肠道厌氧菌失调加重流感病毒感染小鼠肺部免疫病理损伤

目的探讨肠道厌氧菌失调与流感病毒感染之间的关系,以及对小鼠肺部免疫细胞中炎性因子的影响。方法将36只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组、甲硝唑组,每组12只。甲硝唑组小鼠用18 mg/m L甲硝唑灌胃8 d,造成小鼠肠道厌氧菌菌群失调;再予每只小鼠50μL/d FM1株流感病毒连续滴鼻4 d,建立厌氧菌失调小鼠感染流感病毒的动物模型。观察各组小鼠精神状态、肺指数、肺组织病理形态变化、盲肠及肠黏膜病理形态变化,ELISA测定小鼠肺组织匀浆中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10和IL-17含量的变化。结果甲硝唑能使该组小鼠肺指数明显升高,其肺组织及盲肠组织病理改变较病毒对照组小鼠而言,表现出更为严重的炎症损伤。FM1甲型流感病毒感染后,甲硝唑组小鼠肺组织匀浆中IFN-γ、IL-17水平与病毒对照组相比显著降低,IL-4、IL-10含量虽有升高,但差异无统计学意义。结论肠道厌氧菌失调可能通过调节小鼠肺部炎性因子的分泌,抑制其适应性免疫应答,影响FM1流感病毒在体内复制及清除的时间,从而进一步加重流感病毒引起的免疫病理损伤。

BCR-ABL-SEA DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答

目的:了解BCR-ABL-SEA双表达DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性细胞和体液免疫应答效应。方法:用已成功构建的重组双表达BCR-ABL多肽和SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES-SEA(B-P-S)免疫小鼠,间隔14 d共3次。相同方法用单表达BCR-ABL多肽或SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES和SEA-pIRES免疫小鼠作对照。利用CCK-8比色法检测小鼠脾脏T细胞对K562细胞株的杀伤活性;流式细胞术测定小鼠脾脏CD4+与CD8+T细胞表达情况;ELISA法检测小鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)生成情况;间接免疫荧光法检测血清中抗BCR-ABL抗体。结果:免疫后第7周时,双表达重组质粒B-P-S组小鼠脾脏CTL细胞针对K562杀伤率、血清中INF-γ含量均明显高于单表达BCR-ABL-pIRES组和SEA-pIRES组(P<0.05);CD4+/CD8+T细胞比值、血清中IL-4含量各组之间无明显差异(P>0.05);荧光显微镜检测到血清中有抗BCR-ABL抗体。结论:所构建的BCR-ABL-SEA重组双表达质粒可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答效应。

自噬在结核分枝杆菌感染免疫应答作用的研究进展

结核分枝杆菌(MTB)是结核病致病病原体,长期协同进化使得MTB制定出专门针对人类宿主免疫系统的逃逸机制。自噬作为细胞内环境稳定机制,广泛地参与宿主对抗MTB的固有免疫及适应性免疫效应等。本综述主要总结了自噬-免疫网络相交的细节过程:传递固有免疫受体信号、协同细胞因子发挥作用、调节免疫相关GTP酶,增强抗原提呈及参与T细胞的稳态调控等交叉信号通路。关于自噬-抗MTB多条免疫通路分子水平的深入研究,将为以自噬为基础的新型治疗带来新的策略。

桑叶提取物的抗病毒活性检测

桑叶作为中药或功能饮品的重要成分在民间和临床上广泛应用。用70%乙醇对广东桑、白桑、鸡桑、鲁桑等桑种共20个品种的桑叶进行浸提,并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到不同萃取组分及剩余水相组分。利用细胞病变减少法(CPE法)检测发现多个桑叶样品的萃取组分或水相组分含有抗病毒活性物质,且抗病毒活性具有选择性。其中,能有效抑制单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的样品最多,6个桑品种桑叶的乙酸乙酯萃取组分对HSV-1的半数抑制浓度(IC50)≤12.5μg/mL;广东桑品种桑叶的水相组分和石油醚萃取组分具有较高的抗甲型流感病毒(Flu A)活性;部分桑品种桑叶的萃取组分对登革病毒2型(DV2)也有一定的抑制活性;20个桑品种桑叶的4种萃取组分对柯萨奇B3病毒(CVB3)均无抑制活性。上述结果表明桑叶含有丰富、较为广谱的抗病毒活性成分,但不同桑品种间的桑叶化学成分及抗病毒活性有一定差异。

小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺中RLH信号通路的影响

【目的】研究小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒作用的机制。【方法】以50μL流感病毒FM1株LD50滴鼻感染RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠,建立小鼠流感模型,分别用小檗碱和奥司他韦治疗。观察小鼠的生存率以及肺组织炎症损伤状况;RT-q PCR和Western-blot检测正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。【结果】正常野生型C57BL/6小鼠小檗碱组的生存率为80%,与病毒组50%相比明显提高,其肺组织病变局限,炎症明显减轻。通过RT-q PCR和Western-blot检测到小檗碱可下调正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。与病毒组相比,RIG-I、NF-κB和MAVS的m RNA表达量分别降低42.28%、33.12%和48.12%,同时,它们的蛋白表达量分别降低17.37%、13.83%和28.91%。【结论】小檗碱对于FM1株引起的小鼠流感具有较好的治疗作用,可通过影响RLH信号传导通路的活化来发挥抗流感病毒作用。

伊马替尼抑制Jurkat T细胞增殖与影响A20和NF-κB表达相关

目的研究伊马替尼(IM)对T细胞Fyn、A20和NF-κB转录的影响及意义。方法 50 nmol/L浓度IM作用Jurkat细胞24 h后,以K562细胞为对照,应用实时荧光定量PCR技术检测Fyn、A20和NF-κB基因表达水平变化;Western blot技术检测A20和NF-κB蛋白水平变化。结果 IM明显上调Jurkat细胞A20基因表达水平,明显下调NF-κB基因表达水平,而Fyn基因表达水平没有明显变化。K562细胞受到IM处理后,A20和NF-κB的表达水平改变与Jurkat细胞相似,但Fyn基因水平明显下调。Fyn基因表达下调与IM下调BCR/ABL融合基因表达有显著的相关性。A20和NF-κB蛋白水平变化与mRNA变化一致。结论 IM不仅通过抑制BCR/ABL融合基因表达下调Fyn转录水平,而且也可通过上调A20和下调NF-κB表达抑制T细胞增殖作用。

联合监测血清CA-125、β-hCG和孕酮对先兆流产结局的预测价值

目的探讨联合监测血清糖类抗原-125(carbohydrate antigen 125,CA-125)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionicgonadotrophin,β-hCG)和孕酮(progesterone,P)对先兆流产结局的临床预测价值。方法选择2011年3月至2012年12月期间在我院产科就医的156例孕早期先兆流产孕妇作为观察对象,按妊娠结局分为继续妊娠组(104例)和难免流产组(52例);另选择88例正常妊娠的孕妇作为对照组。采用化学发光法监测其血清CA-125、β-hCG和P水平,并对结果进行统计学分析。结果两组先兆流产的孕妇血清CA125水平均高于对照组,先兆流产难免流产组孕妇血清CA125水平明显高于继续妊娠组;两组先兆流产的孕妇血清β-hCG和P水平均低于对照组,先兆流产难免流产组孕妇血清β-hCG和P水平均明显低于继续妊娠组。对照组和先兆流产继续妊娠组孕妇间隔48 h血清β-hCG和P水平均呈现上升趋势,且97.7%的对照组、92.3%的继续妊娠组孕妇间隔48 h血清β-hCG水平增幅>60%;而先兆流产难免流产组孕妇间隔48 h血清β-hCG水平仅有21.2%呈现上升趋势,间隔48 h血清P水平均呈下降趋势;78.8%的难免流产组孕妇血清β-hCG和P水平同时下降。结论联合检测孕妇血清CA-125、β-hCG和P水平并动态监测其间隔48 h血清β-hCG和P水平变化趋势,对早期先兆流产的结局预测具有重要价值。

伊马替尼诱导原代T细胞凋亡作用机制研究

目的:研究伊马替尼(IM)诱导正常人原代CD3^+T细胞凋亡的分子机制。方法:0~100 nmol/L的IM作用原代T细胞24 h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况;应用实时荧光定量PCR技术检测Caspase-3、Caspase-8、A20和NF-κB基因表达变化;应用Western blot技术检测A20和NF-κB蛋白表达变化。结果:IM具有明显促T细胞凋亡能力,其凋亡分子Caspase-3和A20基因表达水平均上调,而NF-κB的基因和蛋白水平均下调。结论:IM通过上调A20的表达诱导了T细胞的凋亡。

妊高征患者血清C-反应蛋白及肝肾功能变化的临床观察

目的 探讨妊娠高血压综合征（妊高征,PIH）患者血清C-反应蛋白和肝、肾功能的变化规律及其临床意义.方法 选择96例PIH患者（PIH轻度组50例、PIH重度组46例）和50例孕晚期的正常孕妇（对照组）作为观察对象,采用全自动生化分析仪检测所有孕妇的血清C-反应蛋白（CRP）、白蛋白（Alb）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素（Urea）、尿酸（UA）、肌酐（Cr）,并对结果进行统计学分析.结果 PIH患者血清CRP水平明显高于对照组孕妇（P＜0.01）,且PIH重度组患者明显高于轻度组（P＜0.01）.两组PIH患者血清Alb含量均较对照组孕妇明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）,且PIH重度组患者明显低于轻度组（P＜0.05）；PIH患者血清ALT、AST、GGT、ALP和Urea、UA、Cr水平均较对照组孕妇显著升高,差异具有统计学意义（P均＜ 0.05）；PIH重度组患者血清UA和Cr水平明显高于轻度组（P＜0.05）,两组PIH患者之间血清ALT、AST、GGT、ALP和Urea水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PIH患者的血清CRP水平升高,与病情的严重程度相关；PIH患者肝、肾功能均受损；血清UA水平随病情加重升幅明显,可作为PIH病情监测的较好指标.

PMA特异性抑制K562细胞BCR/ABL和Fyn mRNA的表达

目的:研究12-肉豆蔻酸-13-乙酸佛波酯(PMA)对K562细胞BCR/ABL与Fyn mRNA表达的影响及两者之间的关系。方法:1～250μg/L PMA刺激K562细胞24 h后,应用实时荧光定量PCR技术检测各组BCR/ABL和Fyn mRNA的水平。结果:PMA明显抑制BCR/ABL和Fyn mRNA的水平,该下调作用均具有显著的量效关系,且BCR/ABL和Fyn的mRNA表达水平下调表现出明显的相关性。比较刺激Molt-4细胞株的结果,PMA抑制作用具有细胞选择性。K562细胞株经诱导后出现伪足样的形态改变。结论:PMA通过抑制BCR/ABL融合基因的转录下调Fyn转录水平。

中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的:探讨中波紫外线(UVB)对HaCaT细胞损伤的影响。方法:取对数生长期的HaCaT细胞,用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果:在30～60mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,细胞的增值活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论:UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

结核分枝杆菌Rv3803c、Rv3846基因的克隆、表达、纯化与鉴定

目的克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv3846基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv3803c和Rv3846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表达载体中,测序正确后,在E.coli Rosetta中诱导表达,GST标签亲和层析法纯化蛋白,考马斯亮蓝染色及Western-blot分析鉴定。结果重组质粒pGEX-Rv3803c、pGEX-Rv3846测序表明核苷酸序列与设计完全一致。其在E.coli Rosetta中的存在形式均为可溶部分约50%、包涵体约50%,相对分子质量约为56 000和45 000,纯化的GST-Rv3803c、GST-Rv3846样品纯度90%以上。完整的GST-Rv3803c的浓度大约为0.1mg/ml,完整的GST-Rv3846的浓度大约为0.5mg/ml。即相当于每升E.coli Rosetta培养物中,GST-Rv3803c产量为:0.25mg/L、GST-Rv3846产量为1.25mg/L。结论成功获得了纯化蛋白Rv3803c(MPT51)和Rv3846(SodA),为进一步研究MPT-51和SodA蛋白的辅助诊断价值、构建保护性疫苗提供了实验依据。

方波溶出伏安法快速测定贝类中的痕量铅

采用方波溶出伏安法(SWASV)对贝类样品中的铅离子进行检测.检测方法的最佳参数:方波频率25Hz,方波振幅25 mV,扫描速度4 mV,沉积电位-1.1 V,沉积时间120 s.在0.2 mol/L的醋酸盐缓冲底液(pH=5.0)介质中,铅离子在电位-0.561 V附近产生灵敏的方波伏安溶出峰.通过优化方波伏安检测条件,铅离子浓度在1×10-8~2×10-6mol/L的溶出峰与铅离子物质的浓度呈现良好的线性(r=0.997 7),其检出质量浓度达到0.267μg/L.该方法具操作简便、设备低廉、线性范围宽,准确性和重复性好等优点.可在实际中用于贝类等海产品灵敏、方便、快速的检测.

超抗原葡萄球菌肠毒素A拮抗伊马替尼抑制T细胞活化作用的研究

目的:探讨葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)对甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate,IM)抑制T淋巴细胞活化的影响。方法:2 mg/L SEA和50 nmol/L IM联合作用于Jurkat细胞24 h后,用实时荧光定量PCR技术检测CD3ε和ζ链mRNA表达水平变化;Western blotting技术检测CD3ε和ζ链蛋白水平变化。结果:单纯IM组CD3ε和ζ链mRNA及蛋白表达均表现下调;SEA与IM联合用药组可以逆转IM下调CD3ε和ζ链mRNA及蛋白表达水平作用。SEA拮抗IM抑制作用中,对CD3ε链mRNA表达上调的作用明显大于CD3ζ链。结论:SEA能拮抗IM对T细胞CD3ε和ζ链表达的抑制作用。

呼吸道菌群失调加重小鼠过敏性呼吸道炎症反应

【目的】探讨呼吸道菌群失调对小鼠过敏性呼吸道疾病发病的影响。【方法】C57BL/6雌性小鼠给予万古霉素雾化吸入10 d后处死,应用16S rRNA高通量测序技术分析支气管肺泡灌洗液(BALF)菌群组成,探索建立小鼠呼吸道菌群失调模型的方法。建模成功后,应用相同的方法建立小鼠呼吸道菌群失调模型,在此基础上,通过腹腔注射致敏及雾化吸入卵清蛋白(OVA)激发,诱导小鼠过敏性呼吸道炎症反应,计数擦鼻频率,检测BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比,肺组织病理分析炎症反应及杯状细胞增生情况,ELISA法检测血清中IgE水平,BALF中IFN-γ、IL-4、IL-5水平,血清、BALF及肠组织中IL-33水平,从而分析呼吸道菌群失调对过敏性呼吸道炎症反应的影响。【结果】万古霉素雾化吸入使小鼠呼吸道Bradyrhizobium、Sphingopyxis、Cupriavidus、Pelomonas等菌属增加,而Akkermansia及Prevotella_6等菌属显著降低,发生明显的菌群失调。利用此动物模型进一步研究发现,呼吸道菌群失调加重了卵清蛋白诱导的过敏性呼吸道炎症反应,表现为擦鼻频率增加,BALF中细胞渗出增加、嗜酸性粒细胞百分比增高,肺组织炎症及杯状细胞增生加重,血清中IgE水平增加。另外,与卵清蛋白组相比,菌群失调联合卵清蛋白组小鼠BALF中Th1型细胞因子IFN-γ水平降低,Th2型细胞因子IL-4、IL-5水平升高,发生更为严重的Th1/Th2平衡失调;BALF中IL-33水平增加,而血清及肠组织中IL-33水平差异无统计学意义,表明呼吸道菌群失调仅影响局部IL-33的产生。【结论】应用万古霉素雾化吸入成功建立了小鼠呼吸道菌群失调模型。呼吸道菌群失调可能通过增加局部IL-33产生,激活Th2及固有样淋巴细胞(ILC),诱发Th1/Th2平衡失调,从而促进过敏性呼吸道疾病发病。

20个品种桑叶不同提取部位体外抗呼吸道合胞病毒活性初探

目的:对5个桑种中20个品种桑叶的80个提取部位进行体外抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytialvirus,RSV)活性的筛选。方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,观察样品对HEp-2细胞的毒性和样品抑制RSV的致病变作用。结果:20个品种桑叶的水部位的细胞毒性均较低,而所有石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位样品对HEp-2细胞有不同程度的毒性;其中17个桑品种的26个提取部位具有抑制RSV Long株和/或RSV A2株的作用,其半数抑制浓度(IC50)≤20μg/mL,选择性指数(SI)≥2.5;初步的作用机制研究表明,抗青10和粤椹大10品种桑叶的正丁醇部位均在治疗给药方式下有抗RSV的活性,而直接灭活和预防给药方式下均无抗RSV活性。结论:桑叶中含有抗呼吸道合胞病毒活性成分,但不同来源桑叶因其化学物质基础有差别,其提取物表现出的抗病毒活性有一定的差异。

大蒜多糖及其硒化产物抗氧化活性的比较研究

目的比较大蒜多糖与硒化大蒜多糖对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的大鼠嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的活力;化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内和细胞培养液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果硒化大蒜多糖、大蒜多糖500μg/ml及以上剂量组和亚硒酸钠12.50μg/ml及以上剂量组均能有效抑制由H2O2引起的细胞存活率的下降(P<0.01)。硒化大蒜多糖、大蒜多糖2000μg/ml可显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,以及提高SOD活性(P<0.01),表现出良好的抗氧化活性,而硒化大蒜多糖的抗氧化作用更为明显(P<0.05)。结论硒化大蒜多糖对经H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,这种保护作用明显优于大蒜多糖或单纯硒,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。

BCR-ABL与Src家族激酶相互作用介导CML对抗癌药物伊马替尼耐受的研究进展

BCR/ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(CML)的分子标志,具有高激酶活性,其在疾病发生、发展中扮演了极其重要的角色。伊马替尼(Imatinib)靶向抑制BCR-ABL,为CML慢性期的一线治疗药。BCR/ABL与Src家族激酶(Src-family kinases,SFK)之间也存在相互活化作用,通过激活众多信号通路,导致CML向急变期发展,并导致伊马替尼耐药。对有关BCR/ABL与SFK两者的相互作用机制及其生物学效应的研究进行总结。

BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在BALB/c小鼠肌肉表达分析

检测BCR-ABL-pIRES-SEA重组基因疫苗在小鼠肌肉中的表达。用已构建BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒免疫BALB/c小鼠一侧后肢骨骼肌,每两周一次,每次注射200μg,第七周取材用RT-PCR及免疫组织化学染色法检测目的基因在注射部位肌肉中转录和表达。结果发现:实验小鼠骨骼肌内检测到BCR-ABL和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的转录,以及BCR-ABL蛋白的表达,证明所构建的BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在小鼠体内可以有效地表达基因产物。