COS/TPC同源重组法高效制备人B7(CD80)重组腺病毒

利用ＲＴ－ＰＣＲ克隆出共刺激分子人Ｂ７的全部编码ｃＤＮＡ，将其插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘｌｃｗ，选择左向转录的ＣＤ８０重组腺病毒载体ｐＡｘｌｃｗ，ＣＩｈＣＤ８０，与经ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＧＡ－末端太复合物共转染２９３细胞，通过同源重组获得人ＣＤ８０的笔制缺陷性重组腺病毒，扩增到的病毒嘀度为４×１０＾９ｐｆｕ／ｍｌ．

复制缺陷型人IL-2重组腺病毒的制备与鉴定

目的将人ＩＬ－２的重组腺病毒载体与Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ末端肽复合物同源重组，高效制备人ＩＬ－２的复制缺陷型重组腺病毒，并进行体外表达和活性检测。方法将含全部编码序列的人ＩＬ－２ｃＤＮＡ置于真核表达载体ｐＣＩｃｃ的ＣＭＶ启动子下游，切出含ＣＭＶ启动子、人ＩＬ－２ｃＤＮＡ和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号肽序列的ＣｌａＩ片段，插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘｌｏｗ，选择左向转录的人ＩＬ－２重组腺病毒载体ｐＡｘｌｃｗ．ＣＩｈＩＬ－２与经ＥｃｏＴ２２Ⅰ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ－末端肽复合物共转染２９３细胞；通过同源重组获得人ＩＬ－２的复制缺陷型重组腺病毒；体外转染人宫颈癌ＨｅＬａ细胞、人Ｔ细胞淋巴瘤Ｈｕｔ７８细胞和原代人皮肤成纤维细胞。结果扩增到的病毒滴度达２．１×１０９ＰＦＵ／ｍｌ；体外转染的人肿瘤细胞均检测到ＩＬ－２的表达（４００～２６００Ｕ／１０６细胞／２４小时）。结论所制备的复制缺陷型重组腺病毒能有效介导人ＩＬ－２的基因转移，可望用于肿瘤基因治疗的临床研究。