医学生物化学与分子生物学多媒体教学体会

以多媒体为主体的医学生物化学与分子生物学教学方法已成为高校课堂的主要教学模式，它具有传统教学所无法比拟的优越性，但仍需要不断完善，即坚持以学生为主体、教师为主导的原则，在教学中突出重点和难点，培养学生勤于实践的能力，同时加强教师自身修养以适应和提高现代化教育。

互动式教学模式在医学分子生物学教学中的应用

目的探讨互动式教学法在分子生物学课堂教学中的效果.方法 2007级和2008级本科学生的分子生物学课程教学中尝试了互动式教学模式,并对这两个年级的学生进行问卷调查.结果绝大部分学生认为互动式课堂教学能激发学习兴趣,提高自学能力、思考能力、创新能力、语言表达能力,能增进团队合作精神,能较好地引导本学科与相关学科知识的联系.结论互动式教学有利于培养学生的创新能力,提高学生的综合素质,在医学分子生物学课堂教学中的尝试是基本成功的.

提高生物化学与分子生物学教学质量的思考

生物化学与分子生物学是基础医学学科中的重点和难点学科,同时也是开展医学研究的基础学科。但因其研究内容晦涩难懂,理论和技术又发展迅速,因此采取行之有效的教学措施以及合理的考核体系来提高教学质量就显得格外重要。从教师素质的自我提高,教学方法及教学手段的改进,综合性实验的开展以及科学合理考核体系的建立等方面来推行教学改革,以达到激发学生的学习兴趣,协调教与学的关系,为最终提高教学质量、培养创新性优秀医学人才而努力。

人带3蛋白的分子生物学研究进展

带３蛋白是一种广泛分布于组织细胞的多功能嵌膜蛋白，主要执行细胞阴离子交换功能。人带３蛋白已在多种细胞内表达成功，原位带３蛋白存在多种翻译后修饰且与其功能和病理相关。带３蛋白基因交变除了产生多态性外，还引起遗传性球形红细胞症、肾远曲小管酸化症以及红细胞某些血型抗原的产生或消失等表现。

案例式教学法在医学生物化学教学中的实施与思考

医学生物化学是一门重要的医学基础课程，但其理论抽象，教师难教；学生难学，不知学习这些理论知识有何用处。通过案例式教学法在医学生物化学中的应用，激发学生的学习兴趣，加强学生学习生化的主观能动性，培养学生科研思维，为提高教学质量、探讨新的教学模式、深化教学改革，找到一条有效的教学途径。

siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-U6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-timePCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PD!).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD!的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P<0.05),凋亡细胞数增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<0.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P<0.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人黑色素瘤细胞周期的进程

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在人皮肤黑色素瘤A375细胞中处于高表达与高活性状态,但G6PD在黑色素瘤发生发展过程中的作用及其具体机制尚不明确.本文在前期运用siRNA方法构建G6PD敲减的黑色素瘤A375稳转细胞(A375-G6PDΔ)基础上,构建表达载体pBabe-puro-G6PDWT在A375-G6PDΔ细胞中过表达野生型的G6PD基因,从而构建G6PD表达恢复的稳转细胞(A375-G6PDΔ-G6PDWT).3株细胞A375-WT、A375-G6PDΔ和A375-G6PDΔ-G6PDWT经G6PD酶活性测定、MTT测定、克隆形成实验、流式细胞仪分析细胞周期和Western印迹检测.结果显示,A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞的G6PD蛋白表达量(0.847±0.080)及其活性(0.394±0.029)分别是A375-G6PDΔ的3.28倍(P<0.01)和7.34倍(P<0.01),分别是A375-WT细胞的91.57%和2.12倍(P<0.05).与A375-WT细胞相比,A375-G6PDΔ细胞G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,增殖指数PI降低了25.70%(P<0.05),细胞周期蛋白D1/D2、细胞周期蛋白E表达分别下降37.4%、54.3%(P<0.01)和17.3%;而A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞呈现G1/S期阻滞解除,细胞周期蛋白D1/D2蛋白分别恢复到A375-WT细胞的89.5%和87.6%,细胞周期蛋白E表达未见恢复,呈现生长增殖和克隆形成率的恢复并接近于A375-WT细胞.结果提示,G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人皮肤黑色素瘤A375细胞G1期向S期转换的进程,这为黑色素瘤发病机制的研究提供了新的思路.

胆固醇磷脂胆汁酸黏蛋白在胆囊结石结晶化过程中的作用

分别用正常饲料、致石饲料饲养对照组和致石组豚鼠。在饲养过程中的不同阶段动态观测豚鼠胆囊胆汁中总胆固醇、黏蛋白、总磷脂和总胆汁酸含量的变化,并在偏光显微镜下观察各阶段结晶核的形成和结石晶体的生长情况。结果发现,对照组豚鼠胆囊胆汁中的总胆固醇、黏蛋白、总磷脂和总胆汁酸的含量在整个饲养过程中基本保持不变,且胆汁中未见有形结石晶体出现;而致石组豚鼠胆囊胆汁中总胆固醇和黏蛋白含量逐渐升高,总磷脂和总胆汁酸含量却逐渐降低,与对照组相比,饲养10 d后就有显著性差异,饲养25 d后就有显著性差异,且随着饲养天数的增加,致石组豚鼠胆汁中的液晶微泡增多变大并发生聚集和融合,以胆汁液晶微泡融合体为晶核的晶体生长迅速展开并最终形成大量微结石晶体。表明在胆囊结石形成过程中胆汁液晶是一种基本的结晶核,液晶微泡的聚集和融合是形成晶体生长的关键性因素。胆固醇和黏蛋白起到了促成液晶微泡产生聚集并相互融合的促成核作用,而磷脂和胆汁酸起到的则是抗成核作用。

三叶因子的研究进展

三叶因子（trefoil factor,TFFs）是一类含一个或几个三叶因子结构域的分泌蛋白,该结构域是一段38或39个氨基酸的多肽,其中的6个半胱氨基以1-5,2-4,3-6配对的构型方式生成三对二硫键,从而形成典型的三叶状结构,此结构赋予TFFs家族蛋白耐酸、耐碱和耐蛋白酶水解的性质,同时也是其行使功能所必需的。

不同剂量的胸腺肽α1联合化疗后对肺癌患者细胞免疫功能的临床观察

目的研究不同剂量的胸腺肽对肺癌化疗患者细胞免疫功能的影响.方法105例肺癌患者随机分为三组:治疗1组(35例)在化疗的同时加胸腺肽α1 1.6 mg/次,皮下注射,连用14 d;治疗2组(35例)在化疗的同时加胸腺肽α1 200 mg/次,静滴14 d;对照组(35例)单独使用化疗,方案与综合治疗组相同.T细胞亚群及NK细胞的检测均采用流式细胞术.结果治疗组1和2组化疗第7天CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值和NK细胞百分率均明显高于单纯化疗组化疗后水平(P<0.05).化疗第14天,低剂量组(治疗1组)的CD4+、CD8+百分率、CD4+/CD8+比值和NK细胞比率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);而高剂量组(治疗2组)CD3+、CD4+百分率、CD4+/CD8+比值和NK细胞比率与化疗前及化疗后对照组相比明显提高(P<0.05).结论不同剂量的胸腺肽α1可在短期内提高恶性肿瘤化疗患者机体免疫功能.

G6PD缺乏患者红细胞膜蛋白氧化损伤的研究

目的研究G6PD缺乏患者红细胞膜蛋白氨基酸残基的氧化修饰,定量分析红细胞膜蛋白的氧化损伤程度.方法设置3组研究对象,分别是G6PD正常组和G6PD缺乏无急性溶血组;G6PD缺乏急性溶血组,用NDPH法分别测定各组红细胞膜蛋白活性羰基含量,荧光比色法测定色氨酸残基荧光强度的改变.结果(1)与正常组比较,G6PD缺乏无急性溶血组、G6PD缺乏急性溶血组的红细胞还原型谷胱甘肽含量下降,硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)水平显著升高;(2)G6PD缺乏无急性溶血组、G6PD缺乏急性溶血组的红细胞膜蛋白羰基含量均显著增加,色氨酸残基荧光强度显著下降;(3)G6PD缺乏急性溶血组与非急性溶血组差异之间红细胞TBARS、膜蛋白羰基含量、色氨酸残基荧光强度差异均无显著性(P>0.005).结论G6PD缺乏可引起红细胞膜脂质和蛋白氧化损伤,但这些损伤不是急性溶血的直接原因.

黑色素瘤发生发展中的表观遗传学调控

人恶性黑色素瘤(malignant melanoma)是近年来高发病率和高死亡率的肿瘤之一.目前尚缺乏有效的治疗方法.而表观遗传如DNA甲基化(DNA methylation)、组蛋白修饰(histonemodification)、染色质重塑(chromatin remodeling)及RNA干扰(RNA interference,RNAi)等改变在人黑色素瘤的发生、发展和转移中有重要作用.阐明黑色素瘤发生发展的表观遗传学机制已引起了学者的普遍关注.本文综述了人类黑色素瘤发生发展中所特异的表观遗传改变:CpG岛的异常甲基化修饰、组蛋白甲基化和乙酰化修饰、染色质重塑以及microRNA在黑色素瘤发生和转移中的作用,并对应用表观遗传修饰治疗人类黑色素瘤进行了探讨.

线粒体基因D—loop区在胃癌中的突变及多态性研究

目的线粒体基因(mitochondrialDNA,mtDNA)的突变通常被认为与肿瘤的形成有关,本研究检测胃癌组织mtDNA D—loop区的突变及多态性,以探讨两者的相关性.方法PCR扩增和测序检查胃癌组织和相应正常组织的线粒体基因D—loop区全序列,并与线粒体文库记录的Revised Cambridge Reference Se- quence(rCRS)进行比对分析.结果15例胃肿瘤中检测出mtDNA D—loop区的162个多态性变异,其中6个(3.7%)为新发现的变异.7例(46.7%)胃癌组织发现体细胞性突变共11次,突变热点集中在HVⅠ区(27.3%)和HVⅡ区(54.5%),并且HVⅡ区较HVⅠ区更易突变。结论D—loop区的高度多态性和突变与胃癌的发生具有相关性。

论著线粒体DNAND4基因12026(A→G)点突变与2型糖尿病相关性研究

目的研究中国云南2型糖尿病人群线粒体ND4基因nt12026A→G点突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性.寻求准确、快速、简易的临床糖尿病基因诊断方法.方法随机选取350例中国云南2型糖尿病患者和225例无糖尿病家族史的健康对照者作为研究对象.通过聚合酶链式反应及限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测线粒体12026A→G点突变.结果经DNA直接测序确证.结果350例2型糖尿病患者中12026A→G点突变者11例(3.14%),225例对照者中携带该突变者6例(2.67%),突变发生率在两组间差异无统计学意义(χ2=0.0059,P=0.8064).结论线粒体ND4基因12026A→G突变可能仅为人群中线粒体基因组的正常多态,不是中国(特别是云南)人群中2型糖尿病的常见致病因.

同型半胱氨酸对小鼠骨骼肌组织PDK1的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症中骨骼肌组织PDK1的变化,探讨同型半胱氨酸对葡萄糖摄取的影响.方法 20只6周健康小鼠随机分为对照组(10只)和高同型半胱氨酸血症组(10只).3个月饮水中加入蛋氨酸(1.5%)复制高同型半胱氨酸血症模型,测定进食状态下血糖浓度.免疫组化检测骨骼肌细胞PDK1、PDK1磷酸化和Akt磷酸化的改变.Western Blot检测骨骼肌细胞PDK1与PDK1磷酸化和Akt与Akt磷酸化的表达.结果与对照组比较,高同型半胱氨酸血症组进食血糖浓度增加(P<0.05),高同型半胱氨酸血症组骨骼肌细胞中PDK1、p-PDK1(Ser-241)和p-Akt(Thr-308)平均灰度值增加(P<0.05);高同型半胱氨酸血症组骨骼肌组织PDK1、p-PDK1(Ser-241)和p-Akt(Thr-308)蛋白质水平下调(P<0.05),Akt的表达无差异(P>0.05).结论同型半胱氨酸可能通过降低骨骼肌组织PDK1的表达和PDK1磷酸化,抑制对葡萄糖的摄取.

同型半胱氨酸对骨骼肌细胞GLUT4表达和分布的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症对骨骼肌细胞GLUT4表达和膜分布的改变,探讨同型半胱氨酸对葡萄糖摄取的影响.方法 20只6周健康小鼠随机分为对照组(10只)和高同型半胱氨酸血症组(10只),含1.5%的蛋氨酸饮水3个月制造高同型半胱氨酸血症模型;测定空腹状态下血糖和胰岛素;HE染色观察骨骼肌组织形态改变;免疫组织化学和Western Blot检测骨骼肌细胞GLUT4表达和细胞膜上分布.结果高同型半胱氨酸血症组与对照组比较空腹血糖和空腹胰岛素增加(P<0.05),骨骼肌组织结构完整,细胞膜上GLUT4分布降低,GLUT4蛋白质表达无明显差异(P>0.05).结论在骨骼肌组织中,同型半胱氨酸可能通过抑制GLUT4在细胞膜上分布,降低骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取.

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏红细胞膜唾液酸含量的改变

目的 :测定葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏时红细胞膜唾液酸的含量 ,以进一步了解G6PD缺乏溶血的机理 .方法 :以G6PD缺乏红细胞为研究对象 ,按常规方法分离红细胞膜 ,酸水解得到膜唾液酸 .利用反相高效液相色谱 -荧光法测定G6PD缺乏红细胞膜唾液酸的含量 .结果 :G6PD缺乏红细胞膜唾液酸含量明显低于正常红细胞 ,P <0 0 1.结论 :随着膜脂质过氧化作用和非酶糖基化的发展 ,唾液酸含量下降 ,从而导致膜表面负电荷减少 ,红细胞聚集 ,诱导红细胞形成缗线状红细胞簇 ,变形能力下降 ,并且使膜糖蛋白和糖脂次末端的半乳糖残基暴露 ,红细胞易被巨噬细胞识别并吞噬 .因此 ,红细胞膜唾液酸含量下降 ,可能是G6PD缺乏红细胞溶血的原因之一 .

肝肾疾病对血浆同型半胱氨酸水平的影响

目的探讨肝脏和肾脏在同型半胱氨酸(Hcy)代谢中的作用.方法选择健康正常人55例,肝硬化患者72例,慢性肾功能不全患者61例以及肝硬化合并肝肾综合征患者18例.血浆Hcy检测用高效液相色谱法.结果与对照组相比,肝硬化组、慢性肾功能不全组以及肝肾综合征组的血浆Hcy浓度均显著升高;肝肾综合征组血浆Hcy浓度显著高于肝硬化组或慢性肾功能不全组(P<0.01).结论肝脏和肾脏在Hcy的清除中均起重要作用,肝脏和肾脏功能受损均可造成血浆Hcy水平升高.

枫叶黄酮抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7细胞激活的作用

目的探讨枫叶黄酮对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导破骨前体细胞Raw264.7细胞炎性因子释放的抑制作用.方法用LPS(5 mg/mL)刺激Raw264.7细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测Raw264.7细胞的活力影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测一氧化氮(NO)和前列腺素E2,PGE2表达;运用免疫荧光染色方法检测诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶-2,COX-2、子肿瘤坏死因子-αTNF-α和白介素-1β,IL-1β、核因子-κB,NF-κB蛋白与mRNA的表达变化.结果不同浓度的枫叶黄酮明显抑制了LPS诱导的Row246.7细胞NO、PGE2,iNOS和COX-2,TNF-α和IL-1β与NF-κB的上调,并且NO、PGE2、iNOS、COX-2和NF-κB蛋白的表达呈剂量依赖性.结论枫叶黄酮可抑制LPS诱导的破骨前体细胞Raw264.7细胞iNOS、COX-2和NF-κB/P65蛋白表达和炎性因子释放从而抑制破骨细胞的激活.