二氢杨梅素的体外护肝作用:基于脂噬介导的LO2细胞脂质蓄积及HepG2细胞增殖

目的基于脂噬途径研究二氢杨梅素(DMY)对LO2细胞脂质蓄积的防治效果及其机制,并探索其对HepG2细胞的增殖抑制。方法FBS诱导LO2细胞建立脂肪变性模型,研究分别设置对照组:10%FBS-DMEM正常培养;模型组:50%FBS-DMEM;阳性对照组:100μg/mL DMY+10%FBS-DMEM;处理组(L-DMY组:50μg/mL DMY+50%FBS-DMEM;M-DMY组:100μg/mL DMY+50%FBS-DMEM;H-DMY组:200μg/mL DMY+50%FBS-DMEM)及恢复对照组:先50%FBS-DMEM培养,后10%FBS-DMEM培养。油红O染色测定脂滴累积。试剂盒测定TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性。AO染色观察自噬溶酶体数量,透射电镜观察自噬体数量。Western blot检测自噬蛋白LC3表达量。MDC染色观察自噬体形成情况,q-PCR测定LC3、ATG7、AMPK、mTOR、p62和Beclin1的mRNA表达水平。细胞周期阻滞实验分析HepG2细胞周期比例,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,细胞DNA断裂实验检测HepG2细胞DNA的完整情况。结果DMY干预和预处理可抑制LO2细胞的脂质蓄积,并且降低TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性,差异具有统计学意义(P<0.05);DMY可促进LO2细胞的自噬体和自噬溶酶体的形成,并促进自噬蛋白LC3的表达;DMY可减轻高FBS诱导的LO2细胞自噬体形成抑制,并上调LC3(P<0.01)、ATG7(P<0.01)、Beclin1(P<0.05)和AMPK(P<0.001)的mRNA水平,下调p62(P<0.001)和mTOR(P<0.001)的mRNA水平。DMY可阻滞HepG2细胞的有丝分裂和细胞增殖(53.90%vs 14.62%;32.31%vs 70.17%),诱导HepG2细胞的晚期凋亡(4.74%vs 57.86%)和DNA断裂。结论DMY通过调节AMPK/mTOR介导的脂噬途径减少LO2细胞的脂质累积,通过阻滞细胞周期和促进凋亡抑制HepG2增殖,发挥体外护肝作用。

攀登鱼藤异黄酮脂质体有较好的物理性能及抗乳腺癌细胞的增殖活性

目的制备和鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体并研究其抗乳腺癌作用。方法MTT法检测攀登鱼藤异黄酮、大豆异黄酮和金雀异黄酮对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF7、SKBR3)增殖活性影响;克隆形成实验探讨攀登鱼藤异黄酮对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)克隆形成的影响;细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移;蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞迁移和侵袭蛋白MMP2,MMP9表达量;薄膜水化法制备温敏脂质体及攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体;透射电子显微镜、动态光散射扫描仪以及紫外分光光度计分别鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体形貌、粒径、包封率及稳定性,并用MTT法检测攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体抗小鼠乳腺癌细胞(4T1)增殖活性。结果攀登鱼藤异黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF7、SKBR3)增殖,且效果优于大豆异黄酮和金雀异黄酮;攀登鱼藤异黄酮显著减少三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)克隆形成量,降低其划痕面积的愈合速度,并下调MMP2和MMP9的表达。薄膜水化法制备得到的温敏脂质体呈均质不规则球形,其粒径为56.23±0.61 nm、聚合物分散指数为0.241±0.014、Zeta电位为-40.40±0.46 mV、包封率为(87.68±2.41)%、稳定性较好,且抗小鼠乳腺癌增殖活性增强。结论攀登鱼藤异黄酮通过抑制乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭发挥其抗癌活性,攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体具有较好的物理性能及抗乳腺癌活性。