亚低温通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨亚低温预处理肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠模型的保护作用机理。方法将40只SD大鼠分为4组:假手术(Sham)组、HIRI组、亚低温处理(MH)组和MH+LY294002处理(MH+LY)组,每组10只,分别于肝缺血再灌注3、6、12、24 h后收集大鼠的血清及肝组织标本。采用Western Blot检测大鼠肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt,Ser308)蛋白的表达水平。采用TUNEL法和Western Blot检测分析肝组织中细胞凋亡和凋亡相关蛋白的表达水平。采用ELISA试剂盒检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST活性。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 HIRI组p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显低于Sham组,差异均有统计学意义(q值分别为5. 217、5. 456,P值均<0. 01);经亚低温处理后大鼠肝组织中p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为10. 434、14. 116,P值均<0. 01)。HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠再灌注后3、6、12、24 h的血清AST、ALT活性明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0. 001)。TUNEL染色结果显示,HIRI组大鼠的细胞凋亡百分比[(42. 25±3. 50)%]明显高于Sham组[(3. 21±0. 5)%],差异均有统计学意义(q=10. 187,P <0. 01);相比于HIRI组,MH组明显下调了细胞凋亡百分比(12. 42±1. 3)%,差异有统计学意义(q=7. 784,P <0. 01),且HIRI组与MH+LY组的细胞凋亡百分比[(38. 19±2. 8)%]比较差异无统计学意义(q=1. 059,P> 0. 05)。Western Blot检测结果显示,与Sham组相比,HIRI组中抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下调,差异有统计学意义(q=2. 101,P <0. 05),促凋亡蛋白Bax、fas和fasl表达明显上调,差异均有统计学意义(q值分别为11. 016、4. 735、10. 201,P值均<0. 01),亚低温处理之后可明显下调HIRI对凋亡相关蛋白的调控作用。氧化指标检测结果显示,HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平均明显低于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0. 05),而MDA在HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中的表达水平均明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0. 05); MH组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为2. 894、2. 731,P值均<0. 05),但MDA的表达水平明显低于HIRI组,差异有统计学意义(q=5. 888,P <0. 05)。此外,亚低温+LY294002处理明显下调了MH组对肝组织中SOD、MDA和GSH-Px表达的调控作用,差异均有统计学意义(q值分别为2. 999、2. 944、2. 620,P值均<0. 05)。结论亚低温对HIRI大鼠具有保护作用,其机制可能是通过激活PI3K/Akt通路发挥下调肝细胞凋亡和增强体内抗氧化作用。

亚低温联合脂肪间充质干细胞对肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景:肝缺血再灌注损伤的机制复杂多样,是制约肝脏外科手术的瓶颈,如何减轻肝缺血再灌注损伤一直是医学研究的热点与难点之一。目的:探讨亚低温联合脂肪间充质干细胞预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠(购于昆明医科大学实验动物中心)随机分为6组:假手术组、肝缺血再灌注损伤组、亚低温组、脂肪间充质干细胞组、亚低温+脂肪间充质干细胞组、ERK通路阻断剂组,每组10只,均于缺血前30 min给予亚低温、脂肪间充质干细胞、ERK通路阻断剂干预。肝缺血再灌注12 h后收集大鼠血清及肝组织标本,进行相关指标检测。肝缺血再灌注12 h后收集大鼠血清、肝组织,术后7 d收集大鼠肝组织,进行相关指标检测。结果与结论:①全自动生化分析仪检测肝功能指标:亚低温组、脂肪间充质干细胞组、亚低温+脂肪间充质干细胞组血清中天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶活性均低于肝缺血再灌注损伤组(P <0.05),亚低温+脂肪间充质干细胞组血清中3种酶活性低于亚低温组和脂肪间充质干细胞组(P <0.05);②ELISA检测氧化应激指标:亚低温组、脂肪间充质干细胞组、亚低温+脂肪间充质干细胞组肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于肝缺血再灌注损伤组(P <0.05),丙二醛水平均显著低于肝缺血再灌注损伤组(P <0.05);亚低温+脂肪间充质干细胞组肝组织中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平显著高于亚低温组和脂肪间充质干细胞组(P <0.05),而丙二醛水平低于亚低温组和脂肪间充质干细胞组(P <0.05);③Western blotting检测相关蛋白表达:与肝缺血再灌注损伤组相比,亚低温组、脂肪间充质干细胞组、亚低温+脂肪间充质干细胞组肝组织中p-ERK1/2相对表达水平显著升高(P <0.05),各组中ERK1/2的表达差异无显著性意义;④TUNEL检测肝细胞凋亡数量:肝缺血再灌注损伤组和ERK通路阻断剂组肝组织中细胞凋亡率明显高于亚低温组、脂肪间充质干细胞组、亚低温+脂肪间充质干细胞组。同时,Western blotting检测相关凋亡蛋白结果与其一致;⑤结果表明,亚低温联合脂肪间充质干细胞对肝缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与激活ERK通路进而下调肝细胞凋亡有关。

骨髓间充质干细胞对COPD-OSA重叠综合征大鼠肺血管内皮损伤的修复作用观察

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)-阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)重叠综合征大鼠肺血管内皮损伤的修复作用,并探讨其可能的机制。方法取SPF级雌性SD大鼠2只,分离、培养其BMSCs并进行鉴定。取SPF级雌性SD大鼠16只,采用烟熏联合间歇低氧的方法制备COPD-OSA重叠综合征大鼠模型,随机分为观察组和对照组,每组8只。观察组经尾静脉注射BMSCs 2×106/次,1次/周,共4次;对照组注射等体积、等次数的生理盐水。两组治疗后1周,处死后取肺组织。HE染色及MASSON染色后观察肺组织、肺小动脉病理改变,采用DAPI-CD34-TUNEL三重定性法观察肺组织血管内皮细胞凋亡情况,采用ELISA法检测肺组织内皮素1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)表达。结果与对照组比较,观察组肺组织病理呈现的肺气肿、肺间质淋巴细胞浸润、中性粒细胞浸润以及支气管壁淋巴细胞增生、细支气管管壁平滑肌增生、杯状细胞增生等病理改变更轻,肺小动脉肌化、外膜胶原纤维沉积、血管壁结构异常、血管周围炎症、肺间质增厚等病理改变较轻。观察组与对照组肺组织血管内皮细胞凋亡率分别为2.3552%±0.3923%、1.3339%±0.1553%,两组比较P<0.01。观察组肺组织ET-1、VEGF表达均低于对照组,eNOS表达高于对照组(P均<0.05)。两组肺组织SDF-1α表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论经尾静脉注射BMSCs可减轻COPD-OSA重叠综合征大鼠的肺组织血管内皮损伤、抑制血管内皮细胞凋亡,其机制可能与降低ET-1表达及升高eNOS表达有关。

甲氨蝶呤致严重毒副作用1例

甲氨蝶呤应用最广泛,为抗代谢类药物,在细胞周期中抑制二氢叶酸还原酶,干扰嘌呤核苷酸的合成,从而抑制DNA的合成和细胞复制[1]。妊娠期滋养细胞增生活跃,对甲氨蝶呤的抑制作用较正常细胞敏感,故临床中常用于异位妊娠的保守性治疗[1]。应用大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗后不良反应主要为黏膜损害、肝功能损害及骨髓抑制[2];亦有发生皮肤症状,而应用低剂量甲氨蝶呤即引起严重骨髓抑制和重症药疹的病例极为少见,笔者近日在临床工作中遇到1例,现报告如下。