经肾动脉自体骨髓干细胞移植治疗急性肾小管坏死的实验研究

目的:采用经肾动脉灌注移植兔自体骨髓干细胞,观察自体骨髓干细胞移植对缺血再灌注(I/R)后急性肾小管坏死肾功能的作用及其机制。方法:28只日本大耳白兔采集骨髓,分离自体骨髓干细胞,5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记。全部实验兔建立肾脏I/R后随机分为移植组和对照组。移植组于肾血流恢复后经肾动脉灌注自体骨髓干细胞悬液,对照组同样方法注射等体积生理盐水。分别于I/R前和I/R后第1、3、5、7、14、21、28 d静脉采血,检测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),相同时点取肾组织行普通病理及BrdU免疫组化观察。结果:I/R后第1 d和第3 d 2组动物SCr、BUN均达到最高水平,以后逐渐下降;第7 d后移植组SCr及BUN水平逐渐低于对照组,到实验观察结束时的第28 d,对照组SCr和BUN分别为(135.6±32.5)μmol/L和(10.9±2.5)mmol/L,移植组SCr和BUN分别为(90.1±11.1)μmol/L和(8.0±1.5)mmol/L,2组间有显著差异(P<0.05)。普通病理观察,I/R后肾小管上皮细胞变性、坏死甚至脱落,BrdU免疫组化染色显示移植组于细胞移植后第5、7 d肾小管BrdU阳性染色并持续至实验结束,对照组阴性。结论:骨髓干细胞移植可以在一定程度上加速急性肾小管坏死后肾功能修复,自体骨髓干细胞移植是1种加速急性肾小管坏死后修复的安全而有效的方法。

实验动物产业化中若干策略的探讨

实验动物已成为生物技术和新医药产业的不可缺少的基础产业。实验动物事业产业化是必然趋势。本文就实验动物产业化中的若干问题和策略进行了探讨。

1556例孕妇妊娠高血压综合征的预测及干预效果观察

目的探讨妊娠高血压综合征的预测及预防效果。方法应用SD-Ⅱ型妊娠高血压预测分析系统,对我院门诊定期产检的1556例孕妇进行妊娠高血压预防性监测,筛选出妊娠高血压疑似患者523例。随机分为干预组和观察组。其中,干预组为264例,给予药物治疗和特殊护理干预;观察组为259例,只定期产前检查,做一般护理干预。结果干预组中发展为妊娠高血压12例,发生率为4.55%;观察组中发展为妊娠高血压26例,发生率为10.16%,干预组妊娠高血压的发病率明显低于对照组(P<0.05)。结论通过应用SD-Ⅱ型妊娠高血压监测系统预测妊娠高血压,并对高危人群进行干预,能有效降低妊娠期高血压疾病的发病率。

188例宫颈病变患者HPV分型检测的结果分析

目的利用人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)分型检测宫颈病变,提高诊断率。方法对188例宫颈病变患者采集宫颈脱落细胞,利用PCR-反向点杂交法进行HPV分型检测。结果 188例标本中,52例阳性,HPV感染率27.66%;感染居前5位的高危亚型依次为16、18、66、33和58型,低危亚型由高到低依次为6、11、43、42型;多重感染以双重感染为主(17/19),16型和6型参与频率较高。结论 HPV型别分布具有地区差异性,采用PCR-反向点杂交法有利于研究本地妇女的HPV易感型别,HPV检测对于早期筛查和治疗宫颈癌具有积极意义。

供体年龄影响融合生长内皮祖细胞对平滑肌细胞表型转换及增殖迁移的作用

目的：探讨老龄和年轻个体来源融合生长状态内皮祖细胞（EPCs）对血管平滑肌细胞（SMCs）表型转换以及增殖和迁移的调节作用。方法：脱臼处死1～2月龄、19～26月龄SD大鼠，应用含15％ FBS的DMEM／F12培养基（含内皮细胞生长添加剂100 mg／L、肝素100 mg／L、青霉素、链霉素各1×105 U／L）培养EPCs，取1～2月龄大鼠腹主动脉，组织块法培养血管SMCs，应用DiI-Ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染以及α-SM-actin免疫荧光分别对EPCs和SMCs进行鉴定。建立细胞共培养体系，上室为融合生长状态的EPCs，下室为SMCs，实验分4组：（1）第3代SMCs（P3）组；（2）第4代SMCs（P4）组；（3）第4代SMCs与年轻大鼠来源EPCs共培养（P4YE）组；（4）第4代SMCs与老龄大鼠来源EPCs共培养（ P4AE）组。 Western blotting检测α-SM-actin和osteopontin蛋白的表达；[3 H ]-TdR掺入法检测SMCs增殖；细胞划痕实验检测SMCs的迁移能力。结果：与P3组相比， P4组的SMCsα-SM-actin表达显著下调，而osteopontin表达显著增强；P4YE组SMCs的α-SM-actin及osteopontin表达与P3组比较未见有显著差别；与P4组相比，年轻和老龄大鼠来源的EPCs均显著促进第4代SMCs的α-SM-actin和下调osteopontin的表达，抑制第4代SMCs的增殖和迁移；与老龄大鼠来源的EPCs相比，年轻大鼠来源的EPCs更能够显著延迟SMCs表型由收缩型向合成型转换，抑制SMCs增殖和迁移。结论：共培养融合生长状态的EPCs使血管SMCs表型转换延迟、抑制SMCs增殖和迁移，年轻大鼠来源的EPCs较老龄大鼠来源的EPC更显著延迟血管SMCs表型由收缩型向合成型转换，并具有更强的抑制血管SMCs增殖和迁移的能力。

痛风发病机制研究进展

痛风是长期嘌呤代谢障碍及(或)尿酸排泄减少,血尿酸增高引起组织损伤的一组临床综合征。人类由于缺乏尿酸酶不能将嘌呤代谢产生的尿酸分解为可溶性的尿囊素排出体外,使尿酸成为人类嘌呤代谢的终产物。而与嘌呤代谢有关的酶活性的改变、与编码转运尿酸相关蛋白基因的突变以及尿酸盐结晶诱导的炎症反应,导致了痛风的形成及与痛风相关的各种症状的出现,从而使人们已开始从基因、分子水平来研究、认识此病。

应用PCR-反向点杂交法检测β-地中海贫血基因点突变

目的对疑似β-地中海贫血的4例患者进行基因诊断。方法针对β-珠蛋白基因上17个位点突变,使用特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应,明确检测样品在17个位点是否发生了突变,以及是否为突变纯合子或杂合子。结果 1号和2号患者均为CD17M(A→T)/N,βEM(GAG→AAG)/N双重杂合子;D3号患者为IVS-Ⅱ-654M(C→T)/N杂合子;D4号患者为IVS-Ⅱ-654M/IVS-Ⅱ-654M(C→T)纯合子。结论利用PCR-反向点杂交法技术,能对β-地中海贫血患者进行基因诊断,对其产前诊断、临床治疗以及携带者检出具有重要意义。

痛风的药物治疗现状及展望

痛风是长期嘌呤代谢障碍及(或)尿酸排泄减少,血尿酸增高引起组织损伤的一组临床综合征,高尿酸血症是痛风最重要的生化基础。目前,对于痛风与高尿酸血症的常规治疗仍以西药为主,通常选用秋水仙碱、非甾体类抗炎药、苯溴马隆、丙磺舒、别嘌呤醇等,这些药物以不同的作用环节达到缓解或治疗痛风与高尿酸血症的目的,但越来越多的临床观察发现它们都具有一定的毒副作用,因此,寻找更有效而毒副作用更低的药物已成为当前亟待解决的任务。近年来,国内外针对痛风的发病机制、临床症状及其并发症等方面的治疗药物进行了大量的研究,包括对中药、中成药的研究,对今后开发更多的靶向治疗药物,防治痛风与高尿酸血症将具有重要意义。

急性呼吸道感染成年患者病原体检测结果分析

目的通过对成年患者9种呼吸道感染病原体IgM抗体的检测,了解本地呼吸道病原体的流行情况,为临床提供早期诊断和治疗依据。方法选取成都军区昆明总医院呼吸道感染住院成年患者1 855例,通过9项呼吸道感染病原体IgM抗体试剂检测住院成年患者血清病原体抗体,分析9项呼吸道感染病原体在不同季节、不同年龄段成年患者血清中的检出情况。结果 1 855例患者血清IgM抗体阳性共510例,总阳性率为27.76%(510/1 855),阳性率较高的病原体依次为:MP(19.14%)、IFB(14.18%)、PIV(9.54%)和IFA(6.47%)。MP在6、7、8月的阳性率低于其他月份(P<0.05);IFA在5、6、7、10月的阳性率较高(P<0.05),IFB在5月阳性率最高,达30.61%(P<0.05);4、8月是PIV的高发期(P<0.05)。MP、IFB和PIV在16~30岁和>30~40岁这两个年龄段患者中的阳性率明显高于其他年龄段(P<0.05);IFA在16~30岁患者中的阳性率明显高于其他年龄段(P<0.05)。结论昆明地区成年人呼吸道感染的病原体主要为MP和各型流感病毒,并且病原体的阳性率与年龄和季节有关。

高效液相法测定水杨柳提取物中水柳皂苷的含量

目的建立测定水杨柳提取物中水柳皂苷的高效液相色谱法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为HYPER-SILBDS-C18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈∶水=75∶25;流速为1.0ml/min;检测波长为203nm;柱温为30℃;柱压为10.0MPa。结果该方法的线性范围为5～500μg/ml(r=0.9998);平均加样回收率为99.44%,RSD为0.52%(n=15)。结论该方法重现性好,精密度高,可用于水杨柳药材及其制剂的质量控制。

Notch1信号途径与血管损伤修复

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）等血管损伤性疾病病理变化主要表现为疵管损伤处内皮再生延迟及平滑肌细胞（smoothmusclecell，SMC）过度增生，导致新生内膜形成，引起血管的管腔狭窄，是造成心肌梗死、卒中等疾病的重要原因。探索有效促进损伤血管内皮再生和抑制新内膜增生措施，并深入认识其调节机制一直是血管损伤性疾病研究的热点。血管损伤修复调节是一极为复杂的生命活动过程，

HIV特异细胞免疫研究进展及其对疫苗发展的意义

细胞毒T淋巴细胞（CTLs）在控制人类免疫缺陷病毒（HIV）1型感染中起重要作用。然而其作用是有限的，因为HIV-1变异株的不断出现，这些变异株的CTL表位也发生了突变。一些HIV感染者疾病长期不进展，在这些感染者中存在高频数的HIV-1特异CTLs，是HIV感染被控制的原因还是结果需要进一步研究。新观点认为，不是CTLs溶解细胞活性，而是通过选择复制能力降低HIV-1变异株，使病毒载量减少。研究表明，为了达到防止HIV-1感染，疫苗应该引起广泛的、有效的中和抗体反应，同时引起有效的CTLs反应。本文对HIV细胞免疫研究进展和HIV疫苗的发展作一综述。

猕猴骨髓干细胞动员后外周血干细胞、免疫细胞亚群及细胞因子变化

目的:观察GM-CSF动员猕猴骨髓干细胞后外周血干细胞、免疫细胞亚群和细胞因子含量的动态变化,为临床干细胞动员及用于治疗疾病提供参考依据。方法:健康猕猴连续5 d,皮下注射GM-CSF 8μg/(kg.d),分别于0、2、4、6、8、10 d采集外周血,血细胞分析仪计数白细胞(WBC)总数、淋巴细胞和中性粒细胞比例,流式细胞术(FCM)测定CD34+、CD133+、CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞比例,酶联免疫分析法测定血清TNF-α、IL-1β、IL-2含量。结果:WBC、中性粒细胞、CD34+、CD133+细胞数量和比例均同步升高(P<0.01),到动员第6天时达到高峰,细胞数量分别为正常水平的6.4、9.1、117和163.3倍,其中CD34+、CD133+第8天时恢复正常,而WBC、中性粒细胞仍高于正常水平(P<0.05)。CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞的数量增加,细胞数在第6天时分别为动员前的4.1、4.0、2.9和4.3倍,但比例下降(P<0.01),到第6天达到最低(P<0.001),随后逐渐升高至正常以上水平并持续至第10天(P<0.05)。TNF-α、IL-1β、IL-2浓度于动员后6 d内明显升高(P<0.01),其中TNF-α、IL-1β浓度至8 d恢复正常(P>0.05),IL-2浓度升高幅度较大并至少持续至第10天(P<0.01)。结论:连续5 d动员猕猴骨髓干细胞可使外周血中CD34+、CD133+细胞比率短暂升高,WBC、中性粒细胞比例持续升高,使CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞绝对数增加,TNF-α、IL-1β、IL-2浓度升高,表明GM-CSF动员猕猴骨髓干细胞可在细胞和免疫调节因子水平提高免疫功能。

骨髓源性内皮祖细胞与内皮细胞共培养促进其向成熟内皮细胞分化的研究

目的:探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法:分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞(MNCs),MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染色进行鉴定。采用Transwell培养板,上、下室分别加入内皮祖细胞和内皮细胞,15%胎牛血清的NO.2 DMEM/F12培养液培养14 d,倒置相差显微镜观察培养内皮祖细胞的形态。RT-PCR检测eNOS、vWF mRNA,流式细胞术检测CD31及KDR的表达。结果:荧光双染显示培养的单个核细胞具有内皮祖细胞特性;共培养的内皮祖细胞呈短梭型、铺路石状,培养至4 w时有复杂的网状结构形成。RT-PCR检测显示,eNOS及vWF mRNA表达均较对照组显著增加(P<0.05)。流式细胞术分析表明,共培养组的内皮祖细胞CD31及KDR的表达,也显著高于对照组(分别为P<0.05及P<0.01)。结论:与内皮细胞共培养可促进内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化。

干细胞动员对骨创伤大鼠免疫功能的保护作用

目的:观察自体干细胞动员对骨创伤大鼠的免疫功能的保护作用,为战创伤后的免疫抑制及继发性感染、系统性炎症反应等治疗提供依据。方法:挤压折断法复制大鼠双后肢股骨骨折模型,于致伤后0、24、48 h连续给模型动物肌肉注射GM-CSF 20μg/kg,致伤后72 h细胞增殖法检测T、B淋巴细胞活性,ELISA法检测血清IL-1、IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度,自动系列化分析法检测C3、C4、IgM、IgG浓度,称重法观察脾重与体重的比例变化。结果:股骨骨折模型大鼠致伤后72 h,GM-CSF动员骨髓干细胞组大鼠的T、B淋巴细胞活性和血清IFN-γ、IL-2浓度高于对照组(P<0.01),IL-1、TNF-α浓度低于对照组(P<0.01),血清C3、C4、Ig M、IgG浓度及脾/体重比值高于对照组(P<0.01)。结论:GM-CSF动员自体干细胞动员对大鼠骨创伤诱导的免疫功能抑制具有保护作用。

39对不良孕产史夫妇外周血染色体核型分析

目的探讨染色体核型异常与不良孕产史之间的关系。方法采集39对(78例)不良孕产史夫妇外周血,用常规方法制备染色体,经G显带后进行染色体核型分析。结果 39对不良孕产史夫妇中,共检查出染色体异常核型者9例,占总受检者的11.54%,其中常染色体异常者6例(包括4例染色体多态性),占总受检者的7.69%;性染色体异常者3例,占总受检者的3.85%。结论染色体核型异常是引起不良孕产史的重要原因之一,对于不明原因的不良孕产史患者,有必要进行外周血染色体检查和遗传咨询。

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗中晚期泌尿生殖系统肿瘤效果观察

目的评估细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells,CIK）治疗中晚期泌尿生殖系统肿瘤的效果。方法对成都军区昆明总医院2005年6月—2010年2月收治的仅接受过手术治疗的38例中晚期泌尿生殖系统肿瘤行CIK治疗,比较治疗前后机体免疫状态变化、疗效及毒性反应、肿瘤标志物及生活质量变化。结果 2个疗程后,38例外周血免疫指标CD3^＋、CD56^＋、CD3＋CD56^＋T细胞百分率均较治疗前显著增高（P〈0.05）;临床缓解率达94.7%;相关肿瘤标志物（癌胚抗原、癌抗原125、乳酸脱氢酶及前列腺特异性抗原）水平均较治疗前显著下降（P〈0.01）;生存质量Karnofsky评分较治疗前平均提高10-20分,提高率为94.7%,平均体质量较治疗前增加1-2 kg。结论 CIK疗法为中晚期泌尿生殖系统肿瘤患者提供了一种可以延长生存期、提高生活质量的有效方法。

原发性肺动脉高血压治疗的研究进展

原发性肺动脉高血压(primary pulmonary hypertension,PPH)是常发生于30岁～40岁之间的女性,且对这些患者而言是发病率及死亡率均很高的一种进行性加重疾病.