MTT法在抗真菌药敏实验中的应用

目的:研究MTT法在抗真菌药敏实验中的应用。方法:采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐方案测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC),终点判定分别采用NC CLS推荐的直接观察法和MTT法,对两法进行比较。结果:MTT法与常规直接观察法进行MIC终点判定所得结果具有很好的一致性。MTT法测得的A值与接种菌量具有正相关性。两性霉素B与伊曲康唑对丝状真菌和念珠菌都具有很好的抑制作用,MTT法测得的A值随药物浓度的增加而显著降低。结论:MTT法较之常规直接观察法结果更为客观、准确,且可量化,因而可以很好的替代肉眼观察法来判定真菌药敏试验的终点。

瑶药枸骨叶不同溶剂组分体外抑菌活性比较

采用微量稀释法测定瑶药枸骨叶5种不同溶剂组分的最小抑菌浓度(MIC),探讨枸骨叶不同溶剂提取物的体外抑菌活性.结果表明枸骨叶中的3种溶剂组分均显示一定的抑菌效果,其乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌效果最为显著,醇提物和正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌也显示较好的抑菌效果.

性病门诊人群泌尿生殖道沙眼衣原体混合感染及分型研究

目的了解性病门诊人群泌尿生殖道沙眼衣原体混合感染及基因型分布特点。方法对2048例性病门诊就诊者分别取尿道或宫颈拭子,实时聚合酶链反应(PCR)检测沙眼衣原体(CT)感染,阳性标本用套式PCR扩增ompl VD2区片断,反向线点杂交(RLB)检测特异性型别。结果CT总体感染率为15.9%(325/2048)。对287份阳性标本成功分型,型别分布为:F21.6%,E20.9%,J19.9%,D12.9%,G8.4%,K4.2%和H1.4%,31份(10.8%)为混合感染。结论在性病门诊人群中CT感染率较高,主要流行型别为F、E和J型,且具有较高的混合感染率。

玉米特异启动子驱动下结核Hsp65与Esat-6融合基因表达载体的构建及鉴定

利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-HLE联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。成功构建了pC1300GHLE质粒,酶切鉴定得到3.3 kb和8.6 kb 2条带,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。成功构建和转化了pC1300GHLE表达载体,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。

重组骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨复合物应用于拔牙窝修复的动物实验研究

目的 :探讨重组骨形成蛋白 - 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein ,rhBMP - 2 ) /珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )与珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :12只成年狗作为实验动物 ,拔除两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚骨作为对照。并于植骨后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察及计算机图像分析方法 ,观察比较两种植入材料在拔牙窝内的骨修复能力及修复效果。结果 :复合骨具有较强的骨修复作用 ,植入牙槽窝后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断形成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示复合骨组新生骨形成的比值明显高于珊瑚骨组 ,两组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5)。结论 :复合骨在拔牙窝中的骨修复能力和修复效果明显优于珊瑚骨。

幽门螺杆菌成分对食管癌细胞增殖的影响

目的观察幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)对人食管癌Eca-109细胞增殖的影响。方法以食管癌Eca-109细胞作为H.pylori感染的体外细胞模型,将不同浓度的幽门螺杆菌菌体提取物与Eca-109细胞共培养,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,半定量RT-PCR方法分析共培养不同时间点后Eca-109细胞增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达水平。结果幽门螺杆菌菌体提取物与Eca-109细胞共同孵育后对细胞增殖有促进作用;在与Eca-109细胞共培养1h后即可见PCNAmRNA表达升高,3h达高峰,约为对照组的3.0倍。结论Hpylori能诱导食管癌Eca-109细胞增殖,提示其与食管癌的发生可能存在关联。

重组人骨形成蛋白-2-珊瑚人工骨复合物在拔牙窝牙槽骨修复中的作用

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :拔除 12只成年狗两侧上颌第二及第三切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察、图像分析和 [99Tcm]-MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 :复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组(P <0 0 5 ) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,12周两组核素浓聚程度差异不明显。结论

海洋放线菌发酵物对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

目的研究一株南海海洋放线菌的发酵产物对肝癌细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法评定海洋放线菌的发酵产物对肝癌细胞HepG-2增殖抑制作用及对正常细胞Vero细胞的细胞毒性,经Hoechst33258(8g/L)染色进行形态学观察,应用流式细胞术检测细胞周期、凋亡和凋亡基因Fas的表达情况。结果发酵物对HepG-2细胞的生长抑制效果明显,荧光显微镜下观察发现培养细胞中出现核固缩、凋亡小体;发酵物在诱导HepG-2细胞凋亡同时,下调Bcl-2表达水平,且均呈剂量效应关系。结论发酵物通过阻滞肿瘤细胞的生长及通过抑制Bcl-2诱导细胞凋亡等机制,对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。

HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定

目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702,用免疫组化染色(SP)法检测HCVC蛋白的表达,并通过Westernblot进行鉴定。结果:所克隆的HCV-C基因片段的大小为573bp,序列正确。成功地构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒。以其转染HL-7702细胞后,用SP免疫组化染色法检测到了C蛋白的表达。Westernblot显示,其相对分子质量(Mr)约为21000。结论:构建的真核表达载体pcD-NA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV-C蛋白,为以后相应抗体的制备打下了基础。

CD23表达与B细胞增殖分化的研究进展

本文探讨了生理和病理情况下B细胞表面CD23的表达，分析了其表达与B淋巴细胞增殖分化的关系，总结了影响B细胞表达CD23的各种细胞因子的作用特点及其可能机制，同时归纳了（可溶性CD23sCD23）的生物学作用及其介导的信号传递途径的新研究进展。本文还探讨了EBV感染的B细胞表面CD23的表达与B细胞体外长期存活的分子生物学机制。

α2,6-唾液酸转移酶(ST6GalI)的表达对结肠癌细胞唾液酸化的影响

目的 研究结肠癌细胞LS174T转染正义和反义的α2 ,6唾液酸转移酶 (ST6GalI)cDNA对结肠癌细胞表面唾液酸化及肿瘤细胞粘附功能的影响 .方法 结肠癌细胞株LS174T转染正义ST6GalIcDNA或反义ST6GalIcDNA的部分序列的表达载体pcDNA3 .1,以RT -PCR检测转染子ST6GalImRNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6唾液酸含量 .结果 转染正义ST6GalIcDNA的克隆显示ST6GalImRNA的表达增强以及接骨木凝集素 (SNA)与细胞表面成分的结合增加 ;而转染反义ST6GalIcDNA的部分序列的细胞克隆的ST6GalImRNA的表达减少 ,SNA与细胞表面成分的结合力降低 .结论 ST6GalI的表达直接影响细胞表面α2 ,6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的粘附功能 .利用反义核酸技术抑制ST6GalI的表达并降低肿瘤细胞表面α2 。

抗原识别受体复合物结构及信号传导的新概念

淋巴细胞的抗原受体能够特异性地结合抗原 ,根据所结合的抗原的性质和数量 ,采用不同的信号传导模式来调控淋巴细胞的发育和生存。另外 ,这些受体还要根据抗原的数量和亲和力来设置淋巴细胞活化的精细阈值。最近科学家们根据一些前期研究 ,又设想了一种新的B细胞和T细胞的抗原受体结构 ,指出它们是预先形成寡聚体的结构 ,并且利用在这种结构中信号处理和放大的方式来解释淋巴细胞受体不同的信号输出。

细胞表面唾液酸及其连接方式对乳腺癌细胞黏附的影响

目的研究肿瘤细胞总唾液酸及α2,6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2,6唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA,以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2,6唾液酸细胞克隆,检测各转染细胞的同源凝集作用,并比较唾液酸酶处理前后肿瘤细胞对胶原IV黏附力的变化。结果顺义转染克隆细胞-细胞之间的同源黏附能力下降,与胶原IV的黏附增强;反义转染克隆细胞-细胞之间同源黏附能力增强,而与胶原IV的黏附降低。唾液酸酶处理后肿瘤细胞与胶原IV的黏附力下降至未处理前的31%￣57%。结论乳腺癌MDA-MB435细胞表面唾液酸及α-2,6唾液酸化对肿瘤细胞的黏附有重要影响。

反义寡核苷酸对Daudi细胞α2,6唾液酸的下调作用研究

目的 研究反义寡核苷酸对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞α2 ,6 唾液酸转移酶 (ST6GalI)的活性和细胞表面α2 ,6 唾液酸水平的下调作用。方法 以修饰后的ST6GalI的反义寡核苷酸处理Daudi细胞 ,以RT PCR检测Daudi细胞ST6GalImRNA的表达 ,荧光定量法测定ST6GalI的活性及以流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6 唾液酸的含量。结果 和对照组比较 ,以反义寡核苷酸处理的Daudi细胞ST6GalImRNA的表达下调 ,ST6GalI酶活性下降 ,并导致细胞表面α2 ,6 唾液酸水平降低。结论 反义寡核苷酸可有效降低Daudi细胞表面α2 ,6 唾液酸化水平 ,内源性减少α2 ,6 唾液酸对Daudi细胞CD2

碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠硬腭穿孔的愈合

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对硬腭穿孔愈合的影响。方法：在大鼠硬腭部制作 早期硬腭穿孔动物模型，外用ｂＦＧＦ治疗硬腭穿孔。采用肉眼观察、病理学检查的方法进行评价。结果：肉眼观 察发现ｂＦＧＦ组伤口愈合率明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；病理学检查表明ｂＦＧＦ能刺激肉芽组织的增长，成纤维 细胞分裂增殖；ｂＦＧＦ组成纤维细胞的核仁形成区嗜银蛋白颗粒数目为３．７３±０．５２，对照组为２．１１±０．３１（Ｐ＜ ０．０５）。结论：ｂＦＧＦ有助于肉芽组织的生长，具有显著促进硬腭穿孔创伤愈合的作用，有助手硬腭穿孔的修复。

^(99m)Tc-MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨修复牙槽骨缺损

目的 探讨应用99mTc -MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨在牙槽骨缺损修复中成活和成骨效果的价值。方法 拔除 1 2只成年狗两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4 ,8,1 2周取材 ,采用组织学观察、图像分析和99mTc -MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,1 2周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组 (P <0 0 5) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,1 2周两组核素浓聚程度差异不明显。结论 99mTc -MDP放射性骨显像能早期判断移植骨的成活情况及成骨效果。

妊娠相关糖蛋白对E型选择素介导的内皮细胞黏附作用研究

目的:本实验旨在探讨高度纯化的羊水和孕妇血清人绒毛膜促性腺激素(human chrionic gonadotropin,hCG)和glycodelin对E型选择素介导的HepG2细胞与内皮细胞黏附过程的影响。方法:以色谱仪分离和纯化羊水和血清的hCG和glycodelin,进一步测定[51Cr]标记的肝癌细胞系-HepG2细胞在不同来源、不同浓度hCG和glycodelin作用下和经过白细胞介素-1β(IL-1β)刺激后表达E型选择素的内皮细胞的黏附能力,从而评价这两种糖蛋白对E型选择素介导的内皮细胞黏附过程的影响。结果:羊水和血清hCGs能有效抑制E型选择素介导的内皮细胞黏附,其抑制作用呈浓度依赖关系,IC50分别为1·5×10-7mol/L和2·1×10-7mol/L,相对抑制力分别为纯四糖结构sialyl-Lewisx(sLex)的1·5×104和1·1×104倍;羊水和血清glycodelin同样有此作用,其IC50分别为3·2×10-6mol/L和6·3×10-6mol/L,相对抑制力分别为sLex的7·2×102和3·7×102倍;纯四糖结构sialyl-Lewisx(sLex)的IC50为2·3×10-3mol/L。结论:妊娠相关糖蛋白hCG和glycodelin是E型选择素介导的内皮细胞黏附的有效抑制物。

登革病毒受体的研究进展

登革病毒(dengue virus,DEN virus)受体研究一直是登革病毒研究的热点之一,已提出的可能受体有蛋白质类、Fc受体类、乙酰硫酸肝素、与CD14相关的细胞表面结构(CD14-associated cell surface structure)等。近来,有关登革病毒在多种易感细胞上特异性受体成分的研究取得重大进展,已从多种登革病毒易感细胞株中分离出多个与登革病毒表面蛋白区域结合的受体组分:如热休克蛋白(heat-shock protein,HSP)、GRP78(Bip)、LAMR1、DC-SIGN等。本文就登革病毒相关细胞受体的最新研究进展作一综述。