猪骨髓间充质干细胞抑制脂多糖诱导炎症反应改善猪胰岛细胞功能损伤

背景:猪胰岛移植是治疗糖尿病的常用手段,但炎症反应和氧化应激会导致猪胰岛移植的远期效果欠佳。猪骨髓间充质干细胞已被证实与胰岛联合移植可改善移植物的功能。但关于猪骨髓间充质干细胞通过调节胰岛细胞中miR-299-5p的表达来调控胰岛β细胞功能和存活率还尚未被报道。目的:探讨猪骨髓间充质干细胞通过miR-299-5p/SIAH1分子轴调控JNK/C-Jun信号通路对猪胰岛细胞功能损伤的影响。方法:用脂多糖诱导猪胰岛细胞功能损伤,然后与骨髓间充质干细胞共培养24 h,采用ELISA检测猪胰岛细胞中白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、活性氧、超氧化物歧化酶及胰岛素水平,Hoechst 33258染色观察猪胰岛细胞凋亡情况,Annexin V-FITC/PI检测猪胰岛细胞凋亡率,Western blot检测SIAH1和JNK/C-Jun信号通路相关蛋白表达;qPCR检测猪胰岛细胞中与胰岛细胞功能损伤有关的miRNAs表达;双荧光素酶报告基因验证miR-299-5p和SIAH1的靶向关系。结果与结论:①猪骨髓间充质干细胞抑制脂多糖引起的白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、活性氧上调和促凋亡作用,同时也抑制脂多糖引起的超氧化物歧化酶、胰岛素分泌量下调作用;②猪骨髓间充质干细胞显著上调miR-299-5p表达,miR-299-5p可通过靶向下调SIAH1表达抑制JNK/C-Jun信号通路激活;③结果表明,猪骨髓间充质干细胞通过调控miR-299-5p/SIAH1分子轴抑制JNK/C-Jun信号通路激活,抑制脂多糖诱导的炎症反应、氧化应激和猪胰岛细胞凋亡,并促进胰岛素分泌,从而改善猪胰岛细胞功能。

螺旋推进法床旁盲插鼻肠管技术在重症患者中的应用研究

重症医学是对发生器官功能障碍和(或)各类急危重症患者进行快速抢救、生命支持和综合治疗的学科,在临床中具有重要的地位。营养支持在重症医学诊治中具有十分关键的作用,其目的在于供给机体所必需的能量和营养,尽可能维持组织器官的功能正常运转[1]。鼻肠管是重症患者常用的肠内营养途径之一,不同插管方法的成功率和临床疗效均不同。为对比观察等待法与螺旋推进法在重症患者鼻肠管盲插中的应用效果,现回顾性分析2015年1月-2017年6月期间我院79例盲插鼻肠管重症患者的临床资料,现报告如下。

过表达miR-613通过靶向下调Wee1提高结直肠癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的研究微小RNA-613(miR-613)/Wee1分子轴影响结直肠癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法选取2016年11月至2017年5月昆明医科大学附属延安医院收治的放疗敏感结直肠癌患者20例、放疗抵抗患者20例,另选取人结直肠癌细胞株LoVo、HCT116,并建立放疗抵抗细胞株LoVo/R、HCT116/R,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-613和Wee1在结直肠癌组织和细胞株中的表达情况。在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染miR-613 mimic,未转染细胞为对照组,采用CCK-8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下,过表达miR-613对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响。进一步实验,采用双荧光素酶报告基因验证miR-613与Wee1的靶向关系。在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染si-Wee1或同时转染si-Wee1和miR-613 inhibitor,未转染细胞为对照组,采用CCK-8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下,miR-613/Wee1分子轴对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响。结果miR-613在放疗抵抗结直肠癌患者组织中的表达量低于放疗敏感患者(1.54±0.25∶2.64±0.45;t=3.140,P=0.009),其在放疗抵抗结直肠癌细胞株中低表达(LoVo/R∶LoVo为1.03±0.12∶3.05±0.15,t=8.944,P=0.006;HCT116/R∶HCT116为1.01±0.11∶2.85±0.16,t=8.050,P=0.008)。同时,与对照组相比,过表达miR-613显著抑制结直肠癌放疗抵抗LoVo/R和HCT116/R细胞增殖(LoVo/R细胞:t6 Gy=6.018,P=0.013;HCT116/R细胞:t6 Gy=5.634,P=0.015),抑制细胞侵袭(LoVo/R细胞:45.00±8.95∶180.15±6.95,t6 Gy=11.93,P=0.003;HCT116/R细胞:49.97±6.21∶170.20±7.03,t6 Gy=12.82,P=0.006),并下调G2-M期相关蛋白细胞周期蛋白依懒性激酶1(CDK1)和cyclin B的表达水平。此外,双荧光素酶报告基因证实miR-613靶向作用于Wee1。进一步实验发现,miR-613通过靶向下调Wee1显著抑制LoVo/R和HCT116/R细胞增殖(转染si-Wee1、同时转染si-Wee1和miR-613 inhibitor以及对照组3组比较,LoVo/R细胞:F8 Gy=40.742,P=0.007;HCT116/R细胞:F8 Gy=28.958,P=0.011),抑制细胞侵袭(LoVo/R细胞:F8 Gy=55.413,P=0.004;HCT116/R细胞:F8 Gy=65.634,P=0.003),并将细胞阻滞在G2-M期,进而上调LoVo/R和HCT116/R细胞对放疗的敏感性。结论miR-613/Wee1分子轴与结直肠癌细胞放疗抵抗性存在调控关系,且过表达miR-613可逆转结直肠癌细胞的放疗抵抗性。