免疫介导小鼠再障模型方法的改进

目的 :探讨建立免疫介导小鼠再障模型中的最适照射剂量。方法 :采用不同剂量的 [60 Co γ]射线对BALB/c小鼠进行全身照射 ,并输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞 ,于照射并输入细胞后第 14d处死实验小鼠观察股骨骨髓增生程度及病理改变 ,以确定诱导再障发生的情况。结果 :6 0Gy、5 5Gy和 5 0Gy各照射剂量再障诱导组的再障发生率分别为 85 7%、84 6 %和 2 2 2 %。各实验组小鼠第 14d存活率分别为 5 7 1%、10 0 %和10 0 %。结论 :本实验条件下 ,5 5Gy的照射剂量对建立免疫介导小鼠再障模型较为合适。

癫痫患者免疫状态的探讨

本文观察了７０例癫痫（ＥＰ）患者的免疫状态，首次检测了Ｂ淋巴细胞亚群，ｓＩＬ－２Ｒ及ＴＮＦ，对各项免疫学指标进行了对比研究，发现ＩｇＡ，ＩｇＭ含量明显降低，ＣＩＣ含量明显增高（Ｐ＜０．０１），Ｃ＿３明显降低（Ｐ＜０．０５），显示患者体液免疫功能低下；淋巴细胞亚群测定发现ＣＤ＿３￣＋，ＣＤ＿４￣＋明显降低，ＣＤ＿８￣＋明显增高，ＣＤ＿４￣＋／ＣＤ＿８￣＋比值明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），表明细胞免疫功能低下，在Ｂ细胞亚群检测中发现ＣＤ＿（１０）￣＋，ＤＲ￣＋明显增高，ＣＤ＿（２０）￣＋明显降低（Ｐ＜０．０１），提示体液免疫功能低下与成熟Ｂ细胞免疫功能低下密切相关；同时血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平明显增高（Ｐ＜０．０１）进一步表明ＥＰ患者的免疫功能受到抑制；ＴＮＦ水平与对照组相比差异无显著性（Ｐ＞０．０５），本资料表明，ＥＰ患者的免疫功能低下与不同发作类型，病史长短及服用抗癫痫药物与否无明显的相关（Ｐ＞０．０５），提示ＥＰ患者免疫功能的低下可能存在某些内在因素，而不是受临床表现和抗ＥＰ药物的影响，提示ＥＰ患者免疫调节网络处于失衡状态。

超抗原及其增强疫苗免疫效应的意义

超抗原(superantigen,SAg)是一类具有多种免疫活性的特殊抗原分子,主要是一些细菌毒素和逆转录病毒基因产物。超抗原不受MHC限制,选择性地识别T细胞的抗原受体TCRVβ链,对CD4^+T细胞和CD8^+T细胞都具有强大的活化作用。超抗原概念一经提出,其在治疗恶性肿瘤上的潜力便受到重视。本文综述超抗原生物学特性,与T细胞受体的关系以及超抗原在增强疫苗刺激免疫应答中所取得的进展。

解脲脲原体与不孕、早孕、生殖道炎症关系的探讨

解脲脲原体与不孕、早孕、生殖道炎症关系的探讨刘小澄林晨黄环珍袁桂秀罗伟中解脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，Ｕｕ）是正常人生殖道可以分离出的一种支原体。目前对Ｕｕ与原因不明的不孕症、流产、死胎、新生儿肺炎、女性生殖道炎症等疾病的关...

原因不明不孕症妇女月经周期与解脲脲原体感染关系的探讨

本文检查了７４例不明原因的不孕症妇女生殖道解脲脲原体感染的情况，其中３９例阳性（５２．７０％），正常组５１例１４例阳性（２７．４５％），两组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。同时观察到解脲脲原体检出率的高低与月经周期有关，排卵前７天至排卵后８天不孕症组的阳性率为６３％（３２／４７），明显高于卵泡早期２３％（３／１３）（Ｐ＜０．０１）和黄体晚期２８．５７％（４／１４）（Ｐ＜０．０１），正常组的阳性率为５５．５５％（１０／１８），明显高于卵泡早期７．６９％（１／１３）（Ｐ＜０．０５）和黄体晚期１５％（３／２０）（Ｐ＜０．０５）。提示女性生殖道的解脲脲原体感染与月经周期和性激素水平的变化有关，排卵前后几天解脲脲原体感染率的增高与导致不孕有一定的关系。

瑶药黄酮化合物体外抗肿瘤活性研究

目的:研究瑶族药用植物中黄酮化合物的体外抗肿瘤活性,并初步分析它们的构效关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)吸收减少实验,测定6个黄酮化合物对2种正常细胞的毒性和对7种肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果:6种化合物中,圣草苷、柚皮苷、槲皮素和槲皮苷对2种正常细胞非洲绿猴肾细胞Vero和人黑色素细胞MC基本不显示出毒性,柚皮素对这2种细胞的毒性都较大,而圣草酚对Vero细胞毒性很小,对MC细胞的毒性非常大。柚皮素有较广谱的抗肿瘤活性,它对7个受试肿瘤细胞都显示出较强的增殖抑制,尤其对乳腺癌细胞MCF-7的半数抑制浓度达到了50μg/m l。在7种肿瘤细胞中,MCF-7和肝癌细胞HepG2对受试黄酮化合物最为敏感,两者都被圣草酚、柚皮素和槲皮素以较低浓度有效地抑制。这些化合物对肿瘤细胞的抑制作用都显示出浓度依赖性。结论:圣草酚、柚皮素和槲皮素对肿瘤细胞的生长有较好的抑制作用,而它们的葡萄糖苷的细胞毒性较小。

结核菌及其耐药性不同检测方法的临床应用评价

目的对目前临床上用于检测结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的传统及分子生物学方法进行系统评价,为设计合理的诊断路径提供指导意义。方法对标准菌株(H37Rv)、敏感、单耐及耐多药MTB进行梯度浓度稀释后,作为评估的实验样本,从检测结果的准确性、检测周期、最低检出限方面对不同方法进行评价。结果MTB检测方面,XpertMTB/RIF检测MTB的检出下限(3×10~2cfu)与培养法相当,比基因芯片和GenoType~ MTBDRplus的检出下限低;耐药性检测方面,在MTB含量不足(≤3×10~2cfu)的情况下XpertMTB/RIF对利福平(RFP)的检测存在假阳性结果,GenoType~ MTBDRplus检测3×10~4cfu链霉素耐药MTB时出现RFP和异烟肼(INH)耐药的假阳性结果;检测周期方面,XpertMTB/RIF在2 h内可完成报告,基因芯片和GenoType~ MTBDRplus在当天8 h内可完成报告,培养及比例法药敏需4~8周可报告结果。结论目前不同的MTB及耐药检测方法各有优缺点,在临床应用方面应综合考虑患者的病情、经济状况等选取合理的诊断路径。

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。

玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。

湖南汉族人群HLA-DR位点等位基因多态性与鼻咽癌的相关性研究

目的探讨湖南汉族人群HLA-DR位点等位基因多态性与鼻咽癌遗传易感性之间的关系。方法应用PCR/SSO基因分型技术对93例湖南汉族鼻咽癌患者和93例健康对照作HLA-DRB1、-DRB3、-DRB4、-DRB5基因分型,采用χ2检验比较两组各位点等位基因频率、单倍型频率分布的差异。结果NPC组DRB11101明显低于对照组,DRB10801明显高于对照组,但P值经Bonferroni校正后,差异均无显著(Pc>0.05)。结论湖南汉族人群HLA-DR位点与鼻咽癌无明显相关。

热灭活和紫外线照射灭活结核分枝杆菌的实验效果分析

我国卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中结核分枝杆菌被列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅲ级）,属高致病性病原微生物[1]。实验室研究课题中,大部分涉及到结核分枝杆菌的操作,实验室生物安全是首先要解决的问题。至今,已有一些关于实验室工作人员患结核病的报道,其中呼吸道吸入感染是实验室感染的最主要类型[2]。

癫痫患者血清可溶性白细胞介素2受体的检测

癫痫患者血清可溶性白细胞介素２受体的检测李君武，韦静，赖祥青，李鸿智我们首次观察了刀例癫痫（ＥＰ）患者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ—ＺＲ）水平，现报告如下。检测对象７０例ＥＰ，患者均为我院门诊和住院病人．根据临床症状，脑电图及其它有关辅助检查确...

HCVcore真核表达质粒pcDNA3.1(-)/core的构建

目的构建HCVcore基因真核表达质粒,为进一步研究和解析HCV诱发人不死化肝细胞癌化的机制,HCV感染的检测及疫苗和药物研发做好前期基础。方法将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1 -3011质粒于大肠杆菌JM109内扩增;提取pBRTM/HCV1-3011质粒;从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCVcore片段并将其插入pGEM-T克隆载体;再与表达载体pcDNA3. 1( -)重组,以得到重组的真核表达载体pcDNA3. 1 ( -) /core;最后限制性酶切鉴定HCVcore表达载体。结果从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCVcore片段大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3. 1 /core内。结论 成功的构建了HCVcore基因的真核表达载体pcDNA3. 1( -) /core。

HIV诱导T细胞凋亡机制研究进展

人类免疫缺陷病毒(HIV)在逃避免疫系统时涉及许多机制,其中一种是激活凋亡程序破坏免疫效应器。不仅HIV基因组编码前凋亡蛋白通过TNF家族或线粒体路径以杀死感染和未感染的淋巴细胞,而且产生一种慢性免疫活化状态导致克隆清除加剧。本文阐述细胞凋亡作为HIV逃避免疫攻击的一种机制,讨论目前HIV操纵凋亡机制使其有利于自身的分子机制,并提出针对这一机制所可能采取的新治疗。

小鼠肝脏局部纤维化的实验性研究

目的:探讨二氧化硅(SiO2)致小鼠肝脏局部纤维化的方法及其可能的机制。方法:C57BL/6J小鼠24只随机分成实验对照组(生理盐水)、碘油组(超液化碘油)、混和液组(超液化碘油+SiO2),分别用生理盐水、超液化碘油及混和液各0.2 mL局部注射小鼠右肝,3个月后观察注射局部病理变化并分别统计比较变性坏死、纤维化及巨噬细胞和纤维化结节的面积差异,测量血清免疫球蛋白G(IgG)、血清免疫球蛋白M(IgM)变化。结果:3组动物注射局部处肉眼观察无明显差别;镜下观察,3组小鼠注射局部变性坏死面积不同,其中混和液组引起局部变性坏死面积最大(χ2=15.4,P<0.01);混和液组与碘油组两两比较变性坏死面积差异无显著性意义(Z=-0.8,P>0.05);在混和液组可见肝脏组织局部的巨噬细胞结节和纤维细胞增生,局部纤维细胞增生较碘油组差异有显著性意义(Z=-2.5,P<0.05);3组小鼠血清IgM水平均数不同(F=1 720.3,P<0.01),其中,混合液组最高(314.7±10.7)mg/L。结论:SiO2与超液化碘油的联合应用可以显著地引起小鼠肝脏局部纤维细胞增生,其机制可能与体液免疫因素IgM水平的变化有关。

登革病毒促进人树突状细胞分泌TNF-α、IL-6、IFN-γ的动态观察

目的:研究登革病毒(DV)对人树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:人外周新鲜血常规分离单核细胞,经细胞因子GM-CSF、IL-4诱导培养DC,形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。用登革病毒2型感染DC,于作用后6、12、24、48、72h分别收集上清液和细胞,间接免疫荧光法检测细胞上病毒抗原表达,ELISA法检测登革病毒感染后细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ水平的动态变化。结果:人外周血经GM-CSF、IL-4诱导培养1周即可得到典型树突状细胞。间接免疫荧光法证明感染的DC胞浆和胞膜上携带登革病毒抗原,DV感染使DC分泌TNF-α、IL-6能力显著大于对照组(P<0.01),但其分泌IFN-γ的能力无明显改变。结论:树突状细胞是登革病毒的靶细胞,登革病毒感染可促进树突状细胞分泌TNF-α、IL-6。树突状细胞可能参与机体抗登革病毒感染的免疫防御机制。

人恶性畸胎瘤PA-1细胞染色体特性及其影响因素的探讨

目的 :探讨人类恶性畸胎瘤PA - 1细胞株染色体特性及其影响因素。方法 :采用G带核型分析、DNA碱基序列分析及Westernblot(蛋白印迹分析 )等方法对经 2 0余年 4 0 7- 4 4 5继代培养的PA - 1细胞株染色体核型及p5 3基因状态进行了研究。结果 :PA - 1细胞株 80 %以上仍然保持近乎二倍体的核型 ,30代以后的细胞由于第 15号染色体与 2 0号染色体间的相互易位形成了M1及M2标识染色体。RT -PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变两个带 (p5 3密码子 2 39突变 ) ,Westernblot未检测出突变的p5 3基因蛋白 ,而p2 1蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论 :人卵巢恶性畸胎瘤PA - 1细胞株经 2 0年的继代培养后 ,一个p5 3等位基因发生错义突变 ,另一个仍然是野生型的。仅一个p5 3等位基因发生突变 。

胃癌组织CDKN2A基因座p14^(ARF)基因变异及意义

目的 :探讨胃癌组织p14ARF基因变异及其意义。方法 :应用PCR、PCR -SSCP、PCR甲基化分析法和RT -PCR分别检测 48例胃癌及癌旁组织中p14ARF基因纯合性缺失、突变、CpG岛甲基化及其mRNA表达状况。结果 :①胃癌组织p14ARF基因纯合性缺失率为 3 1 3 % (15 / 48) ,癌旁组织均未见纯合性缺失。② 3 3例无纯合性缺失的胃癌及癌旁组织均未见p14ARF基因点突变。③胃癌组织p14ARF基因甲基化率为 47 9% (2 3 / 48) ,癌旁组织仅 2例甲基化 ,两者差异有显著 (P <0 0 1)。④ 45 8% (2 2 / 48)的胃癌组织p14ARFmRNA无表达。 3例外显子E1β和E2共甲基化者p14ARFmRNA均无表达 (10 0 % ) ,2 0例单纯E2甲基化者仅 3例无表达 (15 % ) ,两者差异有显著 (P <0 0 5 )。结论 :胃癌中p14ARF基因失活多由纯合性缺失和 5’CpG岛甲基化所致 。

玉米特异表达启动子驱动下结核esat-6抗原基因植物表达载体的构建及鉴定

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。

丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白酶抑制剂的研究进展

面对丙型肝炎的流行,至今缺少理想的治疗药物和方案,丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白3(NS3)蛋白酶是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点。作者综述了NS3蛋白酶抑制剂的作用机制和活性特点。