长效胰岛素高效反相制备工艺的研究

目的建立长效胰岛素反相纯化制备方法。方法通过筛选不同类型反相层析填料、不同成分流动相、不同洗脱梯度以及考查最大上样量,确定反相纯化方法:填料:Kromasil的C_8(100-10μm),流动相A是pH 7.5的Tris-HCl,B是乙腈,检测波长280 nm,线性流速:252 cm·h^(-1)。结果上样量1.1~1.6%(W/W)在的范围内,纯化收集样品纯度可达99%以上,得率90%以上。结论该纯化工艺可制备获得符合质量标准的合格样品,该方法具有分离效果好,成本低,易于放大等优点。

聚乙二醇重组人促红细胞生成素在食蟹猴体内的药代动力学检测方法

目的:建立2种灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以检测食蟹猴血浆中的聚乙二醇重组人促细胞生成素(EPO)含量。方法:建立了2套双抗夹心的ELISA方法对聚乙二醇重组人EPO进行定量,包括PEG特异性ELISA(检测完整药物)及EPO特异性ELISA(检测总EPO)。完整药物检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的生物素标记的兔抗PEG单抗(检测抗体)及链亲和素-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D_(450/600nm)值。总EPO检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的兔抗重组人EPO多抗-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D_(450/600nm)值。结果:建立并验证了2套ELISA方法,定量范围均为4~54 ng/mL,定量下限均为4 ng/mL,准确度和精密度(板内和板间)均在±15%之内(总EPO检测时以聚乙二醇重组人EPO为标准品),同时室温稳定性、冻融稳定性、长期稳定性及稀释线性(空白猴血浆稀释)均良好。结论:方法学确证表明,2套ELISA方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量测定食蟹猴血浆中聚乙二醇重组人EPO的浓度。

明胶水解产物的抗氧化性研究

明胶作为一种高分子质量的水溶性蛋白非均匀混合物,富含甘氨酸、脯氨酸等氨基酸成分,现已被广泛的进行应用研究。国内外研究发现,相比于其他蛋白来源的多肽来说,明胶来源的多肽具有更高的抗氧化活性。因此,作为促进人体健康的潜在成分,明胶水解产物越来越受到人们的广泛关注。本文的目的是对明胶水解产物的抗氧化性研究做简单介绍。