临床医学课程及实践教学质量保障体系的建立

通过健全教学机构,整齐教师队伍,完善教学制度,规范临床教学管理流程和临床实践带教,强化"三基训练"等措施的实施,积极探索构建临床医学专业课程及实践教学质量保障体系,以完善附属医院临床理论和技能的教学方法和模式,实现理论与实践并重的办学特色,最终促进教学质量和毕业生质量的整体提高。

肌少症与膝关节置换术后假体周围感染的研究进展

人工膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)能够有效解决患者疼痛、肿胀、畸形等症状,有利于重建膝关节功能,对提高患者预后具有重要意义,但TKA术后感染是主要并发症之一,特别是假体周围感染(prosthetic joint infection,PJI),尽管发生率不高,但破坏性极强,严重影响患者生理和心理健康,并且增加患者医疗费用。作为老年人一种慢性特发性疾病,肌少症表现为骨骼肌量、肌力及其功能下降,肌少症患者常具有高龄、肥胖、低蛋白血症、贫血、高炎性因子、常合并多种疾病,术前CCI、 ASA评分高等特征,这些因素都可能与假体周围感染有关,本文将对此进行综述。

硫代乙酰胺诱导的急性肝损伤大鼠肝组织Norrin/Frizzled-4表达的变化

目的建立硫代乙酰胺(TAA)诱导的大鼠急性肝损伤模型,探讨Norrin/Frizzled-4在肝损伤间质重建中的作用。方法随机将32只SD大鼠分为正常对照组(N组)8只和TAA诱导组(M组)24只。建立TAA诱导的肝损伤大鼠模型。采用ELISA法检测血清CD105和血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平,采用Western blot法检测原代肝星状细胞和肝组织Norrin/Frizzled-4信号通路中细胞外配体蛋白Norrin和细胞膜特异性受体蛋白Frizzled-4的表达。结果 24只TAA诱导组大鼠死亡11只(45.8%);病理学检查显示急性肝损伤大鼠模型建立成功;对照组血清CD105水平为(2.18±0.05)ng/mL,显著低于TAA处理1 w组的(2.36±0.07)ng/mL或2 w组的(2.42±0.03)ng/mL,差异均有显著性(P<0.05);对照组血清VEGF为(61.48±0.39)pg/mL,显著低于模型组的(64.52±0.25)pg/mL,差异均有显著性(P<0.01);原代肝星状细胞和正常肝组织不表达Norrin蛋白或Frizzled-4蛋白,或表达量很低,急性肝损伤大鼠肝组织Norrin/Frizzled-4表达显著高于正常对照组,差异均有显著性(P<0.01)。结论急性肝损伤大鼠肝组织Norrin/Frizzled-4蛋白表达上调,可能与急性肝损伤初期维持血管网络形态及肝间质重建有关。

党参、黄精和三七提取物增强超氧化物歧化酶基因启动子转录活性的研究

目的探讨党参、黄精和三七等中药提取物对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因启动子活性的影响。方法使用乙醇超声萃取和旋转蒸发的方法从党参、黄精和三七等中药中制备醇提物;然后从人胚肾293T(HEK-293T)细胞基因组DNA中扩增SOD基因启动子DNA片段并连接入启动子报告质粒pGL3-Basic中,通过荧光素酶活性检测成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;细胞活力测定(MTS法)确定了中药提取物的使用浓度后,将pGL3-SOD启动子报告质粒转染HEK-293T细胞,然后加入党参、黄精和三七等中药提取物,并通过检测荧光素酶活性来测定这些中药提取物对SOD基因启动子活性的影响。结果PCR扩增出1500 bp SOD基因启动子片段,大小与文献和GenBank数据库报道一致,成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;与转染空载体pGL3-Basic相比,转染pGL3-SOD启动子报告质粒的HEK293T细胞的荧光素酶活性增强了72倍;党参、黄精和三七中药提取物在50~400μg/mL时对HEK-293T细胞的活力影响不明显,400μg/mL的党参、黄精和三七提取物增强SOD基因启动子活性分别为1.79、1.72和1.57倍。结论成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒并具有启动荧光素酶活性;党参、黄精和三七增强SOD的活性可能是通过增强其基因的启动子活性水平来实现。

人星状病毒非结构蛋白nsP1 a／1相互作用的宿主细胞靶蛋白筛选

目的：利用细菌双杂交技术筛选与人星状病毒非结构蛋白nsP1a／1相互作用的蛋白。方法培养人肠道细胞HT29，提取基因组，利用细菌双杂交系统载体pUT18 C构建HT29基因组文库，同时构建诱饵载体nsP1a／1-pKT25。将文库和诱饵载体共转化进入细菌BTH101，在M63培养基上进行筛选。结果通过酶切鉴定以及测序分析，诱饵载体构建正确，并且利用细菌双杂交技术成功从HT29细胞基因组文库中筛选出能与人星状病毒非结构蛋白 nsP1a／1相互作用的蛋白。结论成功构建了人星状病毒非结构蛋白nsP1a／1的诱饵载体，在HT29细胞基因组文库中筛选得到了3个与nsP1a／1相互作用的蛋白，为进一步研究人星状病毒在细胞内的增殖和防治药物的应用奠定基础。

Th17细胞在免疫相关性全血细胞减少症中的免疫调节作用

Th17细胞是以产IL-17A、IL-17F为主的CD4＋T细胞，并因此而得名。研究表明Th17细胞分化、转录及相关细胞因子等在机体免疫防御、免疫稳定维护中发挥重要作用。免疫相关性全血细胞减少症（immuno-related pancytopenia，IRP）涉及多个临床学科，造血早期自身抗体及免疫调节功能可能是其症结所在。研究Th17细胞与IRP发生之间的相关性，对临床诊断、治疗靶点具有重要意义。近年来，大量的研究结果表明。Th17细胞与一些免疫性疾病溃疡性结肠炎、急性冠状动脉综合征、类风湿性关节炎、骨髓异常综合征等有关。因此，文章就，Th17细胞在免疫性疾病IRP中的调节作用进行重点综述。

以CAT为报告基因的蜡样芽孢杆菌强组成型启动子的筛选及初步鉴定

目的从蜡样芽孢杆菌基因组中筛选组成型启动子，并对其活性进行鉴定。方法用Sau3AI酶切蜡样芽孢杆菌的基因组，回收片段，连接载体pCMR8a，转化DH5ct感受态后涂布在氯霉素和卡那霉素的培养基上得到强启动子，并对其进行截短和顺反性实验，并检测其启动蛋白表达情况。结果成功筛选到一个具有反向启动外源蛋白表达能力的启动子序列，并能够有效表达多种外源蛋白。结论本实验成功筛选并验证了蜡样芽孢杆菌的一种组成型启动子，能够有效地启动外源蛋白的表达．对实验室中表达某种或某些蛋白和工业生产提供了更多的选择。

柯萨奇病毒A16型2 B基因的酵母双杂交诱饵载体的构建及其特性鉴定

目的：构建柯萨奇病毒A16的2B基因的酵母诱饵表达载体，用于筛选与2B相互作用的蛋白。方法 PCR扩增2B全序列，克隆入pGBKT7？BD，将构建好的 pGBKT7？2B转化到酵母细胞 Y2HGold；用Western印迹分析诱饵蛋白的表达，检测诱饵蛋白有无毒性和自激活效应。结果成功克隆了pGBKT7？2B并转化至Y2 HGold中，转化细胞Y2 HGold [pGBKT7？2B]可以表达诱饵蛋白2B，2B蛋白对转化细胞无细胞毒性和自激活效应。结论成功构建了酵母诱饵表达载体pGBKT7？2B，可用于酵母双杂交筛选与2B蛋白相互作用的宿主靶蛋白。

戊型肝炎病毒感染HepG2细胞蛋白质组学研究

比较人肝癌细胞系HepG2细胞感染和未感染HEV后细胞内蛋白质表达谱的变化，为初步探索HEV在宿主细胞内感染机制及致病机理奠定基础。方法RT．nPCR和免疫荧光确认HEV感染HepG2细胞后．利用同位素标记相对和绝对定量（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ）技术比较HEV感染组与未感染组HepG2细胞蛋白质表达差异。结果HEV感染导致328种蛋白发生变化，与未感染组相比，262种蛋白表达上调，66种蛋白表达下调。结论HEV感染HepG2细胞导致大量蛋白差异表达．功能预测表明这些蛋白涉及到宿主的物质代谢、细胞信号转导、免疫蛋白、细胞骨架成分等方面，为今后研究HEV感染机制和致病机理奠定基础。

膜联蛋白A2在病毒复制过程中的作用

膜联蛋白A2是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，是膜联蛋白家族中最具有代表性的成员之一，参与了细胞的多种生物学功能。在病毒感染细胞时，与膜联蛋白A2存在多种相互作用。文章综述了膜联蛋白A2在病毒复制过程中发挥的功能及作用机理，为膜联蛋白A2的相关研究以及抗病毒药物的筛选提供参考。

甲型副伤寒沙门氏菌噬菌体PSPA1感染宿主相关基因分析

目的分析影响甲型副伤寒沙门氏菌（副甲）噬菌体（PSPA1）感染宿主相关基因。方法诱导副甲利福平抗性株（副甲Rif^＋）；将副甲Rif^＋与SM10λpir／pSC189接合转座，噬菌体PSPA1处理转座菌液后，涂布卡那霉素、利福平双抗平板筛选转座突变菌；提取抗噬菌体突变菌基因组，热不对称PCR、回收片段并测序；测序结果提交NCBI进行序列比对，确定转座质粒插入副甲基因组的位点。结果成功诱导出副甲Rif^＋；筛选到6株抗噬菌体的突变菌；测序、NCBI比对发现6个不同的插入基因。结论利用转座子插入获得抗噬菌体感染甲型副伤寒沙门氏菌突变体，对这些突变体进行PCR、测序分析，说明可能有6个基因及相应的酶或蛋白与抗噬菌体相关，为进一步分析噬菌体与寄主菌相互作用关系提供基础。

中国人群肥厚型心肌病MYH7基因突变的研究与展望

肥厚型心肌病（hypertrophic cardiomyopathy，HCM）是一种以左心室或室间隔不对称性肥厚为基本特征的最常见遗传性心脏病，该病是青少年及年轻运动员猝死的最主要原因。先天基因缺陷是HCM主要的分子遗传学基础，其遗传方式遵循常染色体显性遗传模式。与HCM发病相关的基因较多，其中编码心脏β-肌球蛋白重链（cardiac beta-myosin heavy chain, MYH7）基因为HCM最主要的致病基因。通过查阅文献，检索到目前已报道的587例中国HCM患者被进行MYH7基因突变筛查，统计结果表明：共有150例中国HCM患者由MYH7基因外显子上的66个致病性突变所致。对已报道的中国HCM人群MYH7基因的突变特点进行总结和分析．这将为中国HCM人群的诊断、预防和治疗提供参考依据。

赖氨酰氧化酶样蛋白－2与肿瘤

赖氨酰氧化酶样蛋白－2（ lysyl oxidase－like 2 protein， LOXL2）在细胞外主要参与胶原蛋白与弹性蛋白之间的交联作用。 LOXL2的功能很广泛，除了维持细胞间的稳定性，还参与了肿瘤的形成及侵袭转移过程。肿瘤的发生发展是一个多因素、多机制的复杂过程，深入研究LOXL2在肿瘤之间的作用机制具有重要的临床意义。

产气肠杆菌组成型启动子的筛选及其活性测定

目的：从产气肠杆菌基因组中筛选组成型启动子，并检测其活性。方法用Sau3 AⅠ限制性内切酶将产气杆菌的基因组酶切到500 bp大小，连接到pCMR8 a载体上，转化DH5α感受态后涂布氯霉素和卡那抗生素的双抗平板上筛选启动子，经SDS－PAGE分析启动子的蛋白表达能力，筛选较强启动子并对其进行截短和顺反性实验，最后利用截短启动子表达不同的蛋白。结果成功筛选到了5个启动子序列，获得到了表达能力最强启动子的截短核心序列，验证了其具有反向启动外源蛋白表达的能力，成功表达了其他外源蛋白。结论本实验通过大肠埃希菌表达系统成功的筛选并验证了产气杆菌的一种组成型启动子，具有较强的启动外源蛋白表达能力，对工业上蛋白的生产及实验室表达某种蛋白具有重要意义。

人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定

目的构建人星状病毒非结构蛋白3（non．structureproteinla／3，nsPla／3）基因酵母双杂交诱饵重组质粒，电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla／3编码的基因序列，定向插入到穿梭表达载体pGBKT7改造后的pGBST7中，测序确定无误后将其电转化到Y2HGold酵母感受态细胞中，对细胞特性即nsPla／3一pGBST7诱饵质粒表达产物的毒性和报告基因自激活作用进行鉴定。结果测序结果表明诱饵重组质粒构建正确，阅读框无误。电转化酵母后，其表达产物对酵母细胞无毒性作用，对报告基因亦无激活作用。结论成功构建了用于酵母双杂交的酵母转化子，为研究nsPla／3蛋白与宿主细胞具体作用的靶蛋白和HAstV在细胞内的复制机制奠定了基础。

戊型肝炎病毒感染性克隆的构建及应用进展

感染性克隆技术是在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即在病毒的遗传物质水平研究其复制机制和致病机理,并拯救病毒。构建戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV）感染性克隆是对 HEV 实施反向遗传操作技术的前提和基础,文章综述了 HEV 感染性克隆的构建策略、方法及应用。

phoA为报告基因的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库的建立及初步鉴定

目的：构建以phoA为报告基因的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库。方法构建了以phoA为报告基因的“启动子陷阱载体” pPhoA，将甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA的随机酶切片段（500～1500 bp）连接到载体上，启动phoA表达产物与BCIP产生蓝色反应筛选启动子，经过PCR、测序、比对等分析文库质量。结果库容量达到30000个，覆盖基因组全长的2.6倍，同时验证了4个能够在加入BCIP的平板中表现出蓝色的菌落，发现了4个启动子插入片段。结论成功构建高质量的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库，为进一步研究甲型副伤寒沙门氏菌的基因表达与调控奠定了基础。

人星状病毒非结构蛋白nsP1a／1表达纯化及多克隆抗体的制备

目的：表达纯化人星状体病毒（ human astrovirus， HAstV）非结构蛋白nsP1a／1，免疫动物制备多克隆抗体。方法利用PCR技术扩增nsP1a／1基因序列，构建到大肠埃希菌原核表达系统中表达重组nsP1a／1蛋白，使用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）和二噻啉甲酸（BCA）实验对重组蛋白的纯度与浓度进行分析，以重组的nsP1a／1蛋白为抗原，免疫雄性SPF级SD 大鼠获得多抗血清，用 ELISA 测定抗体效价、 Western 印迹检测抗体特异性。结果nsP1a／1-pET28a原核表达载体构建成功，将其转化至大肠埃希菌BL21（DE3）细菌中诱导表达了重组蛋白，免疫大鼠获得的多抗血清几何平均效价达到1∶406374。结论本实验成功地运用原核表达系统表达并鉴定了人星状体病毒非结构蛋白nsP1a／1，为进一步研究人星状病毒的复制及病毒感染的临床诊断奠定基础。

锌指抗病毒蛋白ZAP对病毒的作用

锌指抗病毒蛋白（zinc finger antiviral protein，ZAP）是一种具有抗病毒活性的宿主细胞限制因子．ZAP能通过介导病毒mRNA的降解以及抑制翻译，从而抑制病毒的复制。ZAP能够抑制鼠白血病病毒、人类免疫缺陷病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、辛德比斯病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒的复制。本文主要就ZAP的抗病毒作用作一综述。

肿瘤耐药进程中调控DNA损伤修复机制的研究进展

生物体内部因素和外界环境都会产生DNA损伤，这种损伤会导致细胞周期阻滞，细胞凋亡，衰老或细胞发生恶性转化。因此，完整的DNA损伤修复机制对维持生物体遗传信息的正确性有着重要意义。但另一方面。很多肿瘤细胞能够通过增强其DNA修复的能力对抗DNA损伤诱导剂等抗肿瘤药物的杀伤，从而出现耐药的表型。因此，了解DNA损伤修复在肿瘤耐药进程中的作用及机制，将为临床合理运用化疗药物提供理论依据。