携带不同耐药基因对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌适应性及毒力的影响

目的 探讨携带不同耐药基因对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的生长适应性及毒力作用的影响。方法 通过PCR方法扩增碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(VIM)、bla_(OXA)、bla_(IMP))及β-内酰胺类耐药基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX)、bla_(LAP)),测序确定基因型。扩增7个管家基因rpoB、gapA、mdh、pgi、phoE、infB和tonB,测序确定基因型并获得菌株ST类型。根据所携带的碳青霉烯类耐药基因不同,将菌株进行分组,在不同亚胺培南抗生素浓度(0、2、8 mg/mL)下培养细菌,绘制生长曲线,比较各组细菌的生长适应性变化;通过线虫侵染模型用CRKP感染线虫,绘制线虫生存曲线,比较各组细菌对线虫的毒力作用。结果 无抗生素压力下各组菌株生长适应性相似;在2 mg/mL亚胺培南培养基中,双抗性基因组中bla_(KPC)+bla_(NDM)组、bla_(IMP)+bla_(OXA)组生长适应性最强,单抗性基因组中bla_(IMP)组生长适应性最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。在8 mg/mL亚胺培南培养基中,双抗性基因组中bla_(KPC)+bla_(NDM)组和bla_(NDM)+bla_(OXA)组生长适应性最强,且分别强于单抗性基因组bla_(KPC)组和bla_(OXA)组;单抗性基因组中bla_(OXA)组生长适应性最弱,bla_(KPC)和bla_(NDM)生长最快,差异具有统计学意义(P<0.05)。在无抗生素压力下,各组菌株对线虫毒力作用有所不同,bla_(KPC)组、bla_(KPC)+bla_(NDM)组和bla_(IMP)+bla_(OXA)组生存曲线右移,线虫中位生存时间延长,菌株毒力减弱;bla_(IMP)+bla_(NDM)组生存曲线左移,线虫中位生存时间缩短,菌株毒力增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 携带不同的耐药基因以及携带单个或多个耐药基因均会对菌株的生长适应性和毒力产生不同的影响。

细菌与肿瘤的关系

人体携带有数以万亿计的细菌,其中大部分细菌与人体之间已经形成互惠互利的共生关系。细菌群落失调或者病原细菌感染会通过炎症以及分泌代谢物对人类健康产生负面影响,从而导致各种疾病的发生,这其中也包括肿瘤。细菌可以影响人体内肿瘤的发生发展,一方面细菌可以通过诱导慢性炎症、引起DNA损伤、激活核心致瘤信号通路等机制促进肿瘤的发生;另一方面又可以通过自身的溶瘤作用或者激活适应性免疫细胞来抑制肿瘤生长,此外通过基因工程修饰,一些被设计成低毒高效的药物输送的细菌已经成功地用在动物模型或临床试验中的肿瘤治疗。该文从细菌是如何促进肿瘤和肿瘤治疗上的应用两个方面综述近期有关细菌和肿瘤发生发展的相关文献,以期为肿瘤的治疗提供一种新的治疗思路。

HSV1感染中的表观遗传调控机制研究进展

1型单纯疱疹病毒(HSV1)是一类最为常见的人类传染病原体,感染后可导致一系列程度不同的疾病。HSV1在中枢神经系统的潜伏感染及偶发重激活是其病理发生的关键,也为抗病毒治疗带来了巨大的挑战。目前,关于HSV1感染的建立、维持和重激活的机制并未完全阐明,但普遍认为表观遗传调控可能在其中扮演重要作用。越来越多研究表明,病毒裂解期和潜伏感染期的基因组呈现不同的染色质结构,其富含的多种翻译后修饰组蛋白赋予病毒基因转录激活或抑制特征。此外,病毒潜伏相关转录本LATs也可能参与基因组表观遗传修饰调控。

大鼠外伤性视神经损伤的闪光电生理特性和Tau蛋白及其磷酸化研究

目的:运用闪光视觉诱发电位(FVEP)技术检测外伤性视神经损伤(TON)大鼠视觉通路障碍的变化情况,探究TON大鼠视网膜及视神经中Tau及其磷酸化蛋白的变化。方法:将30只SD大鼠进行FVEP造模,1wk后构建TON模型,左眼进行视神经夹持损伤,右眼进行视神经暴露假手术。TON模型鼠分别于视神经夹持损伤后1、3、7、14、28d进行FVEP检测。FVEP检测完成后处死大鼠,分离左眼视网膜及视神经,并采用Western blot检测其中Tau及其Ser 396/Ser 404位点磷酸化蛋白的表达水平。结果:TON模型大鼠假手术眼出现典型的FVEP波形;相较于假手术眼,手术眼各检测时间点FVEP的N2波发生显著延迟,N2-P2波振幅发生大幅缩减,但视神经夹持损伤后各时间点N2波潜伏期延迟时间和N2-P2振幅缩减差异不明显。TON大鼠手术眼视网膜总Tau含量在夹持损伤1d后急剧下降,7d时短暂恢复后直至28d维持于略低于正常水平;pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化一致,其中Ser 396位点为Tau蛋白主要磷酸化位点。TON大鼠手术眼视神经总Tau含量逐渐增多,夹持损伤14d时达到高峰并维持至28d,pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化类似,7d时出现增长并抵达高峰,其中Ser 404位点为主要磷酸化位点。结论:FVEP的N2及P2相关指标可用于检测TON大鼠视觉功能障碍水平,TON大鼠视网膜与视神经Tau蛋白水平的变化截然不同,不同部位pTau-Ser396/404的变化跟随总Tau含量的变化而变化,但不同部位Tau蛋白主要改变的磷酸化位点不同。

小胶质细胞特性及其功能的研究进展

小胶质细胞广泛分布于中枢神经系统,是神经系统中发挥免疫功能的主要细胞,生理情况下起监视作用,稳定内环境,小胶质细胞对外界刺激非常敏感,一旦中枢神经系统发生轻微病理变化即可激活小胶质细胞,活化后的小胶质细胞一方面发挥吞噬作用,吞噬细胞碎片,分泌生长因子促进神经修复,另一方面也能分泌一些炎症因子、谷氨酸、一氧化氮等,加重炎症反应,引起继发损伤。文中将对小胶质细胞的特性及其在中枢神经系统疾病中的作用进行综述,为中枢神经系统疾病的治疗提供新靶点。

CCL27 CCL28及CCR10在癫痫小鼠急性期表达增高

目的探讨趋化因子CCL27、CCL28及其受体CCR10在小鼠癫痫急性期外周血中的表达变化。方法取正常及癫痫小鼠急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)外周血利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测毛果云香碱致癫痫发作小鼠急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平;同期取正常及癫痫急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)肝素抗凝外周血,提取淋巴细胞层后利用FACSsort型流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CCR10蛋白水平的表达变化。结果癫痫小鼠发作急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平、淋巴细胞中CCR10蛋白表达水平均在癫痫发作2h高于对照组(P<0.05)。结论癫痫发作早期已出现外周血免疫功能紊乱,该病理变化可能与癫痫发病过程中的炎性反应和神经细胞的凋亡相关。

小胶质细胞对神经元作用的研究进展

关于小胶质细胞的研究多集中于病理状态下活化的小胶质细胞功能。近年来研究发现,正常生理条件下静息的小胶质细胞同样非常活跃,对于突触的形成和可塑性的调节起到了重要作用。此外,静息状态下新的小胶质细胞也参与了脑部正常活动的维持,当小胶质细胞功能异常时可出现行为的异常。文中对小胶质细胞在生理条件下对神经发育的作用、诱导突触形成和神经元发生以及对人体行为的调节等方面的研究进展作一综述。

大鼠视神经钳夹伤模型的建立及磁共振成像运用初探

目的通过多时间点活体磁共振成像及组织取材病理检查,探讨钳夹法建立大鼠视神经损伤模型的可靠性及核磁共振成像在视神经损伤模型中的应用价值。方法健康SD大鼠36只,随机分为对照组(6只)和实验组(30只)。使用夹持力50g夹持钳持续钳夹10 s的方法建立大鼠单侧视神经损伤模型,在损伤后3 d、5 d、7 d、14 d、2个月分别对受损侧视神经进行磁共振成像扫描,并随后取视网膜及视神经进行病理检测。结果磁共振成像检查结果显示,对照组大鼠双侧视神经粗细均匀,周围无明显病变信号。损伤后3 d,实验组损伤侧可出现视神经肿胀、增粗,伴随眼球后方软组织水肿,并在随后5～14 d内呈进行性加重;至损伤后2个月,可观察到损伤侧视神经球后段萎缩。HE染色检查结果显示,实验组损伤后3～7 d,视神经出现大量空泡变性,神经纤维稀疏,胶质细胞增生明显,视网膜神经纤维层水肿明显,神经节细胞层出现核固缩和空泡;损伤后14 d,梗死灶内胶质细胞增生,纤维组织相对增多,神经纤维层结构仍显疏松;损伤后2个月,可见神经纤维增生,胶质细胞数目明显减少。对照组大鼠视神经纤维排列密集、规则,视网膜层次清晰,神经纤维层厚度均匀。结论固定压力钳夹法能建立稳定的大鼠视神经损伤模型,可获取随时间变化的视神经及视网膜细胞病理改变图像。同时,磁共振成像能显示创伤后视神经水肿及后期萎缩的变化过程,具有一定的研究价值和临床应用潜力。

腺相关病毒载体用于外伤性视神经损伤基因治疗的研究进展

视神经损伤后微环境紊乱使视网膜神经节细胞逐渐死亡。视神经修复与微环境中多种因素息息相关,如caspase-6、硫苷脂等上调抑制视神经修复;自我吞噬功能、晶状体蛋白β2、胸腺素-β4等上调促进视神经修复。腺相关病毒载体是目前最常用的转基因治疗载体,腺相关病毒转基因表达外源性血小板源性生长因子CC、血管内皮生长因子等神经营养因子可增强神经节细胞存活。本研究就近年来腺相关病毒载体治疗外伤性视神经损伤基因治疗的研究进展进行综述。

颞叶癫痫小鼠外周血细胞因子mRNA水平变化

目的研究颞叶癫痫小鼠发作2 h外周血IFN-α6、IFN-γ、IL-1β以及TNFR-m18等细胞因子变化情况。方法采用real-time PCR法检测癫痫发作后10 min、30 min、1 h和2 h癫痫小鼠外周血中IFN-α6、IFN-γ、IL-1β以及TNFR-m18 m RNA的表达。结果癫痫组30 min时IL-1βm RNA的表达水平与对照组及SE10 min比较均升高(P<0.05);癫痫组10 min时IFN-α6 m RNA表达水平低于对照组(P<0.05);IFN-γm RNA表达水平在SE10 min时与对照组及SE其他时间点相比有统计学差异(P<0.05);TNFR-m18 m RNA表达水平在SE 1 h时与对照组及SE其他时间点(10 min、30 min、2 h)相比升高(P<0.01)。结论癫痫状态下外周血中细胞因子m RNA表达水平失衡,可能与急性期癫痫的免疫病理过程有关。

一种优化的大鼠视网膜组织石蜡切片制作方法

目的针对大鼠视网膜石蜡切片过程中易出现标本脱离及断裂分离的问题,寻找并优化大鼠视网膜石蜡切片的制作方法并评估效果.方法分别用10%多聚甲醛固定液;4%多聚甲醛固定液;单独固定及使用4%多聚甲醛、95%酒精、冰醋酸混合固定液(FAA固定液);预处理后再使用10%多聚甲醛分别固定等4种方法对大鼠视网膜组织进行固定,HE染色后显微镜下进行观察.结果单独使用10%多聚甲醛以及4%多聚甲醛固定均出现视网膜脱离及各层结构断裂分离现象,但经FAA固定液预处理的视网膜切片HE染色后颜色鲜明均匀,虽部分区域视网膜偶有脱离,但不易脱片,各层结构完整,未出现断裂分离.结论经FAA固定液及多聚甲醛处理过的视网膜石蜡切片固定效果明显优于单独使用多聚甲醛,甲醛浓度对HE染色结果无明显影响.

2型糖尿病患者血清与粪便的代谢组学研究

目的研究2型糖尿患者与健康者血清和粪便的代谢组学差异,分析差异代谢物与2型糖尿病之间的相关性。方法选择2018年1月至2019年3月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者53例,以及同期常规体检健康对照人群30例,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术对两组研究对象的血清代谢物及30例糖尿病患者与对照组的粪便代谢物进行非靶向和靶向的代谢组学研究。应用Spearman相关性分析方法对血清和粪便中的差异代谢物与2型糖尿病相关指标的相关性进行分析。结果在2型糖尿病组与健康对照组血清样本中鉴定出15个差异代谢物,在粪便样本中鉴定出的差异代谢物则有6个。其中,糖尿患者血清中的谷氨酰胺、壬二酸、癸二酸及3-羟基癸二酸等二羧酸类羟基化衍生物明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),而琥珀酰乙酰乙酸、缬氨酸、亮氨酸、葡萄糖、乳酸的含量则高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且琥珀酰乙酰乙酸、乳酸与糖化血红蛋白、餐后2 h血糖及空腹血糖浓度具有较强的正相关性,而壬二酸、癸二酸及二羧酸类羟基化衍生物与血糖浓度则具有较强的负相关;在粪便代谢物中,去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆汁酸与受检者的血糖浓度也有着一定的正相关性,并且单变量分析结果显示,与健康对照组相比糖尿病患者血清中的去氧胆酸和鹅去氧胆酸均显著性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿患者的血清代谢组学与健康者具有明显的差异,这些差异代谢物与糖尿病的发生和发展具有较强的关联性。在粪便代谢组学中,糖尿患者的胆汁酸水平与血糖的浓度变化也密切相关。

Bcl-2在视神经损伤的运用效果的相关进展

Bcl-2是从滤泡上B细胞内分离出来的一个原癌基因,与细胞的凋亡密切相关。近年来,其广泛应用于中枢神经的损伤修复实验中,尤其表现在眼科领域的视神经损伤的研究中,可以抑制细胞凋亡,延长细胞生命期限,不能促进细胞增殖。然而在其他一些实验中,Bcl-2的抗凋亡作用却不明显,对于某些基因突变所致的凋亡无阻止作用,针对视神经的保护作用不明显。

proBDNF-p75NTR通路抑制C6细胞增殖

目的 pro BDNF和成熟BDNF分别通过p75NTR受体和Trk B受体介导相反的生物学作用。微环境变化时,pro BDNF-p75信号通路和成熟BDNF-Trk B通路不平衡可能对细胞生长和增殖产生不同影响。本研究拟探讨不同培养条件下,C6细胞表达pro BDNF及其受体p75NTR的变化,对C6细胞生长和增殖的作用。方法用细胞免疫荧光双标和Western blot方法,检测在含不同浓度血清培养液中培养的C6细胞pro BDNF及其受体p75NTR表达。分别用特异性的pro BDNF抗体阻断内源性pro BDNF,用p75NTR-ECD-Fc阻断p75NTR,用MTT法和Brdu法分别测定内源性pro BDNF及其受体p75NTR对C6细胞生长和增殖的作用。结果 pro BDNF和p75NTR在无血清培养的C6细胞中共表达明显上调,加入pro BDNF抗体(10μg/ml)处理细胞后,C6细胞的生长和增殖明显增加。p75NTR的作用取决于其在不同环境下结合的配体。结论 pro BDNF-p75NTR通路起到平衡成熟BDNF-Trk B通路的作用,一定环境下,二者平衡打破,可能对细胞生长或增殖产生不同影响。

炎症反应相关蛋白与视神经损伤修复关系的研究进展

视神经损伤后的修复再生一直是近年来研究的热点。视神经损伤后,视网膜中常见的炎症反应相关蛋白表达均可发生不同程度的变化,在影响视神经修复与再生方面起着重要的作用。本文就炎症反应相关蛋白与视神经损伤修复关系的研究进展进行综述。

BTBR自闭症小鼠免疫异常研究进展

自闭症谱系障碍(ASD)是一种以重复刻板行为增加、沟通和社会交往障碍为主要特征的神经发育障碍性疾病,发病机制尚不清楚,目前主要认为除遗传因素外,环境因素在ASD病理发生中扮演更为重要的角色。越来越多的研究发现,ASD患者体内普遍存在免疫系统失调。BTBR-T(+)tf/J(BTBR)小鼠不仅是一种无需造模、稳定性好的ASD动物模型,且是研究ASD免疫失调机制理想的临床前模型。本文综述了近年BTBR小鼠免疫异常的研究结果,并与ASD患者体内异常的免疫状况进行了比较。

癌钙调蛋白在炎症反应促视神经再生作用中的研究进展

癌钙调蛋白(oncomodulin,OM)作为钙结合蛋白的一种,逐渐为我们熟知。近年来有研究证实,OM源于活化的炎症细胞(中性粒细胞),是体内先天免疫系统和神经元之间一种有效的生长促进信号,通过炎症反应诱导的OM是受损视神经轴突再生的关键。OM的促视神经轴突再生作用逐渐成为研究的热点之一。本文就近年来OM作用机制和炎症诱导下OM与视神经再生关系方面的研究和进展做一综述。

铁代谢与肿瘤发生关系的研究进展

铁元素是生命活动的重要参与者,不仅参与细胞的氧化磷酸化过程、DNA合成及复制活动,还通过低氧诱导因子调控多个肿瘤发生相关基因。细胞癌变过程中改变了自身的铁代谢方式,使癌细胞成为铁元素的消耗大户。其中,铁的获取,外排,存储和调控在癌细胞中皆是紊乱的。因此,铁元素对肿瘤的生长,生存及转移具有重大潜在意义。文章综述了铁元素在癌细胞中的改变与肿瘤发生的关系以及目前铁螯合剂抑癌作用在临床运用中存在的问题,以肿瘤铁代谢作为治疗靶标可能为肿瘤的预后和治疗提供新思路。

内皮素-1与眼科主要致盲性疾病的关系

内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)是一种含有21个氨基酸的血管活性肽,它是目前被认为的最强的缩血管物质。它不仅具有强大的收缩血管的作用,还可以促进炎症的产生。它除了对心血管、泌尿、呼吸、消化、神经、生殖、内分泌等系统中起作用外,对眼科的备种致盲性疾病起着十分重要的作用,如内皮素-1在眼部中主要分布在脉络膜中,它对白内障的发展、青光眼眼压的升高及视神经的损害有一定联系。内皮素-1对糖尿病性视网膜病变中微血管稳态的维持及病情的诊断有一定作用;在非动脉炎性前部缺血性视神经病变中,它的浓度的高低与病变程度相吻合,对病情的判断和预后评估均有一定的临床意义。随着内皮素-1在这些疾病中的作用机制研究的不断深入,未来眼科相关疾病的预防和治疗将大有裨益。

自闭症中T细胞及相关细胞因子的研究进展

自闭症是一类常见的异质性神经发育障碍性疾病,近几年发现其与免疫系统密切相关,揭示了神经炎症可能是其潜在的发病机制。在自闭症患者中普遍发现适应性免疫失调,以T细胞变化为主表现出调节性T细胞体系缺陷导致的效应T细胞过度激活,促进炎症的持续发展,终末表型表现出的异质性与孤独症谱系障碍(ASD)行为异常相关,本文综述了近几年自闭症中T细胞和相关细胞因子的异常改变,从T细胞数量、活化状态和细胞因子角度阐述T细胞在ASD疾病发展中的作用,探讨ASD发病潜在的免疫学机制。