角膜胶原交联治疗小鼠真菌性角膜炎的疗效

目的研究角膜胶原交联术（CXL）在治疗真菌性角膜炎过程中的疗效。方法选择6～8周龄雄性SPF级C57BL/6小鼠80只，制作腐皮镰孢菌性角膜炎模型，其中40只用于角膜真菌活性的检测，40只用于疗效观察，均以左眼为实验眼。角膜真菌活性的检测中将40只小鼠按照随机数字表法分为假手术组（不接种菌丝）、模型对照组、去上皮组（造模后刮除角膜上皮）和交联治疗组（去上皮联合交联治疗），各组小鼠分别于造模后3 d用裂隙灯显微镜对术眼角膜炎症进行评分，并行角膜组织的载菌量计数。交联疗效观察实验中，应用随机数字表法将40只小鼠随机分为假手术组（不接种菌丝）、模型对照组、去上皮组和交联治疗组（去上皮联合交联治疗）。4个组小鼠分别于造模后连续7 d行裂隙灯显微镜下术眼角膜炎症评分及眼前节数码照相。造模后14 d，裂隙灯显微镜下对术眼角膜炎症单项评分后，行组织病理学检查及炎症细胞计数。结果造模后交联治疗组小鼠角膜载菌量最低，各组角膜载菌量的总体比较，差异有统计学意义（F＝11.97，P＝0.00），交联治疗组角膜载菌量平板计数与角膜炎症评分呈明显正相关（r＝0.723，P＝0.043）。交联治疗组各时间点小鼠的角膜炎症评分明显低于模型对照组，3个组间和不同时间点角膜炎症评分的总体比较，差异均有统计学意义（F分组＝34.44，P＝0.00；F时间＝17.49，P＝0.00）。造模后14 d，去上皮组和交联治疗组小鼠角膜病灶面积和溃疡程度评分均明显低于模型对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。角膜组织病理学检查显示，模型对照组小鼠角膜水肿，部分角膜基质溶解坏死，去上皮组于造模后角膜炎症表现较轻。交联治疗组小鼠角膜炎症反应最轻微，造模后7 d角膜炎症接近痊愈。假手术组角膜基质内细胞很少；模型对照组基质增厚，基质内炎症细胞增多，可以确认的中性粒细胞占基质所有细胞总数的73.65%；去上皮组中性粒细胞百分比为59.33%；交联治疗组中性粒细胞百分比为11.29%。结论CXL可以有效抑制小鼠角膜真菌活性，减轻真菌诱导的角膜炎症反应。

肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响

目的:观察抗真菌药物诱导的肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响。方法:选用健康无眼疾的C57BL/6J雄性小鼠,将实验小鼠随机分为两组:对照组和两性霉素B组。对照组给予正常饮食,两性霉素B组给予添加两性霉素B的饮食,以诱导小鼠肠道真菌菌群失调,4wk后对两组小鼠角膜进行上皮创伤,使用荧光素钠染色角膜创伤区域,动态观察上皮修复情况,并利用免疫荧光染色观察角膜上皮细胞、炎症细胞变化,通过HE染色观察角膜厚度的变化。结果:两性霉素B组与对照组相比,再上皮化速度和创伤修复延迟,炎症细胞明显减少,角膜上皮厚度变薄。结论:肠道真菌菌群失调延迟角膜创伤的修复,降低角膜创伤后的炎症反应。

高糖饮食对小鼠真菌性角膜炎的影响

目的探究高糖饮食对小鼠真菌性角膜炎的影响。方法选取健康无眼疾的雄性C57BL/6J小鼠78只,随机分为高糖饮食组和模型对照组,每组36只,模型对照组给予正常饮用水,高糖饮食组给予含体积分数10%果糖溶液,每2 d测量两组小鼠体质量及血糖,10 d后建立真菌性角膜炎模型。造模后24 h、36 h、48 h、72 h、96 h、120 h、168 h裂隙灯显微镜下对角膜进行临床评分并拍照。处死小鼠后,取角膜组织进行HE染色和PAS染色;测定角膜内中性粒细胞和巨噬细胞浸润体积。利用酶联免疫吸附实验对小鼠角膜内的白细胞介素-1β含量进行测定。结果造模后0～14 d,两组小鼠体质量与血糖差异均无统计学意义(均为P>0.05)。造模后24 h、36 h、48 h、120 h、168 h,高糖饮食组小鼠角膜临床评分均明显高于模型对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖饮食组小鼠角膜穿孔率79.5%,高于模型对照组的40.9%,差异有统计学意义(P=0.000)。造模后各时间点,高糖饮食组中性粒细胞浸润体积均高于模型对照组,差异均有统计学意义(均为P=0.000)。造模后72 h、96 h、120 h、168 h,高糖饮食组巨噬细胞浸润体积均高于模型对照组(均为P=0.000)。角膜组织病理学检查结果示,高糖饮食组炎症反应更重,角膜组织破坏更早且更为严重。造模后24 h、48 h高糖饮食组白细胞介素-1β含量均明显高于模型对照组(均为P<0.05)。结论高糖饮食加重了真菌性角膜炎感染的严重程度,增强了中性粒细胞、巨噬细胞的趋化,促进了IL-1β的分泌。