生物科学技术在医药学上的应用现状及前景

生物科学技术在医药学上的应用现状及前景林剑陈小佳（暨南大学生物工程研究所，５１０６３２）当今世界，国际竞争十分激烈，这种竞争实际上是综合国力的竞争。因此，要想在国际竞争中占有一席之地，必须要增强本国的经济综合实力，而发展经济的根本出路在于发展科学技术...

人骨髓间质干细胞与新型可降解材料生物相容性的实验研究

目的:本研究利用人骨髓间质干细胞(MSC)的增殖与分化潜能作为指标,对可降解偏磷酸钙(dCMP)材料和羟基磷灰石(HA)材料的生物相容性进行体外研究。方法:通过扫描电镜观察MSC在dCMP表面粘附的情况,并利用ICP和IC分析dCMP和HA的降解产物元素含量,同时采用FACS、ALP活性检测及ARS等方法对降解产物的毒性效应进行检测。结果:dCMP对MSC的增殖有促进作用,且不影响MSC的成骨分化进程及分化后的矿化功能;而HA对MSC的成骨分化进程无影响,但对MSC的增殖和成骨分化后的矿化功能均有抑制作用。结论:dCMP的生物相容性较HA为佳,更适合作为骨替代材料。

利用RNA干涉技术研究雄激素受体在人前列腺癌细胞增殖中的作用

目的 :利用RNA干涉技术抑制雄激素受体 (AR)的表达 ,研究AR在激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞增殖中的作用。方法 :设计、合成针对AR的 4种不同的小干涉RNA(siRNA) ,连接到带有人H1启动子的腺病毒载体质粒pShuttle -H1-Ri中 ,构建成能产生AR -siRNA的质粒pShuttle -H1-Ri-AR ,与能表达AR的质粒pcDNA -AR共转染HEK2 93细胞 ,Westernblot检测不同的siRNA对AR表达的抑制效率 ,选取抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒 ,感染LNCap、C4 - 2B和CWR2 2Rv13种对雄激素有不同反应性的人前列腺癌细胞 ,采用Westernblot检测感染后细胞中AR的表达程度 ,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性。结果 :4种siRNA都能抑制共转染AR的表达 ,用抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒感染 3种靶细胞后 ,均能特异性地抑制 3种细胞中AR的表达 ,细胞的增殖活性也随之明显下降。结论 :AR -siRNA通过抑制激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞中AR的表达 ,有效地抑制细胞的增殖 ,AR对维持激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖活性具有十分重要的作用 ,是治疗前列腺癌的重要靶分子。

bFGF生物海绵对脊髓损伤神经保护作用的研究Ⅰ

目的 :探索碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF )对大鼠脊髓损伤的神经保护作用。方法 :用大鼠脊髓半横断损伤模型 ,对局部脊髓组织和运动皮质进行神经纤维和神经细胞的定量分析。结果 :术后 1、2、3周bFGF组脊髓切口处神经纤维均较对照组粗密 ,术后 1、 2周 ,神经纤维密度测定结果显示bFGF组较对照组明显增加 (P <0 0 5 )。对照组运动皮质内锥体层神经细胞肿胀 ,尼氏体淡染 ,出现明显的噬神经细胞现象 ,bFGF组偶见此现象 ,对照组胶质细胞记数明显多于bFGF组 (P <0 0 5 )。结论 :bFGF生物海绵对大鼠受损脊髓局部及投射纤维起源脑区

洋葱表皮色素的提取及性质研究

研究洋葱表皮色素的提取工艺和基本性质。结果表明,洋葱表皮色素易溶于热水、乙醇水溶液,溶于丙酮,难溶于冷水、氯仿、乙酸乙酯、乙醚;对酸、弱碱、还原剂、氧化剂、食品添加剂、金属离子较稳定,但对高温和强光照射不稳定,洋葱表皮色素将成为食品、医药和化妆品中使用的良好的天然色素。

利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响

目的 :利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响。方法 :将 4 0只 2 0月龄SD雄性大鼠分成不用药与用六味地黄丸两组 ,用药 5周后 ,通过检测相关生化指标 ,确定用药组与对照组之间具显著差异。提取 2 0只 4月龄SD雄性大鼠脾脏mRNA ,平均分成两组 ,分别与老年用药组脾脏mRNA和老年对照组脾脏mRNA配对进行逆转录和芯片杂交实验 ,获得老年对照组和老年用药组分别和青年组相比 ,相关基因表达水平的差异 ,通过比较两组数据 ,评价六味地黄丸对与衰老相关的基因表达的调节作用。结果 :芯片结果显示老年对照组与青年组相比有 13个基因表达显著下调 ,1个基因表达显著上调。而在老年用药组中 ,14个相关基因的表达水平没有明显变化 ;而另有 2序列与青年组相比表达显著上调。结论 :通过基因芯片技术 ,发现 16个基因的表达水平可受六味地黄丸用药的影响。通过深入研究对我们深入理解六味地黄丸抗衰老的分子机制可能有帮助。

牛膝促进成骨细胞增殖的作用与机理研究

目的 :研究牛膝对成骨细胞株HFOB1 19的促增殖作用及其分子机制。方法 :制备牛膝含药血清 ,醇提法制备牛膝脱皮甾酮 ,MTT法检测二者对体外培养的HFOB1 19的促增殖作用 ,RT PCR检测PKARⅠ β的表达。结果 :牛膝含药血清与牛膝脱皮甾酮均能促进成骨细胞的增殖 ,并导致PKARⅠ β表达的上调。结果 :初步判定牛膝在体外有促进人成骨细胞增殖的作用 ,其主要作用成份为脱皮甾酮 ,并有可能是通过cAMP介导的信号传导途径进行的。

基因重组bFGF的药效学研究

利用小型猪创伤模型，将ｂＦＧＦ分成３ 组（５００、１ ０００、１ ５００ Ｕ／ｍ ）处理创面，并用ＳＤ－Ａｇ 及生理盐水做对照，观察创面愈合情况，结果表明１ ０００ Ｕ／ｍ ｌ浓度组促创伤作用比较明显，体外细胞培养５０ ｎｇ／ｍ ｌｂＦＧＦ细胞增殖作用最明显。

基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子促进创面愈合的临床研究

目的 :观察基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对急性创面和慢性创面愈合的促进作用。方法 :治疗组 (12 82例 )和对照组 (439例 )被分为深Ⅱ度烧伤、浅Ⅱ度烧伤、供皮区 (包括刃厚和中厚供皮区 )和慢性 (包括残余小创面和慢性溃疡 )创面 4大类。分别观察应用rbFGF后不同时间创面愈合面积的百分比、创面完全愈合时间 ,以及用药前后的全身情况和不良反应。结果 :浅Ⅱ度烧伤 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 1 7%± 2 6 4 %和 (12 6± 2 9)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 70 6 %± 2 5 0 %和 (10 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。深Ⅱ度烧伤 15d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 3 3%± 2 5 4 %和 (2 1 9± 5 5 )d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 6 9 7%± 2 7 0 %和 (18 5± 4 4 )d(P <0 0 0 1)。供皮区创面 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 7 6 %± 2 9 4 %和(11 4± 2 7)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 72 1%± 2 8 0 %和 (9 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。慢性创面完全愈合时间 ,对照组为 (2 8 0± 18 0 )d ,治疗组 (2 2 1± 16 )d(P =0 0 6 8)。用药前后血常规、肝、肾功能无异常变化。结论

长角豆胶复合涂膜保鲜剂常温保鲜荔枝的研究

本实验以长角豆胶与黄原胶复配胶为涂膜基质,CMC-Na、柠檬酸和吐温80等为成膜助剂,配以丁香、艾叶和大黄等具有抗菌作用的中草药制剂,配制成中草药复合涂膜保鲜剂,研究了常温(均温30.50℃)下该复合涂膜保鲜剂对荔枝品质变化的影响。结果表明:常温下经该保鲜剂涂膜保鲜的荔枝与对照组相比,果实腐烂率、失重率明显降低,呼吸强度、PPO活性及营养成分的消耗被抑制,延缓了果实的衰老过程。

Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

活血温阳益气中药复方对大鼠充血性心力衰竭的影响及机制研究

目的:研究补气温阳、活血化瘀中药复方(组成:人参、黄芪、车前子、苏木、川芎、丹参、制附子、枳壳、桂枝)对大鼠充血性心力衰竭的影响机制。方法:以大鼠腹腔注射盐酸阿霉素(ADR)制造充血性心衰动物模型,分为对照组、ADR心力衰竭模型组、心宝治疗组、活血温阳益气复方治疗组,并分别以生理盐水、心宝药液、活血温阳益气复方药液灌胃干预治疗,使用放免法、半定量逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)及流式细胞技术测定心衰大鼠治疗前后血浆心钠素(ANP)、肾髓质精氨酸血管加压素依赖性水通道蛋白-2(AQP2)及热休克蛋白70(HSP70)的表达水平差异。结果:活血温阳益气复方可显著提高心衰大鼠的心输出量、左室收缩内压,降低左心室舒张末压,改善左室内压最大变化速率,从而有效地改善了心衰大鼠的血流动力学;同时,该方能够显著降低心衰大鼠血浆ANP的水平和纠正心衰大鼠肾髓质AQP2蛋白的异常表达,并可提高白细胞中HSP70的转录和翻译水平。结论:该活血温阳益气复方能有效减轻大鼠充血性心力衰竭的程度,其机制可能与其减少血浆ANP水平、矫正肾脏AQP2异常表达和增强HSP70表达有关。

超声法提取金鸡纳生物碱的工艺

研究金鸡纳总生物碱的超声提取工艺.采用L9(34)正交设计通过正交试验得出了超声提取的最佳工艺条件.超声提取的影响因素顺序为提取次数>提取时间>料液比,其最佳提取条件为A2B2C2,即8倍量的甲苯提取液提取4次,每次45 min.实验证明该提取工艺方法经济合理.

重组人碱性成纤维细胞生长因子的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的纯化工艺和活性鉴定 .方法 :将rhbFGF工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、阳离子交换、凝胶过滤等技术进行纯化 .结果 :纯化后的rhbFGF ,相对分子质量为 17× 10 3,蛋白纯度为 95 %以上 ,比活为 1 7× 10 6 U/mg ,对NIH3T3细胞具有明显的促分裂活性 .结论 :通过复性和两步层析的纯化方法可获得高纯度、高回收率和高生物活性的rhbFGF 。

人外周血T淋巴细胞表型改变与衰老相关性研究

目的 :探讨人T淋巴细胞表型随年龄变化的规律 ,寻找敏感的免疫衰老生物标志。方法 :取年轻组(2 0 - 35岁 )和年老组 (5 0 - 75岁 )志愿者的新鲜肝素抗凝静脉血 ,进行三色或四色直接免疫荧光染色 ,获取有核细胞后以流式细胞仪分析T细胞亚群的表型。结果 :2个年龄组的总T细胞 (CD3+ )、辅助T细胞 (CD4 + )以及细胞毒T细胞 (CD8+ )亚群的相对百分率没有明显差别 ,但年老组T细胞上CD3分子的密度 (MFI)明显下降 ;粘附分子CD4 4与CD6 2L在 3群T细胞上阳性率的差别均无统计意义 ;而 2组间总T细胞、辅助T细胞以及细胞毒T细胞亚群的CD95阳性率都有显著差别 ,表现为随年龄增加 ,CD95表达率上升。结论 :在所研究的年龄组间 ,T细胞及其亚群的相对数量没有显著改变 ,而CD3表达密度随年龄增加而下调 ;T细胞的凋亡诱导分子CD95阳性率随年龄增加而上升 ,提示CD95可能是评价免疫衰老的潜在生物标志。

bFGF与黑色素关系的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)是一种具有多种生物学效应的细胞因子。目前对bFGF与黑色素关系的研究主要集中在bFGF对黑色素细胞的生长产生的影响和对黑色素生成的调控等方面 ,并进而探讨研究治疗黑色素相关疾病的机理 ,综述了在这些方面的研究进展。

双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究

目的在体外研究骨伤药双龙接骨丸含药血清对成骨细胞增殖活动的影响,并对其分子机制进行初步探讨。方法制备双龙接骨丸含药血清,MTT 法观察体外含药血清对成骨细胞株 HFOB 1.19的促增殖作用,cDNA 微阵列技术分析含药血清导致的基因表达差异,寻找双龙接骨丸的可能作用途径。结果高、中、低剂量双龙接骨丸含药血清组较对照组均有明显促进 HFOB 1.19增殖的作用(P<0.01),此过程中至少有8种基因的表达量发生明显变化,其中 cAMP 依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKAP Ⅰβ)表达量上调1.8倍,GC 盒结合蛋白表达降低73%。结论初步判定双龙接骨丸含药血清在体外有促进人成骨细胞增殖的作用,并有可能是通过 cAMP 介导的信号传导途径进行的。

用于骨靶向治疗的纳米羟基磷灰石溶胶的稳定性研究

目的制备可用于靶向骨肿瘤治疗的高分散性且生物相容性好的纳米羟基磷灰石溶胶。方法采用六偏磷酸钠为分散剂制备溶胶,采用MTT法和淋巴细胞实验测试细胞毒性。结果获得纳米粒子含量为88%的高分散性溶胶,溶胶含量低于27.8mg/L时,对于3T3细胞和淋巴细胞的增殖没有毒性。结论该溶胶可以作为靶向药物载体安全用于给药体系。

脑缺血再灌流模型大鼠血脑屏障对bFGF通透的研究

目的 探讨脑缺血再灌注模型大鼠血脑屏障是否对高分子量的多肽 -碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)通透。方法 采用大脑中动脉腔内阻塞模型 ,股静脉滴注 1 2 5I- b FGF,对大脑冠状冰冻切片进行放射自显影 ,图象分析测定光密度。结果 正常对照大鼠脑冠状切片放射自显影结果显示脑轮廓影 ,且为全脑均匀分布 ;模型鼠除了显示脑轮廓影外 ,可见缺血病灶侧影像较健侧及正常鼠浓集。光密度测定结果显示模型鼠病灶侧与其健侧及正常鼠同侧的光密度值差异显著 (t=3.54,P<0 .0 5;F=39.6,P<0 .0 5)。结论 1 2 5I- b FGF经股静脉滴注后 。