过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染RAW264.7细胞株

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。

黄藤素对CCl4致大鼠急性肝损伤的防治作用研究

目的:评价黄藤素(palmatine, Pal)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用,初步探究其潜在靶点。方法:将48只大鼠随机分为正常对照组(NS)、模型组(CCl4)、低剂量Pal组(Pal-L, 5 mg/kg)、中剂量Pal组(Pal-M, 10 mg/kg)、高剂量Pal组(Pal-H, 20 mg/kg)和地塞米松组(DEX, 10 mg/kg)腹腔注射5,10,20 mg/kg的Pal,每天一次,连续三天,NS组和CCl4组的大鼠腹腔注射给予等体积的生理盐水。Pal处理组的大鼠最后一次给药1小时后,CCl4组和Pal处理组的大鼠腹腔注射25%的CCl4花生油溶液(3 ml/kg),NS组的大鼠腹腔注射相同体积的溶剂。各组造模后开始计时,给予CCl4 24小时后处理所有大鼠,收集血清和肝组织,检测肺组织病理形态变化,评估肝损伤指标ALT和氧化应激指标MDA含量。网络药理学方法初步探究黄藤素抗急性肝损伤的潜在靶点。结果:Pal预处理剂量依赖性减轻CCl4诱导的急性肝损伤,表现为降低血清天冬氨酸转氨酶(AST)活性,抑制肝脏病理损伤。此外,Pal通过恢复丙二醛(MDA)水平来缓解CCl4引发的氧化应激和炎症反应。结论:黄藤素能够通过抑制炎症反应和氧化应激发减轻急性肝损伤,STAT3可能是黄藤素发挥肝脏保护作用最具潜力的靶点。

炎症与氧化应激在急性肺损伤中的作用研究进展

急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)一种以肺实质弥漫性炎症和顽固性低氧血症为特征的临床危重症疾病。尽管近几年国内外对ALI/ARDS进行深入研究,但由于其病因复杂、发病机制尚不明确,临床上亦无明确的可治愈药物,使得ALI/ARDS患者的总体生存质量和生存率均较低。近年来,大量文献报道炎症反应以及氧化应激与ALI/ARDS的发展密切相关,本文就炎症反应和氧化应激反应在ALI/ARDS发生发展中的作用进行综述,以期为ALI/ARDS的治疗和药物研发提供相关理论依据。

龙胆科植物来源的化合物抗炎作用机制研究进展

龙胆科(Gentianaceae)植物是一类广泛分布于全球的药用植物,其主要活性成分为龙胆苦苷、獐芽菜苷、獐芽菜苦苷以及生物碱、黄酮、香豆素及内酯等化合物。龙胆科植物来源的化合物具有显著的抗炎作用,可以通过多种途径调节炎症反应,对于治疗各种炎症相关疾病具有重要的意义。本文综述了龙胆科植物来源的化合物抗炎作用的主要机制,包括抑制转录因子的激活;抑制炎症相关酶的表达;减少炎症介质的产生;调节免疫细胞的功能;以及影响自噬和NLRP3等新兴机制,旨在为龙胆科植物来源的化合物在炎症性疾病中的应用提供一定的参考。