基于气相色谱-质谱和超高效液相色谱的火麻油中萜烯类、大麻素类成分分析

基于气相色谱-质谱和超高效液相色谱分析方法,对火麻油中特色的萜烯、脂肪酸和大麻素类化学成分进行分析,并利用数据软件进行主成分分析。结果表明,云南火麻油中含有较为丰富的特征风味性萜烯类成分,如β-石竹烯、β-月桂烯、柠檬烯等;火麻油中脂肪酸含量丰富,尤其亚麻酸和亚油酸接近黄金比例,营养价值高;在不同品种、不同工艺火麻油中均检测到微量、多种大麻素成分,脱壳工艺使火麻油中大麻素成分含量明显降低,冷榨工艺更适合火麻油加工。通过本研究对我国火麻油的食品安全性进行讨论并提出建议。最后对萜烯和大麻素进行主成分分析,找出其中的重要区分物质,对4种火麻油样本进行完美地区分与鉴定。

博落回提取物、金霉素单独和联合添加对后备蛋鸡肠道健康和微生物区系的影响

试验旨在探讨饲粮中单独和联合添加博落回提取物(Macleaya extract,MCE)、金霉素(Chlortetracycline,CC)对2~17周蛋鸡肠道健康和肠道微生物的影响,同时探讨博落回提取物的替抗作用。选取1日龄海兰褐雌性雏鸡1440只,随机分成4个处理,分别饲喂基础饲粮(对照组)、基础饲粮+500 mg/kg博落回提取物(MCE组)、基础饲粮+50 mg/kg金霉素(CC组)、基础饲粮+500 mg/kg博落回提取物+50 mg/kg金霉素(联合组)。试验共17周。结果表明:与对照组相比,MCE组6周小肠综合评分显著降低(P<0.05);联合组6周小肠综合评分、17周十二指肠评分和回肠评分显著降低(P<0.05)。与对照组相比,MCE组Simpson指数、厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度显著提高(P<0.05),理研菌科(Rikenellaceae)相对丰度显著降低(P<0.05);CC组Chao1指数和理研菌科相对丰度显著降低(P<0.05),Simpson指数和普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)相对丰度显著提高(P<0.05);联合组Simpson指数显著提高(P<0.05)。3个试验组相比,MCE组和联合组的ACE指数、Chao1指数显著高于CC组(P<0.05),联合组相比CC组普雷沃氏菌科相对丰度显著降低(P<0.05)。由此可见,MCE可以降低小肠评分,改善盲肠微生物区系结构,有益于维系肠道健康和菌群平衡,其作用效果明显优于CC。

案例式教学在《兽医公共卫生学》课程中的探索与实践

《兽医公共卫生学》是动物医学专业的核心课程之一。为了提高教学质量,提升学生的学习兴趣,适应新型兽医人才培养要求。以《兽医公共卫生学》课程为例,对云南农业大学2届学生进行案例教学的实践与探索。结果表明,案例教学能显著地提高期末卷面成绩,学生对案例教学满意度较高,案例式教学能激发学生学习兴趣、增强学生现场认知感,提高学生综合能力,有利于提升《兽医公共卫生学》教学效果,为课程案例库建设提供依据。

缅甸进口姜黄无机元素分析研究

通过测定缅甸进口姜黄中26种无机元素,并对进口姜黄中重金属含量进行风险评价,为缅甸进口姜黄的质量控制奠定基础。采用微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对24批来自缅甸地区的姜黄中的26种无机元素进行测定,通过靶标危害系数(THQ)和总危害指数(HI)对Pb、Cd、Cu 3种元素进行非致癌风险评价,用终生致癌风险(R)对As进行致癌风险评价。结果表明,缅甸进口姜黄中含有24种无机元素,其中K、Na、Mg、Ca 4种营养元素含量占24种无机元素的92.39%。缅甸姜黄中均未检出Sn、Hg 2种金属元素,Pb、Cd、As、Cu、Hg 5种重金属元素含量均符合2020版《中国药典》限定值。经过缅甸姜黄中Cu、Pb、Cd 3种重金属元素健康风险评价,THQ和HI均小于1,表明人体通过缅甸姜黄摄入的Cu、Pb、Cd不会对人体造成非致癌伤害。经过对姜黄中As的致癌健康风险评价,致癌风险R为7.72×10-6,低于世界卫生组织建议的致癌风险值(1.00×10-5),通过缅甸姜黄摄入的总As不存在致癌风险。总体而言,缅甸进口姜黄重金属元素保持在较好水平。

理化及生物转化稀有人参皂苷的方法

为了实现稀有人参皂苷的大批量生产,从生物、化学、物理3个角度综述稀有人参皂苷的制备方法,从催化剂、转化条件和制备效率等方面进行总结和分析。结果显示,生物转化具有效率高、环境友好等优点,其转化效率大多高于化学转化和物理转化。此外,在所有参与转化的底物中,人参皂苷Rb_(1)、Rb_(3)较容易被转化成稀有人参皂苷CK、Rh_(2)、Rg_(3)等,Rb_(1)、Rb_(3)转化生产稀有人参皂苷Rg_(3)、CK等已较为成熟和产业化,随着技术的不断进步,稀有人参皂苷的批量生产技术水平将不断提升。

关于新海关助推“陆海新通道”建设的思考

“陆海新通道”是新时代推进西部大开发形成全面开放新格局的重要支撑,是连接“一带一路”和长江经济带的战略通道,是推动中国—东盟区域经济合作向更高层次发展的重要载体。由于缺乏顶层制度设计,硬件设施落后,多式联运体系不完善等原因,导致通道发展并不理想。本文综合运用马克思主义哲学矛盾论、实践论等基本原理,抓住“陆海新通道”发展面临的主要矛盾和矛盾的主要方面,以联系发展观点,立足海关视角从“力”“策”“智”三个方面提出建议,助推“陆海新通道”更加安全畅通,推动其成为“一带一路”建设的又一标志性成果。

发挥海关职能优势 促进桥头堡建设

作为国家对外外放的门户，海关是连接国内国际两个市场、两种资源的桥梁和纽带，是吸引外资、发展经济的窗口和通道，

海关缉毒犬装备使用定位初探

海关缉毒犬的使用主要集中在国际邮件、进出境口岸旅检现场、货物查验等方面。随着海关与原检验检疫部门的整合及缉私警察体制改革的不断深入,海关缉毒犬在海关监管现场的查验作用也发生了变化,这影响了海关缉毒犬在口岸缉毒战线的长期健康发展。海关缉毒犬的工作原理、优势特点、现实处境和发展需求决定了其装备定位亟待重新调整。

CMM与海关软件开发

CMM 是能力成熟度模型(Capability Maturity Model)的缩写,是一种用于评价软件承包能力并帮助其改善软件质量的方法,也就是评估软件能力与成熟度的一套标准。这里引入 CMM 这套管理思路延伸至海关软件开发的方方面面,提高软件开发与生产的成熟度,可以使新技术的应用收到更好与更快的效果,将海关软件开发管理水平真正提升到一个新水平。

加强海关合作,促进滇越经贸的健康发展

一、中越两国海关开展合作的必要性 中越两国海关有着相同或相似的职责,在新的形势下,开展海关双边合作具有重要的作用和意义. (一)加强中越海关合作是促进两国经贸发展的迫切要求 近年来,中越双方加强和扩大了在各个领域的全面合作,尤其是经贸合作取得了良好成绩,中国已成为越南的第二大进口国和第5大出口国.2001年滇越贸易总额达到了1.61亿美元,较上年增长60.5%,越南已成为云南对外贸易的第三大伙伴.双方在边境贸易方面也十分活跃,边境贸易额已占双边贸易额的60%以上.在旅游方面双方也开展了良好合作,跨国旅游已成为双方继经贸往来之后的一个新亮点.

利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞

利用CRISPR/Cas9系统构建猪的低密度脂蛋白受体基因LDLR敲除细胞:根据NCBI数据库猪LDLR基因(Gene ID为396801)序列设计sg RNA靶位点,构建敲除打靶载体,通过电转染猪胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得细胞克隆,进行PCR扩增和T载体克隆测序,经序列比对计算基因敲除效率。结果表明,依照CRISPR/Cas9系统GN20GG法则,在LDLR基因第一外显子上设计1条sg RNA,测序结果显示靶序列已正确连接,转染、筛选后共获得30个单细胞克隆,23个测序成功,其中有7个细胞克隆为LDLR基因敲除细胞克隆,敲除效率为30.4%。

强化发展理念,加快推进现代新边关建设——对贯彻落实2012年全国海关关长会议精神的考虑和打算

2012年全国海关关长会议结束后，昆明海关迅速在全关范围内掀起学习贯彻会议精神的高潮。通过深入学习领会会议精神，我们在2011年制定实施《昆明海关党组关于推进现代新边关建设的指导意见》和《昆明海关中长期发展规划》的基础上，进一步提出强化“科学发展、规范发展、

猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究

【目的】分析猪源戊型肝炎病毒(Swine hepatitis E virus,sHEV)4型ORF2蛋白的结构和功能,筛选具有保护性抗原的基因片段并表达蛋白,为研究其作为潜在保护性抗原提供候选蛋白。【方法】对sHEV 4型ORF2蛋白进行生物信息学分析,选取具有潜在保护性抗原蛋白的基因片段ORF 2(128/140),通过PCR扩增、酶切后克隆至昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞,通过Western blotting鉴定分析表达蛋白p128/p140。【结果】生物信息学分析显示,sHEV 4型ORF2蛋白存在2个稳定蛋白:p128和p140,分别含有496和476个氨基酸,二者皆为稳定蛋白,无跨膜区,蛋白二级结构主要以无规则卷曲为主。p128蛋白有11个T细胞表位、21个B细胞表位;p140蛋白有14个T细胞表位、18个B细胞表位。成功构建ORF 2(128)、ORF 2(140)2个基因的昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞后经Western blotting检测发现,表达蛋白可被His标签单抗、sHEV抗体阳性血清识别。【结论】试验发现2个sHEV具有潜在保护性抗原的p128和p140蛋白,均可在sf9细胞中表达,且具有免疫活性。结果为进一步研究sHEV ORF2蛋白的功能和新型疫苗的研发提供了材料。

利用CRISPR/Cas9技术构建PPARγ基因敲除的IPEC-J2细胞系

【目的】利用CRISPR/Cas9技术敲除猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)基因,进而在细胞水平上研究PPARγ基因与肠道炎症反应相关的生物学机制。【方法】根据猪PPARγ基因序列(GenBank登录号:NM_214379),在第2外显子区域设计2对sgRNA序列,经退火形成DNA双链后连接至真核表达载体gRNA_GFP-T1;将构建成功的PPARγ正向打靶载体、反向打靶载体、Cas9-nickase质粒共转染至IPEC-J2细胞,经G418药物筛选获得单克隆细胞株,提取单克隆细胞株DNA后进行PCR扩增,经凝胶电泳鉴定后送测序;挑选基因敲除效果最佳的细胞株,利用免疫荧光法检测PPARγ蛋白表达情况。【结果】打靶载体测序结果显示,打靶序列正确连接;经转染、筛选后共获得48株单克隆细胞;测序结果显示,6株单克隆细胞出现双峰,分别为KO-15、KO-17、KO-21、KO-25、KO-32和KO-35;选择底峰较高的KO-25进行免疫荧光检测,结果显示PPARγ蛋白表达降低。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术成功获得了PPARγ基因敲除的IPEC-J2细胞,为后续进一步研究PPARγ基因在炎症反应中的功能奠定了基础。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速检测三七农药残留

目的:利用超高效液相色谱–四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱建立三七中农药多残留的检测方法,快速筛查三七中的多种农药残留。方法:建立66种农药的高分辨质谱数据库,样品采用乙腈提取,QuECHERS净化,在Full MS-dd MS^(2)正离子扫描模式下对三七中的66种目标化合物进行检测,然后与数据库中目标化合物信息进行比对,用基质匹配外标法定量。结果:66种农药在0.005~0.5 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,加标回收率在71.7%~110.3%之间,相对标准偏差为1.2%~6.8%。结论:该方法根据高分辨质谱库进行检索并使用多种特征碎片离子进行确证,具有简便、快速、高效等优点,适用于三七中农药多残留的快速筛查和测定。

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

牛病毒性腹泻病(bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染导致的传染病。该病会导致牛生产性能下降,给全球养牛业带来严重的经济损失。BVD的临床表现和病理变化与其他牛源腹泻病毒病相似,因此有必要根据不同的条件选择快速高效的BVDV诊断方法,及时采取措施阻断BVDV在牛群间、BVDV持续感染牛(persistently infected,PI)与健康牛之间传播,减少BVDV对养牛业造成的经济损失。用于BVDV检测的方法很多,主要有病毒分离鉴定、荧光定量RT-PCR、RT-PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、胶体金免疫检测技术(GICT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、抗原捕获ELISA(AC-ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)等。近年一些新兴技术和优化的方法被应用于BVDV的检测,如抗体液相芯片技术、CRISPR-LwCas13a系统、双重纳米RT-PCR法等,均具有特异性强和灵敏度高等优点。作者从抗原、抗体两个方面总结了BVDV检测方法的研究进展,并比较各检测方法的优缺点,便于各级兽医研究机构和生产单位根据实际情况选择合适高效的BVDV检测方法,以期为BVD的流行病学调查和防治提供参考依据。

检测实验室质量管理体系中设备管理方式的研究

设备管理是检测实验室依据质量管理体系文件对实验室检测结果进行有效控制的重要环节,通过对质量管理体系中设备管理工作流程的梳理和总结,得出检测实验室设备管理的两种方式,分类管理和流程管理。分类管理是横向管理和宏观管理,体现设备管理工作的计划性,流程管理则是纵向管理和微观管理,体现设备管理工作的可追溯性,实验室将两种管理方式有效地结合起来,可以提高实验室的设备管理工作的效率,降低设备影响实验室检测结果有效性的风险。

赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立

为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为:重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2000二抗稀释比,封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。

赤羽病病毒G1蛋白生物信息学分析及截短基因的真核表达

为得到赤羽病病毒(AKV)G1蛋白的截短表达产物作为诊断抗原,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等技术手段,成功克隆出优势抗原结合表位区Thr189-Val 397对应的目的基因G1-2。将目的基因克隆至昆虫杆状病毒表达载体pFastBac HTB,将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-AKV-G1-2,用Cellfectin ReagentⅡ介导转染sf9细胞,获得重组蛋白,Western blot法检测和分析重组蛋白表达情况。软件分析结果表明189~397 aa肽段为亲水性蛋白,存在跨膜区,该蛋白存在多个潜在的磷酸化位点,具有丰富的潜在抗原表位,属于优势抗原肽段,选取该肽段进行截短真核表达,以AKV抗体阳性血清进行Western blot鉴定,重组蛋白能被特异性识别,出现预期蛋白反应条带,表明G1-2蛋白成功表达,分子量约为27 kDa。本研究为进一步开展截短表达产物为抗原的赤羽病病毒诊断试剂研制奠定了基础。