过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞的生物学作用。方法:分别以0.05、0.1、0.5、1 mmol/L的H2O2作用于体外培养的黑素细胞24 h,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素合成;比色法测定丙二醛(MDA)含量。结果:正常人表皮黑素细胞经H2O2处理后,酪氨酸酶活性降低,黑素合成量减少,丙二醛含量增多,其中以0.5、1 mmol/L的H2O2作用明显,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:H2O2在一定浓度时可抑制正常人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性,减少黑素合成,并可致细胞过氧化损伤。提示H2O2在白癜风发病中可能起到一定作用。

解脲脲原体与不孕、早孕、生殖道炎症关系的探讨

解脲脲原体与不孕、早孕、生殖道炎症关系的探讨刘小澄林晨黄环珍袁桂秀罗伟中解脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，Ｕｕ）是正常人生殖道可以分离出的一种支原体。目前对Ｕｕ与原因不明的不孕症、流产、死胎、新生儿肺炎、女性生殖道炎症等疾病的关...

青天葵具抗肿瘤活性石油醚部位的成分研究

通过体外抑制肿瘤细胞生长活性筛选确定青天葵95%乙醇(体积分数)提取物及其石油醚萃取部位为抗肿瘤活性部位.综合利用多种色谱手段及重结晶方法从石油醚部位分离得到了8个化合物,并运用理化性质和波谱技术分析确定了化合物结构.其结构分别为:环桉烯醇(cycloeucalenol)(1);豆甾醇(2);谷甾醇(3);熊果酸(4);aurantiamide acetate(5);(20S,22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6);6-methoxy-cerevisterol(7);和β-胡萝卜苷(8).其中,化合物3、5、6、7和8均为首次从该植物中分离得到.

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。

HCVcore真核表达质粒pcDNA3.1(-)/core的构建

目的构建HCVcore基因真核表达质粒,为进一步研究和解析HCV诱发人不死化肝细胞癌化的机制,HCV感染的检测及疫苗和药物研发做好前期基础。方法将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1 -3011质粒于大肠杆菌JM109内扩增;提取pBRTM/HCV1-3011质粒;从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCVcore片段并将其插入pGEM-T克隆载体;再与表达载体pcDNA3. 1( -)重组,以得到重组的真核表达载体pcDNA3. 1 ( -) /core;最后限制性酶切鉴定HCVcore表达载体。结果从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCVcore片段大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3. 1 /core内。结论 成功的构建了HCVcore基因的真核表达载体pcDNA3. 1( -) /core。

过氧化氢对黑素细胞增殖活性的影响

目的:观察不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖活性的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,分别以0.05、0.1、0.5、1 mmol/L的H2O2作用于黑素细胞24 h,观察细胞形态学变化,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测细胞活力。结果:正常人表皮黑素细胞经H2O2处理后,细胞存活率降低,且呈浓度依赖性。结论:H2O2有抑制正常人表皮黑素细胞增殖的作用。

HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

目的 :构建HCVNS3基因真核表达载体 ,为进一步研究和解析HCVNS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法 :将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1- 30 11质粒转化感受态菌JM10 9并扩增 ;提取pBRTM/HCV1- 30 11质粒 ;从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中PCR扩增出HCVNS3片段 ;并将其插入到克隆载体pMD18-T中 ,再与表达载体pcDNA3 1(- )重组 ,以得到重组的真核表达载体pcDNA3 1(- ) /NS3;最后限制性酶切鉴定HCVNS3表达载体。结果 :从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中扩增出的HCVNS3片段大小正确 ,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 1/NS3内。结论 :成功地构建了HCVNS3基因的真核表达载体pcDNA3 1(- )

人类恶性畸胎瘤PA-1细胞的p53基因结构、功能状态及其意义

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因结构、功能状态进行了研究。结果:RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变2个带（p53密码子239突变）,FASAY结果也显示p53一个等位基因是有活性的（野生的）,而另一个是非活性的（突变的）。Western blot未检测出突变的p53基因蛋白,而p21蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,一个p53等位基因发生错义突变,另一个仍然是野生型的。仅一个p53等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此,研究PA-1细胞稳定核型的维持结构,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖信号转导机制的研究

目的 :探讨ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖信号转导机制。方法 :观察 0 4mmol LATP与不死化人成纤维细胞共培养不同时间下 ,细胞内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)和三磷酸肌醇 (IP3)浓度的变化特点和意义 ,以及分别应用Ca2 + 和K+ 通道拮抗剂时 ,细胞增殖率的改变。结果 :ATP与不死化人成纤维细胞共培养时 ,[Ca2 + ]i明显升高 ,IP3浓度明显降低 (均P <0 0 1)。分别应用Ca2 + 和K+ 通道拮抗剂时 ,细胞增殖率都显著增高 (均P <0 0 1)。结论 :ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖过程中有钙通道和钾通道以及IP3的参与。

恶性畸胎瘤PA-1细胞的染色体特点及p53基因性状

目的 :探讨人类恶性畸胎瘤PA 1细胞株染色体特性及p5 3基因的状态及其意义。方法 :采用G带核型分析、DNA碱基序列分析等方法对经 2 0余年 4 0 7～ 4 4 5继代培养的PA 1细胞株染色体核型及p5 3基因状态进行了研究。结果 :PA 1细胞株 80 %以上仍然保持近乎 2倍体的核型 ,30代以后的细胞由于第 15号染色体与 2 0号染色体间的相互易位形成了M 1及M 2标识染色体。RT PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变 2个带 (p5 3密码子 2 39突变 )。结论 :人卵巢恶性畸胎瘤PA 1细胞株经 2 0年的继代培养后 ,1个p5 3等位基因发生错义突变 ,另 1个仍然是野生型的。仅 1个p5 3等位基因发生突变 ,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此 ,研究PA 1细胞稳定核型的维持结构 ,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

空弯菌抗原诱导的自身抗体产生动力学

用CJ-S131菌苗经口免疫小鼠16周,观察免疫小鼠体内的自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白和ENA抗体)产生动力学。在CJ-S131菌苗连续免疫的16周内,免疫小鼠有两个自身抗体产生峰。免疫后第6周,出现第一峰,抗组蛋白和ENA抗体的阳性率高于抗ds-DNA和ss-DNA抗体;在第16周,抗ds-DNA和ss-DNA抗体的阳性率高于抗组蛋白和ENA抗体。在正常小鼠体内,存在“自然”抗核酸抗体(抗ds-DNA和ss-DNA抗体),随年龄而增长,但个体差异较大;而抗核蛋白抗体(抗组蛋白和ENA抗体)始终测不出。上述结果提示,抗组蛋白抗体和抗ENA抗体在自身免疫病的发病机理和早期诊断中,具有潜在意义,值得进一步研究。

PCR-SSCP银染方法检测BRCA1基因核苷酸部位2731的多态性

乳腺癌易感基因 BRCA1是肿瘤抑制基因之一,它定位于染色体17q21,编码一个尚不清楚的蛋白质,分子量20万道尔顿,含有1863个氨基酸。已发现 BRCA1基因的200个以上突变及30个以上多态位点。本文用 PCR-SSCP 银染方法检测其核苷酸部位2731的多态性,具有经济、快速、灵敏、相对简单易行和可靠的优点。将此法用于检测18例家族性乳腺癌先证者的染色体组 DNA,结果显示,33%(6/18)表现为多态性,其中2例为多态性纯合子。其多态性的生物学意义及其与乳腺癌、卵巢癌的关系有待进一步研究。

从肝脓肿脓液分离出克柔氏念珠菌1例报告

念珠菌是条件致病菌,通常存在于人体体表、口腔、肠道和阴道,一般不致病,当人体细胞免疫功能失调时,可在局部引起浅部感染,进一步并可能侵入体内导致一个或多个脏器感染。近年来,由于广谱抗生素、免疫抑制剂及皮质类固醇激素的应用,导致念珠菌感染日益增多。

正常家族和乳腺癌家族成员的Plakoglobin基因多态性差异

正常家族和乳腺癌家族成员的Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性差异暨南大学医学院微生物免疫教研室（广州５１０６３２）黎国华暨南大学计算机科学系宗承全应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性片段长度多态性分析方法（ＲＦＬＰ５），对正常家族和遗传性乳腺癌家族成员...

组胺H_2受体阻滞剂对免疫介导小鼠再生障碍性贫血发生的阻断作用

目的 探讨组胺H2 受体阻滞剂对免疫介导小鼠再生障碍性贫血 (再障 )的发生有无阻断作用。方法 通过给全身亚致死量照射的BALB/c小鼠转输H 2相同、MLS不同的DBA/ 2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞诱导小鼠再障发生 ,实验组每天腹腔注射 1次甲氰咪胍 ,共 8次 ,于照射后第 14天 ,观察股骨骨髓增生程度。结果 腹腔注射 0 .5 0 ,1.0 0 ,2 .0 0mg·(10g体重 ) -1·d-1甲氰咪胍的小鼠的股骨平均骨髓造血组织容量分别为 (4 6 .5 8± 2 0 .41) %、(5 1.88± 2 4.94) %和 (5 9.12± 32 .48) % ,显著高于再障组的 (19.99± 10 .98) % (P <0 .0 1) ,而与单纯照射组 (5 3 .81± 31.72 ) %相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 组胺H2 受体阻滞剂能阻断半相合淋巴细胞诱导经亚致死量照射的小鼠的再障的发生。

Plakoglobin基因在乳腺癌BRCA1基因突变的多态性

为了探讨在携带乳腺癌易感基因（ＢＲＣＡ１）突变基因的乳腺癌家族中是否同时具有Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因的改变，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和双向直接测序方法，对家族性乳腺癌中有乳腺癌易感基因ＢＲＣＡ１突变的两个德国家族成员的Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性进行研究。结果表明，两个家族６７％（６／９）有Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性改变，且不同的ＢＲＣＡ１基因突变亦伴随不同形式的Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性。为研究乳腺癌的分子遗传学病因积累了资料。