OK-432增强CPT-11抗肿瘤活性的实验研究

目的:探讨OK-432增强CPT-11抗肿瘤活性的机制。方法:将荷B16黑色素瘤的C57BL/6小鼠随机分为对照组、CPT-11治疗组、联合治疗组,于接种后第3天腹腔分别注射生理盐水、CPT-11、CPT-11加OK-432。观察肿瘤生长体积;测定各组脾细胞分泌的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ,并在体外观察了SN-38对OK-432刺激这些细胞因子分泌的影响。结果:OK-432显著增强CPT-11对B16黑色素瘤生长的抑制(P<0.05);CPT-11在体内显著抑制小鼠脾细胞IL-12和IFN-γ的分泌,与OK-432联合使用显著增加小鼠脾细胞IL-2、IL-6、IL-12和IFN-γ的分泌(P<0.05);在体外SN-38对OK-432刺激的IL-6、IL-12分泌无显著影响(P>0.05)。结论:OK-432在体内可通过刺激IL-12和Th1细胞因子的分泌,增强CPT-11的抗肿瘤活性。

OK-432与化疗剂联合腹腔用药治疗癌性腹水的疗效观察与机制探讨

目的:观察OK-432与MMC、5-FU联合腹腔给药治疗癌性腹水的疗效,并探讨这种联合用药的优势机理。方法:对34例腹腔恶性肿瘤合并癌性腹水患者采用MMC6mg/m2、5-FU0.5g/m2、OK-4325KE腹腔给药,1次/周,观察临床疗效与不良反应。测定了荷瘤小鼠腹水中细胞因子在OK-432腹腔给药前后的变化。结果:OK-432联合5-FU、MMC腹腔给药治疗癌性腹水的总有效率(CR+PR)为70.6%,其中CR为41.2%、PR为29.4%;患者的中位生存期为144天;腹水中癌细胞消失率为35.3%。主要不良反应有发热(6例体温超过38.5℃),粘连性肠梗阻(3例)。OK-432腹腔给药可使荷瘤小鼠腹水中IL-12、IFN-γ的浓度显著升高,IL-10的浓度显著降低(P<0.01)。结论:OK-432在腹腔内可诱导IL-12、IFN-γ的产生、抑制IL-10的分泌,从而增强化疗剂的疗效。与MMC、5-FU联合腹腔应用,能有效地控制恶性腹水,提高患者的生活质量,延长生存期。

血浆k-ras基因突变检测对胆道系统癌的诊断意义

探讨胆道系统癌患者外周血中是否存在ｋ－ｒａｓ基因突变及其诊断价值。方法 提取血浆DNA，通过ｍｕｔａｎｔ ａｌｌｅｌｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＭＡＳＡ）方法检测ｋ－ｒａｓ基因codon １２突变。结果 7例胆囊癌中5例ｋ－ｒａｓ基因突变阳性（１７．４％），６例肝内胆管细胞癌和3例总胆管癌中分别有2例（３３．３％）及1例（３３．３％)ｋ－ｒａｓ基因突变检测阳性。ｋ－ｒａｓ基因突变检测阳性而血清CA１９－９、CEA水平均正常者胆囊癌、肝内胆管细胞癌与总胆管癌各1例。结论 胆道系统癌外周血中存在肿瘤DNA，特别是胆囊癌检测血浆ｋ－ｒａｓ基因突变具有较高的诊断意义。

胆道系统癌与血浆k-ras基因突变检测

目的探讨胆道系统癌患者外周血中是否存在k -ras基因突变及其诊断价值。 方法提取血浆DNA ,通过突变等位基因特异性扩增 (MASA)方法检测k -ras基因codon1 2突变。 结果 7例胆囊癌中 5例k -ras基因突变阳性 (71 .4% ) ,6例肝内胆管细胞癌和 3例总胆管癌中分别有 2例 (33.3% )及 1例 (33.3% )k -ras基因突变检测阳性。k -ras基因突变检测阳性而血清CA19-9、CEA水平均正常的胆囊癌、肝内胆管细胞癌与总胆管癌各 1例。 结论胆道系统癌外周血中存在肿瘤DNA ,特别是胆囊癌检测血浆k -ras基因突变具有较高的诊断意义。

OK-432对荷瘤小鼠脾细胞IL-12及Th1细胞因子分泌的诱导作用

目的 :探讨溶血链球菌冻干制剂OK 4 3 2的抗肿瘤机理。方法 :B16黑色素瘤细胞接种于C5 7BL/ 6小鼠皮下 ,3d后腹腔注射 1KU的OK 4 3 2 ,每周 1次 ,连续 3周。观察肿瘤生长体积及荷瘤小鼠的生存期 ,并测定了OK 4 3 2在体内、体外对荷瘤小鼠脾细胞IL 2 ,IL 4 ,IL 6,IL 10 ,IL 12 ,IFN γ分泌的影响。结果 :OK 4 3 2能显著抑制B16黑色素瘤的生长 ,延长荷瘤小鼠的生存期 (P <0 .0 5 ) ;在体外OK 4 3 2可刺激荷瘤小鼠脾细胞IL 6,IL 10 ,IL 12 ,IFN γ的分泌 (P <0 .0 1) ;腹腔注射OK 4 3 2后荷瘤小鼠脾细胞IL 2 ,IL 12 ,IFN γ的分泌显著增加 ,而IL 10显著减少 (P <0 .0 5 ) ,提示OK 4 3 2治疗后荷瘤小鼠脾细胞Th1增加 ,Th2 相对减少。结论 :OK 4 3 2在体内可通过诱导荷瘤小鼠脾细胞IL 12的分泌 ,促进Th0向Th1分化 ,使宿主的免疫功能处于Th1优势状态 。

OK-432增加肿瘤局部IL-12阳性细胞浸润

目的 :探讨溶血链球菌制剂OK - 432的抗肿瘤机理。方法 :B16黑色素瘤细胞接种于C5 7BL/ 6小鼠皮下 ,3d后腹腔注射1KE的OK - 432 ,每周 1次 ,连续 3周。观察肿瘤生长体积 ,并采用ELISA法和ABC免疫染色法分别测定OK - 432治疗后荷瘤小鼠脾细胞IL - 12的分泌及肿瘤局部IL - 12阳性细胞的表达。结果 :OK - 432治疗能显著抑制B16黑色素瘤的生长 (P <0 .0 5 ) ;刺激荷瘤小鼠脾细胞IL - 12的分泌 (P <0 .0 5 ) ;诱导肿瘤局部IL - 12阳性细胞的表达。结论 :OK - 432可刺激荷瘤小鼠脾细胞IL - 12的分泌 ;增加肿瘤局部IL - 12阳性细胞的浸润 。

小鼠c-kit~＋Sca-1~＋和c-kit~＋Sca-1~－细胞代表不同分化阶段的造血干／祖细胞

为深入研究造血干细胞（ＨＳＣ）的生物学功能，根据表面标志，采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的ＨＳＣ亚群ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋和ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞。体外集落培养表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞对ＩＬ－３或ＧＭ－ＣＳＦ单独刺激无反应，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则可形成大小不等的细胞集落。多种造血生长因子［ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋Ｇ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ＋干细胞生长因子（ＳＣＦ）］联合可诱导ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞形成大的细胞集落，但在培养１２天时尚无ＢＦＵ－Ｅ和粒、单核、红和巨核系细胞集落（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）形成；而同样条件下，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞可形成ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＥＭＭ以及其它各类集落。体内实验表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞在培养８天时无脾集落（ＣＦＵ－Ｓ）形成，与ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞显著不同（Ｐ＜０．０１）。相反，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞包含了骨髓造血重建活性细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则缺乏。结果提示ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞为早期的具重建长期造血功能的干细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则为相对分化后期的造血祖细胞。

转导EB病毒转录的核内小RNA促进OSC-19细胞恶性化

目的 :通过转导EB病毒 (EBV)转录的核内小RNA (EBERs)探讨其对舌癌细胞株OSC 19细胞生长特性的影响。方法 :EBERs基因编码区序列是利用聚合酶链反应 (PCR)技术从EB病毒阳性的鼻咽癌 (NPC)细胞株NPC KT细胞中扩增出。为了在细胞内大量表达EBERs,利用分子生物学技术制作了EBERs片段的 4次重复排列 4EBERs和 10次重复排列 10EBERs,分别亚克隆到 pCEP4载体质粒并转染OSC 19细胞。利用North ernBlot法确定细胞内EBERs的表达后 ,对EBERs转染后的OSC 19细胞在培养中的生长特性、软琼脂中的细胞克隆的形成进行了观察。结果 :在培养中大量表达EBERs的OSC 19细胞之间丧失了细胞间的相互连接 ,细胞呈纺锤状 ,并在软琼脂中形成大量细胞克隆。而非表达EBERs的OSC 19细胞没有发现细胞生长特性的改变 ,在软琼脂中没有形成大量细胞克隆。结论 :EBERs的大量表达可以导致OSC 19细胞的分散活性和基质非依赖性 ,提示EBERs在上皮细胞株OSC 19细胞中有致癌作用 ;大量表达EBERs的OSC 19细胞为进一步研究EBERs的作用提供了一个有用的上皮细胞模型。