TET1基因对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨TET1基因表达水平对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法采用RT-qPCR检测正常支气管上皮细胞及肺癌细胞株中TET1基因的表达水平;通过构建TET1基因过表达和敲低表达肺癌细胞模型,采用划痕愈合实验和Transwell实验分析TET1基因不同表达水平对肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响;通过RT-qPCR和蛋白印迹法对TET1下游调控基因β-catenin(CTNNB1)、MMP7的mRNA及蛋白表达水平进行检测并确定其可能的信号通路。结果多种肺癌细胞中TET1基因表达水平较之正常支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,HBE)均呈现显著下降(P<0.01)。过表达TET1基因可明显抑制肺癌细胞迁移和侵袭能力,而敲低TET1基因表达水平后肺癌细胞侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01);mRNA及蛋白表达水平检测发现,过表达TET1基因后其下游基因CTNNB1、MMP7的表达水平明显下降(P<0.01),而敲低TET1基因表达后其下游基因CTNNB1、MMP7的表达水平显著上升(P<0.01)。β-catenin信号通路抑制剂处理可显著降低TET1对肺癌细胞迁移和侵袭的作用。结论 TET1基因表达在多种肺癌细胞株中显著下降。TET1基因可能通过Wnt/β-catenin信号通路及其关键基因CTNNB1、MMP7的表达水平抑制肺癌细胞的迁移及侵袭。

慢性尼古丁成瘾大鼠脑组织中Tet1蛋白水平及Npas4基因甲基化水平研究

目的探讨慢性大鼠尼古丁成瘾过程中Tet1蛋白表达水平及Npas4基因甲基化水平变化及意义。方法通过背部连续注射尼古丁酒石酸氢盐构建大鼠慢性尼古丁成瘾动物模型,应用Western blot对各组实验大鼠脑组织Tet1蛋白表达水平进行测定;应用选择性化学标记SMRT测序对大鼠海马区域及大脑皮质中5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)与5-甲基胞嘧啶(5mC)水平进行测定,获得5hmC与5mC在脑内的动态变化;应用甲基化特异性PCR(MSP)结合RT-PCR对大鼠海马区、大脑皮质中Npas4基因甲基化、mRNA和蛋白表达情况进行测定;应用荧光分光光度法对慢性尼古丁成瘾大鼠脑内神经递质多巴胺(DA)、乙酰胆碱(AC)、阿啡肽(EOPs)及五羟色胺(5-HT)含量进行测定。结果通过构建慢性尼古丁成瘾大鼠动物模型应用Western-blot对各组大鼠脑内Tet1蛋白表达水平测定结果发现,在大鼠海马区中尼古丁成瘾组大鼠Tet1蛋白表达水平明显低于非尼古丁成瘾大鼠(P<0.05),进一步对5hmC与5mC水平测定发现,大鼠海马区中尼古丁成瘾大鼠组出现5hmC显著下降而5mC明显升高(P<0.05);通过对Npas4基因甲基化及mRNA及蛋白表达水平进行测定发现,在大鼠海马区域中尼古丁成瘾大鼠脑内Npas4基因呈现高甲基化情况,而Npas4基因mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05);对各组大鼠脑内神经递质浓度检测发现,大鼠海马区中尼古丁成瘾组大鼠脑内神经递质浓度多巴胺(DA)、乙酰胆碱(AC)、内啡肽(EOPs)及五羟色胺(5-HT)均高于非尼古丁成瘾大鼠组(P<0.05)。结论在大鼠慢性尼古丁成瘾形成过程中大鼠脑组织海马区Tet1蛋白表达水平下降,且可以影响大鼠脑组织中5hmC与5mC水平,进而影响Npas4基因甲基化程度及神级递质变化从而参与尼古丁成瘾的形成。