酶法制取罗非鱼鱼鳞胶原蛋白寡肽的工艺

利用酶工程技术,以罗非鱼鱼鳞为研究对象,研究开发罗非鱼鱼鳞胶原蛋白寡肽制品。以蛋白酶种类、底物浓度、酶解时间、加酶量、温度、pH为实验因素,以胶原蛋白的提取率、平均分子量等为指标,确定酶解最佳条件为:在pH6,温度50℃,底物浓度150 g/L,加酶量1%MG+1%HHM的条件下,水解12 h,可得胶原提取率为55%,平均分子量为920 u左右。

羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上骨髓间充质干细胞的增殖与分化

背景:最近胶原蛋白作为细胞体外三维立体支架材料被大量用于组织工程,但胶原蛋白支架材料机械强度低,很难承受较大外力,为此将胶原蛋白与羟基磷灰石制成复合支架材料,探索复合支架的生物相容性和生物活性。目的:验证大鼠骨髓间充质干细胞在羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上的增殖与分化情况。方法:贴壁法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别在平板、胶原支架、羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上,观察3种条件下细胞的生长状况,四甲基偶氮唑盐法检测其增殖情况。培养14,21d后,考察细胞碱性磷酸酶活性及胶原蛋白分泌量。结果与结论:发现骨髓间充质干细胞在羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上铺展良好,其增殖率显著高于纯胶原蛋白支架上培养的细胞,并高于平板培养细胞。骨髓间充质干细胞在羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上的碱性磷酸酶活性及胶原蛋白分泌量明显高于纯胶原蛋白支架,高于平板培养。结果提示,羟基磷灰石/胶原蛋白复合材料能促进骨髓间充质干细胞的增殖和分化,并诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。

部分哺乳动物和鱼类胶原蛋白中氨基酸的组成和含量的比较

采用日立L-8800型氨基酸自动分析仪分析了部分哺乳动物e和e各氨基酸含量的差异为胶原蛋白的合理开发应用提供参考。结果表明各样品中均含有18种氨基酸,其中必需和半必需氨基酸有8种,但苏氨酸(Thr)、蛋氨酸(Met)和羟脯氨酸(Hyp)含量有明显差别。

罗非鱼鱼鳞胶原蛋白多肽对小鼠成骨细胞增殖与Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响

目的研究不同分子量的罗非鱼鱼鳞胶原蛋白多肽对体外培养新生小鼠颅骨MC3T3-E1细胞增殖与Ⅰ型胶原蛋白分泌及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法采用WST-8法测定胶原蛋白多肽对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖的影响,ELISA法检测胶原蛋白多肽对MC3T3-E1细胞Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响,采用real-time PCR分析不同分子量的胶原蛋白多肽对Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达的影响。结果胶原蛋白多肽能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.01)、促进MC3T3-E1细胞Ⅰ型胶原蛋白的分泌和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论罗非鱼鱼鳞胶原蛋白多肽能有效促进MC3T3-E1细胞增殖与Ⅰ型胶原蛋白分泌,分子量较小的多肽(917.3Da)作用更加明显。