不同部位来源的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌检出情况及耐药性分析

目的:分析本院2018~2020年临床不同部位来源的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的检出情况及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:采用标准纸片法或仪器法,按照统一技术方案,鉴定并完成细菌耐药性检测。药敏结果依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准进行判读,采用WHONET 5.6分析数据。结果:2018~2020年共检出肠杆菌目细菌11389株,其中,检出CRE 1690株(14.84%),2018年657株、2019年555株、2020年478株,呈逐年下降趋势。2018~2020年CRE菌株排名前3位的均是肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌,共检出肺炎克雷伯菌1452株(占85.92%)、大肠埃希菌94株(占5.56%)、阴沟肠杆菌56株(占3.31%)。不同部位来源的肠杆菌目细菌中CRE的占比不同。其中,脑脊液中CRE的占比最高,连续3年均超过30%,且呈增长趋势;尿液中CRE占比最低,低于10%。未发现对替加环素耐药的CRE。CRE除对碳青霉烯类抗菌药物耐药外,对其他抗菌药物普遍耐药。对部分抗菌药物敏感的不同部位来源的CRE的耐药率不同。对部分抗菌药物敏感的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药率高于碳青霉烯类耐药大肠埃希菌与碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌。结论:CRE的检出率呈逐年下降趋势,构成和耐药性变化不大。不同部位来源的CRE检出率不同,检出的CRE耐药性不同,临床需结合CRE来源部位制定抗感染方案。

沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默DNA甲基转移酶(DNMT1)对人慢性髓系白血病细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子甲基化的影响。方法:构建DNMT1 siRNAi质粒,将DNMT1 siRNAi转染至慢性髓系白血病K562细胞中,采用RT-PCR和Western blot法检测DNMT1基因和相关蛋白的表达,并利用甲基化PCR检测WIF-1基因启动子甲基化水平,台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Western blot法检测沉默DNMT1基因后Wnt/β-catenin及其下游信号通路蛋白的表达情况。结果:实验组DNMT1 mRNA和相关蛋白表达水平显著低于对照组和阴性对照组(P<0.05);成功转染72 h后,对照组和阴性对照组WIF-1基因处于完全甲基化状态,而实验组WIF-1基因启动子区域甲基化水平显著降低。MSP检测结果显示,实验组未甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著增加,而甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著降低。转染成功48 h后,实验组的OD值、活细胞数及集落形成数均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组的细胞凋亡率显著高于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组K562细胞中β-actin、myc、cyclin D1和TCF-1蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。结论:沉默DNMT1基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。

人乳头瘤病毒检测和免疫治疗研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)经感染后能引起头颈和直肠恶性肿瘤、宫颈癌、良性增生性疾病,在临床具有极高发病率,不仅影响女性健康,并且增加家庭经济负担。而早期进行快速、有效、可靠的HPV检测十分重要,能及早发现疾病、早期治疗。目前临床对HPV的检测方式较多,主要有杂交捕捉法HC-2、DNA原位杂交、聚合酶链反应、免疫组织化学检测、高危型HPV mRNA检测等。而在常见检测方式中,DNA/RNA微阵列、芯片技术、HPV病毒蛋白免疫组化等技术在HPV检测中具有重要意义,但未在临床受到广泛推广。目前临床已经研发多种类型的疫苗,如核酸、基于细胞的疫苗、活载体、蛋白质等,越来越多的新型免疫治疗在临床广泛应用,如过继性T细胞疗法、免疫检查点抑制剂,但上述方式仍处于评估阶段。

产NDM-1阴沟肠杆菌的耐药性与毒力基因分布

目的了解产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)阴沟肠杆菌(ECL)耐药性与毒力基因分布情况。方法收集2017年1月—2020年11月昆明医科大学第一附属医院分离的ECL,试验组为29株产NDM-1的耐碳青霉烯类ECL(CRECL),对照组为32株不产NDM-1的CRECL和35株碳青霉烯类敏感ECL(CSECL)。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)、全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,PCR方法检测NDM-1耐药基因、24对毒力基因,采用χ^(2)检验比较毒力基因分布差异。结果该院分离的CRECL菌株NDM-1基因检出率为47.5%,产NDM-1的CRECL对常用抗菌药物表现为多重耐药。96株ECL菌株中,毒力基因acr A、tol C、wca A、wca M、wza的检出率较高,分别为80.2%、90.6%、87.5%、75.0%、92.7%,clp B、icmf、V as D/L ip基因的检出率也均在60%以上,未检出esc V、nle B、pet、hly A等毒力基因。产NDM-1的CRECL组clp B、icmf、V as D/L ip、acr A基因检出率高于不产NDM-1的CRECL,CRECL组clp B、icmf、V as D/L ip基因检出率高于CSECL组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论产NDM-1 CRECL耐药形势严峻而且毒力基因的携带率也增高,临床用药应兼顾细菌的耐药性和毒力基因分布情况。

恙虫病伴骨髓嗜血现象1例

恙虫病是由东方立克次体引起,经恙螨叮咬传播的自然疫源性疾病。恙虫病伴骨髓嗜血现象的情况临床少见,尤其当临床表现不典型的恙虫病伴骨髓嗜血现象时,临床医生诊治难度增大,患者病情进展迅速,病死率增高。现报道1例恙虫病伴骨髓嗜血细胞增多的患者,通过病史、临床表现、实验室检查确诊后,及时调整抗菌药物应用方案,病情得到控制,随访2个月,病情无复发。

小儿肺炎支原体感染后检验免疫功能的临床意义

分析对小儿肺炎支原体感染治疗后免疫功能的临床意义。方法:选择2019年度我院收治的102例小儿肺炎支原体感染患者为研究对象(设定为QA组),随机抽取前来接受体检的102例健康幼儿作为QB组,对两组幼儿外周血中T淋巴细胞与血清免疫球蛋白等指标进行分析。结果:QA组患儿IgG、IgM、IgA等指标明显低于QB组(P <0.05);CD3+和CD4+等指标低于QB组(P <0.05);CD8+临床数据高于QB组(P <0.05),呈现出统计学差异。结论:小儿在发生肺炎支原体(MP)感染后,对外周血中T淋巴细胞与血清免疫球蛋白等指标进行分析发现,患儿身体的抵抗力会下降,在体液免疫和细胞免疫功能中都会出现降低问题。

维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白质在肝细胞癌中的应用

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范围内发病率居第五、死亡率居第二的恶性肿瘤。对HCC进行特异及灵敏的早期诊断是提高患者疗效和存活率的关键。维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白质(protein induced by vitamine K absence or antagonistⅡ,PIVKA-Ⅱ)是一种新的肿瘤标志物,其对HCC的诊断、治疗效果评估、预后判断及肿瘤复发监测均具有较好的临床应用价值,现就PIVKA-Ⅱ的生物学特性和临床应用作一概述。

NICU极低出生体重儿真菌血流感染的危险因素及预后分析

探讨NICU极低出生体重儿真菌血流感染的危险因素及对患儿预后的影响。方法:回顾性采集2014年1月至2020年12月入住昆明医科大学第一附属医院NICU的极低出生体重儿近平滑假丝酵母菌血流感染患儿 43 例,其中单独近平滑假丝酵母菌感染者17例(40%),合并一种或两种革兰阴性菌感染者26例(60%)进行血流感染的危险因素分析。结果:17例单独感染近平滑假丝酵母菌和26例混合感染患儿两组中进行单因素分析,分析表明合并凝血功能障碍、血小板减低和复查血培养阳性三个因素的差异具有统计学意义(P<0.05)。真菌感染使用抗生素导致菌群失调继而合并感染革兰阴性菌是影响患儿真菌血流感染预后的独立危险因素。结论:合并凝血功能障碍、血小板减低和复查血培养阳性是NICU极低出生体重儿真菌血液感染的独立危险因素;而抗生素的使用导致菌群失调继而合并感染革兰阴性菌是影响患儿真菌血流感染预后的独立危险因素,应引起重视以改善预后。

具核梭杆菌通过NF-κB信号通路促进结直肠癌细胞HCT116中TNF-α诱导的炎症性改变

目的探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)感染促进TNF-α诱导的结直肠癌细胞HCT116炎症改变的机制。方法建立Fn感染细胞及TNF-α炎症诱导模型并分为4组,即未感染对照组、Fn感染组、TNF-α诱导组、Fn+TNF-α组。首先用Fn感染正常结肠上皮细胞hcoEPIC和结直肠癌细胞HCT116、LoVo,分别检测Fn对不同结肠细胞的黏附情况。TNF-α诱导HCT116细胞3 h后加入Fn感染,24 h后分别用CCK8试验和乳酸脱氢酶(LDH)活力测定法检测细胞存活率及细胞损伤情况。ELISA法检测细胞内和细胞培养上清中核转录因子(NF-κB)和细胞因子(IL-6、IL-8、IL-1β)的表达。结果Fn对结直肠癌细胞HCT116和LoVo的黏附性较强(P<0.05),但基本不表现出侵袭,反而在24 h后对正常结肠上皮细胞hcoEPIC有较高侵袭率。与未感染Fn组相比,Fn感染组细胞存活率显著降低,细胞损伤增加(P<0.001)。在TNF-α诱导3 h后,Fn感染进一步促进了细胞死亡和损伤(P<0.001)。Fn感染和TNF-α单独处理组的NF-κB表达显著高于未感染组(P<0.001,P<0.05),Fn+TNF-α组的NF-κB表达显著高于对照组和单独处理组(P<0.001)。Fn感染和TNF-α单独处理组中,IL-6和IL-8的表达均显著高于未感染组(P<0.001),IL-1β无明显改变(P>0.05)。Fn+TNF-α组中IL-6、IL-8、IL-1β的表达均显著高于正常对照组和单独处理组(P<0.05)。结论Fn能够优先黏附于结直肠癌细胞HCT116上,进而促进TNF-α诱导的细胞损伤、死亡和NF-κB及其下游促炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达和释放。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对多黏菌素耐药性的研究进展

多黏菌素是目前临床治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染为数不多的抗生素。近年来,对多黏菌素耐药的CRKP显著增加,为临床抗感染治疗带来前所未有的挑战。目前,CRKP对多黏菌素耐药的可能机制主要包括表达质粒介导的mcr基因、激活双组分调节系统等。现就CRKP的流行现状、多黏菌素的作用特点、CRKP对多黏菌素耐药机制和临床治疗等作一概述,旨在探讨CRKP对多黏菌素的耐药进展,有效指导临床合理用药。

人类免疫缺陷病毒1型的广谱中和抗体的亲和力成熟与特征及其运用

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的长期不进展者(LTNP)体内分离到的广谱中和抗体(bNAbs),已被证明可以预防HIV-1感染并降低感染者体内的病毒载量,成为了指导HIV-1疫苗设计和被动免疫治疗的突破口。中和抗体的功能除了与靶向表位有关,其亲和力也极大的影响了抗体的活性。HIV-1 bNAbs通过体内的多轮亲和力成熟获得了较高亲和力,从而实现了广谱度和中和活性的增加。高亲和力HIV-1 bNAbs在治疗过程中能更好的协助机体免疫系统清除病原体,并且使用剂量更少,毒副作用也相对较低。在亲和力成熟的同时,HIV-1 bNAbs表现出了高水平的体细胞超突变(SHM)、插入缺失、较长的重链第三互补决定区等不寻常的特征。这些特征阻碍了通过有效疫苗诱导HIV-1 bNAbs在体内产生并发育成熟,因此了解抗体亲和力成熟过程中发生的突变及其要点,有助于理解中和抗体的活性与特征的关系,并为设计有效的HIV-1潜在免疫原提供参考。

HIV-1感染长期不进展者的B细胞谱系研究进展

高效抗反转录病毒治疗(highly active anti-retroviral therapy,HAART)在人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染方面取得了显著成效,但仍无法治愈艾滋病。研发出能够诱导中和多种HIV-1毒株能力的广谱中和抗体HIV-1疫苗,已成为防治HIV-1感染的重要目标。HIV-1感染长期不进展者是广谱中和抗体的主要提供者,阐明长期不进展者的B细胞谱系特征,将为广谱中和抗体成熟的相关研究奠定重要基础,为HIV-1疫苗研发提供新思路。现就HIV-1感染长期不进展者的B细胞谱系研究进展作一概述。