BRCA1基因全长mRNA序列分析技术

目的:建立BRCA1基因全长mRNA序列测定方法。方法:根据文献和GenBank(U14680)报道的BRCA1基本序列设计6对特异性引物,建立6个特异性逆转录PCR(RT-PCR)技术,分段且扩增BRCA1全长mRNA,然后采用毛细管电泳进行cDNA测序,方法建立后用于3名健康女性样本。结果:6个特异性RT-PCR反应扩增片段相互覆盖,使序列分析结果包括全长BRCA1mRNA,共5000多bp。3名经PCR技术检测确定携带正常BRCA1基因的样本的mRNA分析结果显示,其BRCA1mRNA序列均与过往报道的正常mRNA序列完全一致。结论:所建立的RT-PCR特异性结合BRCA1基因,能用于其mRNA全长序列分析。

一种新的BRCA1等位基因

目的 对乳腺癌易感基因- 1(BRCA 1) m RNA进行全长序列分析。方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)技术和c DNA测序,分析3名个体的BRCA1基因m RNA全长序列,3名个体中,2名为乳腺癌患者,另一名为健康献血者。结果 健康献血者的BRCA1基因m RNA序列与以往报道的正常m RNA序列(U 14 6 80 )完全一致;1名患者的BRCA 1m RNA序列在第11外显子发现5处碱基突变外:2 2 0 1C>T,2 4 30 T>C,2 731C>T,32 32 A>G和36 6 7A>G,在第13和第15外显子各有一处碱基变异:4 4 2 7T>C和4 95 6 A>G;另一名患者则在上述碱基变异位点均表现为正常BRCA1基因和突变等位基因的杂合性。结论 结果表明通过BRCA 1基因m RNA序列分析,发现一新的等位基因,该基因与正常BRCA1编码区序列存在7处碱基差异,新等位基因已由EMBL /Gen Bank/DDBJ收录,注册号为AY75 14 90。