病毒提取... 研究建立了一种适用于中国现流行麻疹野病毒基因型的基因型别筛查、定型的分析方法 ,即逆转录 聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 (RT PCR RFLP)。首先对RT PCR方法的敏感性和特异性进行了实验证明 ,对 1 1株麻疹病毒提取核糖核酸 (RNA) ,逆转录套式PCR扩增后全部出现阳性特异条带。在同样的反应条件下 ,扩增 6种不同基因型麻疹病毒 9株 ,同时又扩增其它非麻疹病毒。结果 9株 6种基因型麻疹病毒RT PCR均呈现阳性条带 ,说明本研究采用的RT PCR方法敏感。而非麻疹病毒RT PCR结果为阴性 ,均未见阳性条带 ,说明该RT PCR方法特异。根据H1 和H2 基因型麻疹病毒分别被不同的限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ切割成不同大小的基因片段 ,建立RFLP快速基因定型方法。之后 ,对建立的RFLP方法的特异性和敏感性进行了实验证明。利用该方法对吉林省连续两年分离到的 9株麻疹野病毒 [已经过中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室脱氧核糖核酸 (DNA)序列分析证实为H1 基因型 ]进行验证 ,结果均为H1 基因型麻疹病毒 ,证实该PCR RFLP结果与序列分析结果一致 ,也说明该方法敏感。同时 ,又对 7种不同基因型麻疹病毒应用PCR RFLP方法进行实验 ,结果只有H1 和H2 基因型麻疹病毒被限制性内切酶SalⅠ和BamH? 展开更多
关键词 麻疹病毒 逆转录-聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 电泳 序列分析 敏感性 特异性
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禽多杀性巴氏杆菌C48-3株ompH基因敲除突变株的构建及其生物学功能 被引量:8
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作者 吾鲁木汗.那孜尔别克 张宇凤 +2 位作者 龚凤娟 泽田拓士 恩特马克.布拉提白 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期66-73,共8页
【目的】探讨ompH基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因,两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH,将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中,通过四环素抗性和菌... 【目的】探讨ompH基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因,两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH,将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中,通过四环素抗性和菌落PCR筛选ompH基因的敲除突变株,并通过组合PCR、逆转录PCR和DNA测序对突变株进行验证。用生物学功能实验比较野生株、互补株和突变株在生长速率、荚膜结构、粘着能力和致病性等方面的差异。【结果】组合PCR、逆转录PCR和DNA测序结果证实ompH基因的敲除突变株C48-3ΔompH构建成功,电镜观察结果证实ompH基因的缺陷影响细菌的荚膜合成能力,粘附实验结果显示与野生株C48-3和互补株C48-3C相比突变株C48-3ΔompH对CEF细胞的粘附能力显著降低(P<0.01),而小鼠毒力实验结果表明突变株C48-3ΔompH的致病性相对减弱。【结论】本实验构建的突变株C48-3ΔompH,为进一步研究多杀性巴氏杆菌的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompH基因 敲除突变 粘附 致病性
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