CpG ODN增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答

目的 探讨CpGODN对免疫力低下小鼠的体液免疫增强作用。方法 选用老年C57BL/ 6小鼠和免疫抑制模型小鼠 ,将重组HBsAg疫苗和CpGODN同时或单独肌注到小鼠体内 ,2周后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3周后摘除眼球取血 ,用ELISA方法检测抗HBsAgIgG抗体。 结果 免疫抑制模型中同时注射CpGODN和疫苗组产生的IgG抗体绝对量是单独注射疫苗组的 2倍 ;老年鼠组中 1 0 μg和2 0 μgCpGODN与疫苗同时注射组产生的IgG抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的 3倍和 4倍。

角膜内皮细胞高表达TGF-β_1的免疫学作用

目的探讨TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后表达产物的免疫学活性。方法分别用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法检测pSecTag2-TGF-β1MP质粒转染角膜内皮细胞48h后TGF-β1基因的表达,ELISA法检测TGF-β1浓度;MTT法检测其对ConA诱导的淋巴细胞转化反应的影响;用流式细胞仪法检测其对淋巴细胞凋亡以及淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD69+、CD71+亚群分化的影响。结果从mRNA转录和蛋白质水平均证实TGF-β1基因在角膜内皮细胞获得高效表达。瞬时转染48h角膜内皮细胞培养上清中TGF-β1的表达为(98±3)pg/ml,高于对照组。在其作用下淋巴细胞活化增生受抑制;出现明显的亚二倍体峰;CD25+、CD69+、CD71+阳性细胞比率下降。结论基因转染角膜内皮细胞高表达TGF-β1,可抑制淋巴细胞的活化增生,促使淋巴细胞凋亡。

羊膜及培养鸡角膜缘上皮对外周血T细胞CD 69分子的活化研究

目的 研究不同状态的羊膜、鸡角膜浅板层和培养鸡角膜缘上皮细胞,对人外周血T细胞的刺激.以及转化生长因子-β1(TGF-β1)对T细胞表面活化分子CD 69表达的影响。 方法 随机采取6例健康成人外周血,制备不同状态的羊膜、鸡角膜缘上皮细胞和鸡角膜浅板层并联合羊膜作刺激原,设立阴性对照组及阳性对照组刺激原.将10组刺激原分别与全血混合培养36 h,标记检测的抗体,用流式细胞仪分析。 结果 未见新鲜羊膜、去上皮新鲜羊膜及保存羊膜对外周血 T细胞及CD 8+T细胞表面分子CD 69产生活化表达;以羊膜为底物培养鸡角膜缘上皮细胞、鸡角膜浅板层未使人外周血 T细胞及CD 8+T细咆亚群表面分子CD 69产生活化表达;TGF-β1可明显下调人外周血T细胞及CD8+T细胞亚群表面分子CD69的活化表达。 结论 进一步支持羊膜免疫原性很低的观点;单用或联合羊膜应用培养鸡角膜缘上皮细胞和鸦角膜浅板层对人外周血T细胞及CD 8+T细胞亚群免疫刺激作用很弱;进一步支持TGF-β1有明显免疫抑制作用的观点。

以羊膜为底物培养鸡角膜缘上皮细胞的实验研究

目的 为眼表面重建术提供良好的移植材料。方法 用胰酶及EDTA消化法去除羊膜上皮将消化、离心获得的鸡角膜缘上皮细胞调成 1× 10 7/mlDMEM悬液 ,接种在 6孔培养板底的羊膜基底膜面 ,放入 3 7℃ ,5 %CO2 孵箱培养。结果 48h羊膜上培养细胞形成单层 ,较培养板上培养的同种细胞小 ,细胞表面的微绒毛及侧面足状突丰富 ,立体感明显。结论 以羊膜基底膜为底物培养的鸡角膜缘上皮细胞可以着床生长并形成完整的单层上皮 ,为眼表重建使用羊膜及基底膜面培养的角膜上皮细胞提供了实验材料。

Glycodelin在子宫内膜癌和子宫颈癌的表达

目的:探讨免疫抑制性糖蛋白(Glycodelin)在子宫内膜癌及子宫颈癌的表达。方法:采用免疫组织化学S-P法检测Glycodelin在30例子宫内膜癌及20例子宫颈癌组织中的表达,并评价其与临床病理分期和组织学分级的关系。结果:Glycodelin在子宫内膜癌、子宫颈鳞癌和子宫颈腺癌的表达率分别为73%(22/30)、53 33%(8/15)和60%(3/5),3组之间无统计学差异(P>0 05)。各临床病理分期的阳性率(子宫内膜癌:I期75%,II期75 00%,III期50%;子宫颈癌:Ia60%,Ib44 44%,IIa66 66%)无统计学差异(P>0 05)。各组织学分级的阳性率(子宫内膜癌:G170%,G277 78%和G366 67%;子宫颈癌:G159 14%,G250 00%和G360 00%)无统计学差异,P>0 05。结论:Glycodelin在子宫内膜腺癌和子宫颈癌均有表达,其表达与临床病理分期和组织学分级无明显关系。

妊娠相关糖蛋白Glycodelin抑制E型选择素介导的细胞黏附

目的探讨来源于孕妇羊水和血清的高纯度Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响程度。方法以色谱仪分离和纯化孕妇羊水和血清的Glycodelin,测定铬51标记的肝癌细胞系-HepG2细胞在不同来源、不同浓度Glycodelin作用下和重组E型选择素的黏附能力,从而评价Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响。结果血清和羊水Glycodelin能有效抑制Hepg2细胞和重组E型选择素之间的黏附,其抑制作用呈浓度依赖关系,其相对抑制力分别为纯四糖结构Sialyl-Lewisx(sLex)的9.4×105和4.0×105倍。结论妊娠相关糖蛋白Glycodelin高度抑制E型选择素介导的细胞黏附。

人次级淋巴组织趋化因子对宫颈癌Siha细胞侵袭能力的影响

目的研究人次级淋巴组织趋化因子(SLC)对Siha细胞侵袭能力的影响。方法从人脾脏cDNA扩增出SLC,构建真核表达载体,转染宫颈癌细胞株Siha。Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力,利用NF-κB特异性启动子荧光素酶报告系统检测肿瘤细胞内NF-κB的活化。结果经PCR、酶切、测序及ELISA证实,SLC真核表达载体构建表达成功。SLC转染Siha细胞,肿瘤侵袭能力增强约(2.34±0.14)倍,且肿瘤细胞内NF-κB的活化增强约(3.98±0.194)倍。结论 SLC作为趋化因子,其作用已不局限于趋化作用,还可诱导肿瘤细胞NF-κB的活化,促进肿瘤细胞侵袭,有着多重作用。

α-SMA在培养生长板软骨细胞中的表达

目的探讨α-SMA在原代培养生长板软骨细胞中的表达及传代培养对其表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),免疫细胞化学(ICC)和Western blot分别对1-5代RGC中α-SMA的表达进行定性和半定量分析。结果原代培养的RGC不表达α-SMA,随着传代次数的增加,α-SMA阳性染色的细胞比例从原代的0增加到第5代的24.2±4.3%(n=3),Western blot结果与ICC结果一致。结论本研究首次发现原代培养的RGC并不表达α-SMA,随着RGC传代次数的增加,表达α-SMA的细胞比例和表达量不断升高。

角膜内皮细胞稳定表达转化生长因子-β_1对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控

目的探讨转化生长因子-β1(tromsforming growth factor-β1,TGF-β1)基因转染角膜内皮细胞后表达产物对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控作用。方法利用脂质体介导法将TGF-β1基因转染入培养的兔角膜内皮细胞中,并用药物筛选抗性细胞克隆。用免疫组化法检测外源基因的稳定表达。ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β1表达量,用RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6mRNA的表达。结果免疫组化染色显示基因转染后筛选出的克隆细胞TGF-β1蛋白表达均为阳性,胞浆呈棕色着色。转染细胞培养上清中TGF-β1的表达量为(597±7)pg/ml,高于对照组。基因转染组淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-αmRNA的表达量明显低于正常对照组(P<0.05);IL-4、IL-6mRNA的表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。结论TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后高表达TGF-β1,致使淋巴细胞发生免疫偏离,作为组织工程角膜种子细胞移植后具有抑制角膜移植免疫排斥反应的潜在可能性。

胸腺切除术治疗重症肌无力21例临床分析

目的 :总结和分析胸腺切除术治疗重症无力 (MG)患者的疗效。方法 :回顾分析经临床和CT确诊有胸腺异常的MG病人 2 1例 ,其中伴胸腺增生者 11例 ,伴胸腺瘤者 10例。按Osserman临床分型I型 6例 ,IIA型 2例 ,IIB型 6例 ,III型 6例 ,IV型 1例。结果 :全组无手术死亡 ,术后发生肌无力危象者 3例 ,总有效率为 90 .5%。以I型效果最好 ,与其他各型的比较有显著性差异。女性发病率高于男性 ,女性疗效较男性好 ;30岁以上组和浸润型胸腺瘤及全身型患者术后易复发。结论 :胸腺切除术是治疗MG有效的免疫疗法之一。各型均应尽可能手术治疗。

治疗性肾癌疫苗的研究进展

肾细胞癌(renal cell cancer,RCC)是泌尿系统肿瘤中常见的恶性肿瘤,近几年发病率有增长的趋势。RCC对放、化疗及内分泌治疗均不敏感,传统的外科手术治疗也不能对中晚期患者取得良好疗效。由于肾癌是一种免疫原性很强的肿瘤,其免疫治疗倍受关注。伴随分子生物学、免疫学、基因工程技术的迅速发展,分子靶向治疗以及肾癌疫苗等生物免疫治疗显示出良好的应用前景。

DHF/DSS 患者凝血和纤溶系统变化的临床意义

目的检测 DHF/DSS 患者急性期凝血和纤溶系统的变化,探索患者血浆渗漏和出血的发病机制。方法收集正常健康者、DF 和 DHF/DSS 急性期患者的血浆各30份,应用 ELISA 法检测 t-PA、PAI-1、PC、TM、TF、TFPI 和 D-二聚体,发色底物法测 AT 等分子。结果血管内皮细胞的特异性表达产物 vWF 和TM 升高;TF升高,TFPI 没有变化;t-PA 显著增加,PAI-1下降,t-PA/PAI-1比值显著升高,PC、AT 和D-二聚体变化无统计学意义。结论 DHF/DSS 患者急性期血管内皮细胞活化或损伤的同时,凝血和纤溶系统均已活化;内皮细胞通过表达 TM、t-PA 和 PAI-1等相关分子在引起凝血和纤溶系统失调,造成血浆渗漏和出血等方面起重要作用。TM、t-PA 和 PAI-1等变化在 DHF/DSS 的发病机制中起重要作用,对 DHF/DSS 急性期有诊断价值,可作为辅助诊断指标。

真胰岛素与2型糖尿病缺血性心脏病相关关系

目的 探讨真胰岛素水平与 2型糖尿病合并缺血性心脏病的相关关系。方法 将 173例 2型糖尿病患者按是否并发缺血性心脏病 (IHD)分为 2型糖尿病缺血性心脏病组 (IHD)和 2型糖尿病不并缺血性心脏病组(NIHD) ,分析比较两组心血管疾病危险因素。同时采用微粒子化学发光免疫分析法测定空腹真胰岛素 (TI)。根据空腹真胰岛素的测定结果分成空腹高TI组、空腹正常TI组和空腹低TI组 ,比较 3组IHD发生率。采用Logistic回归分析 2型糖尿病合并缺血性心脏病的危险因素。结果 Logistic回归分析显示 ,2型糖尿病合并IHD的发生与性别、胆固醇、载脂蛋白 -a有显著的正相关关系 (P <0 0 5 ) ,尤与载脂蛋白 -a的关系显著 (OR =7 6 9,P <0 0 5 )。空腹TI不构成危险因素。结论 真胰岛素可能与

EGF、bFGF、TGF-β_1对培养鸡角膜缘上皮细胞增殖性的影响

目的 :探讨EGF、bFGF、TGF -β1,及EGF与TGF -β1共同作用对培养鸡角膜缘上皮细胞增殖性的影响。方法 :用DMEM和F12 (1∶1)培养基 ,3 %胎牛血清 ,加入不同浓度EGF、或bFGF、或TGF -β1、或EGF与TGF -β1,采用MTT法检测培养细胞的OD值。结果 :除 1ng/ml组外 ,其余从 5～ 160ng/ml的EGF各浓度组增殖效应均明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,10ng/ml组明显大于其它各浓度组 (P <0 0 2 ) ;bFGF各浓度组 ,除 1ng/ml组和 160ng/ml组外 ,其余从 5～ 80ng/ml各组均明显大于对照组 (P <0 0 2 5 ) ,2 0ng/ml组明显大于与其它各组 (P <0 0 2 5 ) ;TGF -β1各浓度组 ,除 0 1ng/ml组和 0 2ng/ml组外 ,其余从 0 4～12 8ng/ml各组抑制效应明显大于对照组 (P <0 0 2 5 ) ,6 4ng/ml和 12 8ng/ml两组比较未见显著性差异 (P =1 0 0 0 ) ,两组分别与其它各组比较均有显著性差异 (P <0 0 2 5 ) ;EGF加TGF -β1各浓度组 ,除 1ng/ml组和 160ng/ml组外 ,其余从 5～ 80ng/ml各组增殖效应均明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,10ng/ml组明显大于其它各组 (P <0 0 2 5 )。结论 :EGF、bFGF对培养鸡角膜缘上皮细胞有明显促增殖作用 ;TGF -β1则有明显的抑制作用 ;这些作用均呈剂量依赖性 ;EGF与TGF -β1共同表现为促增殖作用。