改良碘化钾法提取冻存外周血基因组DNA的方法探讨

目的探讨用改良碘化钾法(改良法)提取长期冻存外周血基因组DNA的方法。方法对碘化钾(KI)法加以改良,包括:血量由100μL增加到200μL;使用0.9%NH4CL溶液代替无菌重蒸馏水裂解红细胞;增加裂解白细胞膜的5mol/LKI溶液的用量(为70μL);低温(4℃)离心。然后用改良碘化钾法从82份-80℃冻存外周血标本中提取基因组DNA。同时使用碘化钾法提取其中的30份血标本,比对两种方法提取DNA的浓度和纯度,并进行CYP2C19相关基因PCR扩增。结果两种方法所提取的DNA浓度和纯度分别是碘化钾法为128.2±34.9μg/mL和A260/A2801.74±0.08,改良法为220±91.29μg/mL和A260/A2801.87±0.12。改良法获得的DNA纯度更高,差异有统计学意义(P<0.01),通过增加样本量及对方法进行改良获得的DNA量较多。对改良后方法提取的基因组DNA进行PCR扩增,结果稳定。结论改良碘化钾法从长期冻存外周血中所提取的基因组DNA质量较高,能够满足对临床冻存样本研究的需求。