CBL教学法在神经外科临床教学中的应用研究

神经外科专业性较强,但由于其为外科教学的非主干课程,内容较多而授课时间相对较少,因而讲授难度较大,传统的课堂教学难以将知识点与临床实际联系,进一步转变为临床技能.在神经外科临床教学中,我们采用以病例为基础的学习（case based learning,CBL）法,取得了良好的教学效果.

显微神经外科技术及翼点入路在鞍区肿瘤手术的应用

目的 :总结 98例鞍区肿瘤患者经翼点入路显微手术治疗及翼点入路应用体会 .方法 :按照翼点入路各项操作步骤行鞍区肿瘤切除 98例 ,介绍了操作方法并讨论显微神经外科技术在鞍区肿瘤手术中的应用 ,及不同部位肿瘤作相应手术操作调整的方法 .结果 :鞍区肿瘤应用翼点入路进行显微手术操作可良好显露鞍区及肿瘤各显微解剖结构以及手术操作平台 ,使其肿瘤全切率及患者预后得到明显提高 .结论

“泡沫敷料”在神经外科高危人群压疮预防中的应用探讨

目的:探讨"泡沫敷料"在高危人群压疮预防中的应用效果。方法:将68例高危人群压疮发生评估得分低于13分的病人随机分为传统组和改良组,传统组按常规皮肤护理,改良组用瑞墨尼克医疗服务器有限公司生产的"美皮康"泡沫敷料贴于患者骶尾部(是压疮好发部位),两组都进行常规定时翻身、定时临床观察患者骶尾部及骨突处皮肤情况。结果:改良组压疮发生率明显低于传统组。结论:应用"泡沫敷料"贴于压疮好发部位皮肤能有效预防压疮的发生,提高病人的生命质量。

视觉诱发电位在神经外科中的临床应用

视觉诱发电位(VEP)是大脑皮质枕叶区对视刺激发生的电反应,它反映了整个视觉传导通路的功能。随着视觉电生理技术的发展和完善,VEP检查的敏感性、稳定性均明显提高,VEP作为一项客观的电生理学指标,已被广泛应用于临床检测神经系统及眼科系统病变。在神经外科中颅内高压、颅内肿瘤、脑卒中等通过直接或间接作用造成视觉传导功能损害。

硬质神经内镜手术治疗分隔型慢性硬膜下血肿患者19例疗效观察

目的探讨硬质神经内镜手术治疗分隔型慢性硬膜下血肿(CSDH)的疗效。方法回顾性分析2009年3月至2011年3月收治的分隔型CSDH 19例患者应用硬质神经内镜手术治疗的方法及疗效。结果所有患者术后症状均明显改善。术后复查CT硬膜下血肿清除满意,随访1～17个月,无复发病例。结论硬质神经内镜手术治疗分隔型CSDH疗效满意。

基质细胞衍生因子1趋化神经干细胞迁移的体外效应

背景:神经干细胞的迁移在神经系统的发育和损伤修复中起着至关重要的作用,近来研究表明趋化因子参与神经干细胞的迁移,但关于其迁移机制目前尚不清楚。目的:观察体外条件下基质细胞衍生因子1对胎鼠海马神经干细胞的趋化迁移作用。方法:通过无血清法体外分离、培养及鉴定胎鼠海马神经干细胞;细胞免疫荧光及RT-PCR检测其CXCR4是否表达;观察不同浓度基质细胞衍生因子1对神经干细胞的趋化迁移作用,中和CXCR4受体以验证基质细胞衍生因子1趋化迁移作用的特异性。结果与结论:胎鼠海马来源神经干细胞表达趋化因子受体CXCR4,呈阳性。RT-PCR琼脂糖凝胶电泳后出现643bp特异性扩增条带。体外条件下基质细胞衍生因子1趋化迁移随浓度而增强,500μg/L为最佳趋化浓度。加入抗CXCR4多克隆抗体中和后,神经干细胞迁移较基质细胞衍生因子1组明显减少,与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05),提示抗CXCR4多克隆抗体可阻断趋化迁移作用。

颅脑损伤后内源性神经干细胞增殖与迁移中的基质细胞衍生因子1

背景:神经干细胞的迁移在颅脑损伤中起着极其重要的作用,但是其具体迁移机制尚不明确。目的:观察大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1在内源性神经干细胞的增殖与迁移中的作用。方法:采用Feeney’s等的方法用自制自由落体撞击器撞击大鼠左侧皮质运动感觉区以制备大鼠中度重型颅脑损伤模型,于伤后6h,3d,5d,7d灌注取脑,通过冰冻切片免疫组织化学检测Nestin及基质细胞衍生因子1表达,比较分析大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1和内源性神经干细胞的增殖与迁移之间的关系。并设正常对照组和假手术组做对照。结果与结论:颅脑损伤大鼠的神经行为学评分与对照组比较差异显著。冰冻切片免疫组织化学显示:伤后3d,基质细胞衍生因子1表达较对照组明显,海马区可见大量Nestin阳性细胞,未见向损伤区迁移;伤后5d和7d,基质细胞衍生因子1表达更明显,范围扩大,损伤区可见少量Nestin阳性细胞。对照组及假手术组未有上述改变。结果表明大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1表达时间推移越加明显,提示基质细胞衍生因子1参与内源性神经干细胞的增殖及向损伤区迁移的过程。

神经营养因子3基因修饰神经干细胞移植脊髓损伤的相关蛋白表达

背景:研究表明神经干细胞和神经营养因子3基因修饰的神经细胞联合移植能够在移植后存活并有效促进脊髓横断后脊髓的功能恢复,但神经营养因子3基因修饰的神经干细胞能否在脊髓受损部位发挥功能并促进脊髓损伤大鼠的功能恢复?目的:观察神经营养因子3基因修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复情况及损伤局部的基因表达。方法:将30只SD大鼠在T9水平进行脊髓半切后,随机分为3组,分别在受损脊髓内植入细胞培养液、神经干细胞及神经营养因子3基因修饰神经干细胞。另取10只仅行椎板切除设置为空白对照。移植后通过行为学测试评价脊髓功能的恢复,RT-PCR和Western blot检测脊髓损伤部位神经营养因子3和髓鞘碱性蛋白的表达。结果与结论:移植神经营养因子3基因修饰神经干细胞组行为学测试结果最好,移植细胞培养液组行为学测试最差。与移植细胞培养液组相比,移植神经干细胞及神经营养因子3基因修饰神经干细胞组大鼠脊髓组织中神经营养因子3基因和髓鞘碱性蛋白基因的mRNA水平明显上调,在蛋白水平也有类似的结果,且神经营养因子3基因修饰神经干细胞组效果更明显。提示移植神经营养因子3基因修饰神经干细胞能促进脊髓受损部位出现更多向少突胶质细胞分化的细胞,并能更强的表达神经营养因子3。

SPIO、EGFP双标GDNF基因修饰中脑神经干细胞移植治疗帕金森病

目的探讨超顺磁氧化铁(SPIO)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双标胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰中脑神经干细胞(mNSCs)移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法将PD大鼠随机分为对照组、GFP基因修饰mNSCs移植组和GDNF基因修饰mNSCs移植组,将相应细胞移植到PD大鼠纹状体。阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用。磁共振成像、免疫荧光组织化学研究移植细胞的存活、迁移和分化。结果GDNF基因修饰mNSCs移植能显著改善APO诱导PD大鼠的异常旋转行为;大多数移植细胞停留于移植原位,移植8w后,GDNF基因修饰mNSCs移植组有更多的细胞存活并分化为多巴胺神经元。结论MR I成像可对体内移植的SPIO标记细胞进行活体示踪。GDNF基因修饰胚胎mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍,其分子机制有待进一步研究。

神经行为学实验Narrow-Alley Test及Corner Test改良:Narrow-Alley Corner Test

目的改良传统的Narrow-alley Test及Corner Test,增强实验的可操作性和结果的可靠性。方法用Narrow-alley Test、Corner Test及改良后的Narrow-alley Corner Test检测三组SD大鼠:脑出血+GCSF治疗组;脑出血+生理盐水安慰治疗组;正常对照组。结果(1)与Narrow-alley Test及Corner Test结果一致,正常大鼠在Narrow-alleyCorner Test实验装置中向左、向右"站立转身"的几率接近,而脑损伤大鼠则趋向沿损伤同侧作"站立转身"。(2)Narrow-alley Corner Test不须反复刺激大鼠,减少了人在实验现场对动物活动的影响,增强了实验的可操作性和结果的可信度。结论Narrow-alley Corner Test是一种可操作性强、结果可靠的神经行为学检测方法。

基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在内源性神经干细胞迁移中的作用

背景:神经干细胞具有体外、体外迁移的特性,但关于其迁移的具体机制还不十分清楚。目的:探讨基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在神经干细胞体内迁移中的作用。方法:制备脑皮质微量注射脂多糖脑损伤大鼠模型,于建模后3,5,7d灌注取脑,采用冰冻切片免疫组织化学方法,动态监测基质细胞衍生因子1和nestin表达的时相变化。结果与结论:免疫组织化学染色观察显示:基质细胞衍生因子1随时间推移表达的量逐渐增多。Nestin阳性细胞有明显向外延伸和迁移的迹象,尖端指向脂多糖注射区。结果可见基质细胞衍生因子1趋化体内表达其特异性受体的内源性神经干细胞向脂多糖注射区迁移。

神经内镜辅助分流管脑室端放置在脑积水中的应用

目的总结脑室-腹腔分流术(V-P分流术)中采用神经内镜辅助分流管脑室端固定的疗效。方法回顾性分析13例脑积水病人的临床资料,均行V-P分流术,术中行侧脑室额角或枕角穿刺,并在神经内镜监视下固定分流管脑室端于透明隔,同时行透明隔造瘘4例,术后随访并复查头部CT。结果术后无明显头痛、发热及颅内出血者。术后平均随访14个月,复查头部CT显示:所有病人分流管脑室端均固定于透明隔,无移位、分流管堵塞等严重并发症;脑室较术前明显缩小4例(31%),稍缩小6例(46%),无明显变化3例(23%)。结论神经内镜辅助分流管脑室端固定,可在一定程度减少分流管堵塞的发生,为防治此类并发症提供新思路。

新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文)

本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(nestin),并于分化后分别检查特异性成熟神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的标记抗原β微管蛋白(Tuj1 )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(Galc)的表达;用鸡胚骨骼肌提取液,诱导神经干细胞向胆碱能神经元方向分化。结果显示:从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,分化成熟后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3. 9%相比,鸡胚骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的9. 6%分化成为胆碱能神经元。提示分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;在加有鸡胚骨骼肌提取液的培养基诱导下,能向胆碱能神经元方向分化。

骨髓基质细胞移植促进脊髓全横断损伤区神经元轴突的再生变化

背景:近年来,部分学者证明骨髓基质细胞移植可促进轴突再生,改善脊髓损伤引起的运动功能障碍,但目前关于移植骨髓基质细胞如何促进轴突再生,移植细胞与再生轴突的关系尚不清楚。目的:通过免疫荧光组织化学和免疫电镜的方法,探讨移植骨髓基质细胞促进脊髓全横断损伤区轴突再生的机制。设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2006-03/2007-06在新加坡国立大学解剖系完成。材料:清洁级Wistar新生大鼠1只,用于骨髓基质细胞培养。清洁级成年雌性Wistar大鼠36只,无菌条件下显露、切断脊髓T10,制备脊髓全横断损伤模型。方法:通过传代法培养、纯化骨髓基质细胞。36只成年Wistar雌性大鼠随机投币法分为移植组和对照组,每组18只。移植组大鼠脊髓全横断损伤9d后以1×1011L-1的密度移植骨髓基质细胞,缺损区5μL,损伤区上、下1mm处各2.5μL,对照组动物在相同部位注射等量DMEM完全培养基,注射速度1μL/min。主要观察指标:①移植骨髓基质细胞存活、分化情况。②轴突再生情况。③移植组和对照组宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活情况。④内源性CNP阳性细胞和再生纤维关系。结果:骨髓基质细胞移植2周时,脊髓损伤区可见大量CFDA-SE标记的移植细胞,随时间延长,存活的移植细胞数目逐渐降低,考虑脊髓损伤区内大量的OX42阳性吞噬细胞/激活小胶质细胞及空洞可能影响移植细胞的存活。虽然骨髓基质细胞数目逐渐降低,骨髓基质细胞移植可促进损伤区轴突的再生,而且还可促进宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活。宿主自身CNP和许旺细胞促进损伤轴突的再生和髓鞘形成。结论:移植骨髓基质细胞移植可促进宿主自身CNP和许旺细胞在脊髓损伤区存活,后者具有促进损伤轴突再生和髓鞘形成的作用。

胚胎多巴胺神经元移植治疗帕金森病的实验研究

目的探讨胚胎多巴胺神经元移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法立体定向注射6-羟多巴胺建立帕金森病大鼠模型,随机分为对照组(n=12)和细胞移植组(n=12)。细胞移植组将荧光染料CM-DiI标记的大鼠胚胎多巴胺神经元立体定向注入帕金森病大鼠纹状体区,对照组于相同部位注入生理盐水。用阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用。细胞移植8周后取大脑标本行冷冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在脑内存活情况。结果与对照组比较,移植多巴胺神经元能显著改善阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠的异常旋转行为(P<0.01)。移植8周后,仅少量多巴胺神经元存活。结论多巴胺神经元移植可短期内改善帕金森病大鼠的运动障碍,但长期疗效不佳,可能与移植多巴胺神经元长期存活率较低有关。

Nestin和GFAP在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达及高氧治疗的作用

目的:探讨巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法:制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nestin免疫荧光双标染色。结果:正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色,GFAP阳性染色仅位于星形胶质细胞上。缺氧后,在Müller细胞和星形胶质细胞上出现了nestin的表达,GFAP的表达没有明显变化。高氧治疗后,nestin在Müller细胞上的表达明显减弱,但在星形胶质细胞上仍有较强的表达。GFAP仍然只在星形胶质细胞上表达。结论:Müller细胞和星形胶质细胞针对缺氧损伤和高氧处理发生不同的细胞骨架蛋白重塑,这与它们和视网膜神经节细胞以及视网膜血管在解剖和功能关系上的差异有关。

针刺对背根节神经元GDNF表达的影响

目的 研究部分去背根及针刺对背根神经节神经元胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)表达的影响。方法 制作猫备用背根模型并针刺备用根支配区的两组穴位 ,足三里和悬钟 ,伏兔和三阴交。针刺 7d后取备用背根节用 GDNF抗血清 (1∶ 10 0 0 )行免疫组织化学染色。分别计数各组大、中、小阳性神经元的数量。结果 非手术组 GDNF阳性神经元数量为 5 5 % ,其中大神经元为 2 5 % ,中神经元为 14 % ,小神经元为 16 % ;术后非针刺组 ,阳性神经元总数为 35 % ,较非手术组明显下降 (P<0 .0 5 ) ,主要为大神经元 (5 % )数量减少 ,而阳性中 (13% )、小神经元 (17% )数量变化不明显 ,但染色明显加深。针刺组 GDNF阳性神经元数量又明显增加至 90 % ,其中阳性大神经元 2 8% ,中神经元 17% ,小神经元 4 5 %。结论 背根节 GDNF阳性大神经元数量在去部分背根术后 7d显著下降 ,而针刺可逆转这种变化。 GDNF阳性中、小神经元数量在术后 7d并无明显变化 。

大鼠胚胎神经干细胞定位及干细胞克隆实验研究

目的 :探索大鼠神经干细胞在胚胎脑内的分布特点 ,并用三种不同的方法对干细胞进行克隆化培养。方法 :对胚龄 16天左右的大鼠胚胎脑组织做连续冠状位冰冻切片 ,特异的抗nestin免疫组化染色 ,以显示干细胞在胚胎的分布特点。我们还把胚龄 16天左右的胎鼠室管膜下脑进行原代及传代培养 ,传代的神经干细胞用三种方法有限稀释法 ,饲细胞克隆培养法 ,软琼脂克隆培养法进行克隆培养。结果 :1 神经干细胞在胚胎的分布主要集中在胚胎发育的中轴部位如 :脑室、脑室下区 ,中脑导水管周围。神经干细胞多表现为复层上皮样排列 ,细胞突起呈放射状伸向脑的表层并之与保持密切联系。有的干细胞在离室管膜较远处呈簇状分布好似群状迁移的干细胞群也好似干细胞的发生中心。 2 干细胞的原代培养及传代培养显示 :神经细胞易呈聚集状生长的特点及神经细胞的迁移性的生长特点 ,各细胞群之间有密切的纤维联系。 3 神经细胞生长的细胞密度依赖效应与细胞之间的接触在生长发育中的重要作用。结论 :神经干细胞在胚胎的分布主要集中在胚胎发育的中轴部位 ,软琼脂克隆法是一种成功的干细胞克隆方法。