TIM-3、LAG-3和BTLA介导的血液肿瘤免疫耐受及其逆转研究

近年来认为肿瘤免疫抑制最为重要的原因,是免疫细胞异常表达一些T细胞免疫抑制受体所介导的T细胞功能耗竭,与肿瘤的发生发展密切相关,而阻断这些免疫负调控受体通路可以使T细胞部分或全部恢复功能。本文就近年来新近发现的T细胞免疫抑制受体T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因-3(LAG3)和B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)在血液肿瘤介导T细胞免疫耐受中的作用及其靶向治疗研究进展作一综述,旨在为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供新的思路。

T细胞介导炎症与血液肿瘤发生相关性研究进展

慢性炎症是肿瘤发生过程中一个重要因素,越来越多的研究显示T细胞介导炎症与多种肿瘤发生密切相关。本文主要综述近期有关T细胞介导炎症与血液肿瘤发生的相关性及其分子机制的新进展。

血液肿瘤患者细胞免疫功能状态的研究

血液肿瘤患者均存在严重的免疫功能紊乱,由此而影响机体自发抗肿瘤免疫反应和各种抗肿瘤治疗效果。本文就新近有效的免疫检测手段——T细胞受体Vβ基因谱型分析和T细胞受体删除 DNA环及其检测的意义,血液肿瘤的细胞免疫功能缺陷状况和免疫缺陷的影响因素等作一综述。

T细胞受体Vβ基因谱系分析在血液肿瘤研究中的应用

分析T细胞受体(TCR)Vβ基因谱和CDR3长度可以确切了解TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性。目前TCR Vβ基因谱分析已广泛应用于判断血液肿瘤和免疫相关疾病患者的免疫功能状态及某些致病克隆的确定;评价不同造血干细胞移植后的免疫重建;探索性区分临床移植物抗白血病效应和移植物抗宿主病;以及为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供依据等。

siRNA在恶性血液病中的研究进展

siRNA是 2 1～ 2 3个nt的短双链RNA ,它的 3′端有 2个AA的突出 ,结构稳定 ,半衰期长 ,能在低于反义核苷酸几个数量级的浓度下使靶基因降至极低水平甚至完全“敲除”。

血液肿瘤DNA疫苗研究进展

DNA疫苗能够诱导机体产生特异性体液和细胞免疫反应,基于血液肿瘤抗原而设计的DNA疫苗,有可能促进机体的抗肿瘤免疫应答能力,而消除微小残留病变,预防复发和延长无病生存期。

少见驱动变异在非小细胞肺癌中的研究进展与挑战

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中约有40%携带常见的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)敏感突变(19外显子缺失突变或21外显子L858R点突变)[1-2],另约有20%~30%左右的患者携带明确可靶向治疗的少见或罕见驱动变异[3-14]。如何定义为“少见”、“罕见”目前尚无统一的标准,文献通常将检出率<5%的变异定义为“少见”,对“罕见”的标准尚无明确定义[15-16]。NSCLC中少见驱动变异虽然单独检出率低,但总体比例并不低,加之庞大的NSCLC患者基数,提高检出率、提升研发效率、规范诊疗策略对少见驱动变异的精准、规范全程管理具有重要意义。

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

Bcl-2反义寡核苷酸增强阿糖胞苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究

背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性。本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响。方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05)。结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡。

三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡过程中端粒酶活性和hTERT、bcl-2基因表达的研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。方法:通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡;以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平;利用半定量多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测As2O3处理Raji细胞前后端粒酶活性的改变。结果:2μmol/LAs2O3能诱导Raji细胞凋亡,2μmol/LAs2O3作用于Raji细胞8h、12h、24hhTERTmRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异(P<0.05),12h、24hbcl-2mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异。2μmol/LAs2O3作用48h后,Raji细胞中端粒酶活性即出现下降,作用72h、96h,端粒酶的活性明显受到抑制,吸光度分别为0.829、0.328、0.291,分别与空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:As2O3诱导Raji细胞凋亡过程中,端粒酶活性下调与hTERT、bcl-2基因mRNA表达下降有关。

体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究

目的:体外分离和定向诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化。方法:无菌条件下从正常C57BL／6J胎鼠肝中分离出间充质干细胞,体外培养传3代后用高浓度葡萄糖培养基以及碱性纤维生长因子(basic fihroblast growth factor,bFGF)和尼克酰胺诱导分化,观察胎肝间充质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后胰十二指肠同源异型基因盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、胰岛素原1(proinsulin-1,INS-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)表达情况;胰岛素免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞胰岛素的表达;在形成胰岛样细胞簇后,用双硫腙做胰岛B细胞特异性染色。结果:RT-PCR显示诱导5 d后PDX-1、INS-1、GLUT-2均有表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;胰岛素免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;细胞簇双硫腙染色阳性(每个T-25培养瓶有80-120个)。结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛B样细胞。

体外诱导人骨髓间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的研究

目的:探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛β样细胞分化。方法:在无菌条件下从正常成人骨髓中分离间充质干细胞,体外培养传3代后用表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导MSCs向胰岛β样细胞分化。观察MSCs在诱导前后的形态变化;用胰岛素免疫细胞化学染色检测胰岛素的表达;用双硫腙染色鉴定胰岛β样细胞。结果:未经诱导的MSCs在培养体系中呈贴壁生长,长梭形,经诱导分化后,细胞逐渐变圆,并聚集成团;胰岛素免疫细胞化学表明细胞团内的细胞呈胰岛素染色强阳性反应;双硫腙染色阳性。结论:人骨髓间充质干细胞可在体外被定向诱导分化为胰岛β样细胞。

抗原特异TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCRV β13-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究

目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增殖T细胞受体(TCR)Vα6和Vβ13亚家族T细胞,在此基础上利用RT-PCR扩增TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列后,分别将其定向克隆入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP,酶切和核酸序列测定分析方法鉴定重组质粒TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP的正确性;利用核转染技术(nucleofector)将其分别或共同转染Raji细胞和Jurkat细胞,24 h后利用激光共聚焦显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,48 h后利用实时定量PCR检测TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达情况,Western blot检测EGFP蛋白的表达情况。结果获得来自DLBL患者的TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列,酶切分析和核酸序列测定证实TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染24 h后,激光共聚焦显微镜下可观察到EGFP的表达,40%以上细胞发出绿色荧光,单独转染和共转染组荧光产生情况相似;实时定量PCR在单独转染和共转染组均可检测到TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达,共转染组2基因的表达水平稍低于单独转染组;Western blot检测在单独转染和共转染组均显示EGFP蛋白的表达,2组的蛋白杂交带强度相似。结论成功构建了DLBL特异性的TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP真核表达质粒,两者可同时转染到细胞中,并实现了体外共表达。

三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶活性的实验研究

目的:观察三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721端粒酶活性的影响。方法:应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法,检测三氧化二砷作用后,肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶活性的变化并比较两种细胞端粒酶对三氧化二砷敏感性的差异。结果:0 25～2 00μmol/L三氧化二砷(24～96h)可抑制肝癌细胞系BEL-7402的端粒酶活性,抑制作用与时间、剂量呈依赖性关系;0 25～0 50μmol/L三氧化二砷对SMMC-7721细胞端粒酶活性没有影响(96h以内),1 00～2 00μmol/L三氧化二砷可抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性(48～96h),有时间、剂量依赖关系。结论:三氧化二砷可以抑制肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶的活性;BEL-7402细胞端粒酶对三氧化二砷的敏感性较SMMC-7721细胞端粒酶高。

NF-κB与肿瘤细胞增殖及转移关系的研究进展

NF-κB是一类具有多向调节作用的转录调控因子家族,与肿瘤的发生、发展密切相关。本文综述了NF-κB结构、功能及调节的特性,以及在肿瘤细胞凋亡、增殖及转移中的作用,它有可能成为肿瘤治疗的新靶点。

盐霉素增强长春新碱诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡研究

目的:本文旨在研究长春新碱(vincristine,VCR)与盐霉素(salinomycin,Sal)联合作用对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平。结果:VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著(P<0.05),具有协同作用。联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高(P<0.05)。结论:长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用。

慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究

目的：了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRVδ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：8例健康人平均表达（6.63±0.52）个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达（1.10±0.57）个Vδ亚家族（1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达）,外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异（P〈0.01）。6例慢性苯中毒患者存在1-2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖。结论：慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应。

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况。方法采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用。结果经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞。结论APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用。

长链非编码RNA在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200 nt(核苷酸)的非编码RNA分子,可在遗传水平、转录水平和转录后水平调控基因的表达,广泛参与机体的生理和病理过程,在恶性肿瘤的发生和发展中起着重要作用。本文简单综述了几个与肿瘤密切相关的长链非编码RNA的研究进展。

体外诱导小鼠胎肝间充质细胞向神经元样细胞分化的研究

目的 :探讨胎肝间充质细胞在体外向神经元样细胞分化的潜能。 方法 :无菌条件下获取胎龄 1 4 .5d的胎肝细胞 ,DMEM/HEPES/F1 2 (2 0 %FCS)培养得到贴壁细胞并传代 ,第 5代细胞经 β 巯基乙醇 (β mercaptoethanol,β ME)与全反式维甲酸 (all trans rentinoicacid ,ATRA)程序化诱导处理后 5h、5d ,用免疫细胞化学鉴定神经元抗原表达 ,同时用半定量RT PCR检测神经元相关基因mRNA表达情况。 结果 :胎肝间充质细胞经 β ME、ATRA诱导处理后 ,约 80 %细胞呈现典型的神经元样的形态表型。免疫细胞化学显示诱导分化后的细胞表达神经元特异蛋白如神经元核特异性抗原 (neuron specificnuclearpro tein ,NeuN)、神经元特异性管蛋白Ⅲ型 (neuronc specifictubulinⅢ ,TuJ 1 )、神经丝蛋白中链 (neurofilament M ,NF M )及神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE) ,但是无成熟神经元微管相关蛋白Tau(microtubule associatedproteintau ,Tau 1 )、微管相关蛋白 2 (microtubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )表达。半定量RT PCR结果显示诱导分化后的细胞酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)mRNA有表达 ,脑因子 1基因 (brainfactor 1 ,BF 1 )、脑因子 3基因 (brain 3,Brn 3)、神经丝蛋白轻链基因