紫外可见分光光度法鉴别掺兑潲水油的花生油

研究了潲水油、花生油、调和油和葵花籽油的紫外可见光吸收光谱。实验表明,根据光谱曲线形状差异和吸光度大小可以鉴别掺兑潲水油的花生油,并能定量检测。该方法具有仪器简单、检测快速、费用低廉等优点。

Armillariella tabescens EJLY2098β-甘露聚糖酶的诱导、纯化及酶学性质分析

Armillariella,tabescens EJLY2098经魔芋精粉诱导,可产β-甘露聚糖酶,再用正交实验优化诱导培养基,结果在培养基为魔芋精粉2％、蛋白胨1％、土豆汁25％、KH2PO4 0．3％、MgSO4·7H2O 0．15％、维生素B1 0．01％时可诱导出较高活性的酶。用DEAE-阴离子交换色谱从培养上清分离纯化β-甘露聚糖酶,出现2个活性组份。活性组份P2的SDS-PAGE分析显示电泳纯的一条带,分子量约78．9kDa。HPTLC分析P2为内切β-甘露聚糖酶;酶反应的最适温度为60℃,最适pH为4．0-6．0。保温30min的半失活温度T1/2为63℃,在pH4．5-6．0之间稳定性较好。Na+和Ba2+对其有激活作用,等电点pI约为4．0-4．1。获得了一株产β-甘露聚糖酶的新菌种,为进一步用基因工程方法克隆并构建具有完整自主知识产权的重组β-甘露聚糖酶基因工程菌提供了重要的基础工作。

水杨梅和水团花提取物体外抑菌活性的实验研究

目的比较水杨梅和水团花不同提取物的抑菌活性,探寻该两种水团花属植物的有效抑菌成分。方法用肉汤稀释法测量水杨梅和水团花的乙醇粗提物、石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取部位,余水部位以及水杨梅甾体混合物、水团花单体化合物对6种实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果水杨梅各萃取部位及水团花醋酸乙酯萃取部位在实验质量浓度范围内分别对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞杆菌、枯草芽胞杆菌或猪霍乱沙门氏菌显示出了不同程度的抑制活性;从水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的化合物中,槲皮素-3-Oβ--D-葡萄糖苷显示出了较好的抑菌作用。结论水杨梅和水团花均含有抑制细菌的有效成分,为水团花属抑菌药物的开发提供了理论依据。

bFGF单抗联合放疗对小鼠B16移植瘤的协同抑制作用

目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mAb组及联合治疗组。各组经相应治疗后,测量移植瘤体积;治疗20 d后处死小鼠,取移植瘤称瘤质量,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡率,免疫组化检测移植瘤组织bFGF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达率及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF-mAb治疗、放疗、联合治疗的抑瘤率分别为30.49%、12.17%和48.76%,联合治疗组的抑瘤率明显高于其他组(P<0.05);与放疗组比较,联合治疗组的放射增敏率为2.37。联合治疗组移植瘤细胞凋亡较放疗组、bFGF-mAb组及对照组明显增多[(58.56±6.47)%vs(17.21±2.86)%,(28.45±5.47)%,(10.62±1.73)%;P<0.05或P<0.01],其bFGF、VEGF表达水平下降,MVD明显减少(P<0.05)。结论:bFGF-mAb联合放疗对B16移植瘤具有协同抑瘤效应,通过降低肿瘤组织bFGF和VEGF表达、抑制血管新生、促进瘤细胞凋亡提高放疗敏感性。

壳聚糖/羟基磷灰石-庆大霉素缓释材料的抗菌性能研究及AFM观察

制备壳聚糖/羟基磷灰石-庆大霉素(CS/HA-G)缓释材料,评价其抗菌性能在骨髓炎的治疗中的应用前景;并从微观角度初步探讨药物对大肠杆菌的作用机制。对CS/HA-G缓释材料进行体外缓释行为研究及抗菌实验;并以原子力显微镜(AFM)观察大肠杆菌在药物作用前后表面形态结构的变化。CS/HA-G对大肠杆菌的抑菌效果显著,维持有效释药时间长达30d以上。AFM观察显示药物作用于大肠杆菌后菌体高度和表面平均粗糙度(Ra)均下降,有内容物渗漏。CS/HA是一种理想的庆大霉素载体材料。CS/HA-G的缓释作用和缓释规律显示出该材料在大肠杆菌引发的骨髓炎的防治中具有极大的临床应用潜能。

潲水油氧化-吸附法脱色研究

基于潲水油理化特征,研究了双氧水、白土对潲水油脱色后的吸收光谱,建立了光谱法监控对潲水油进行双氧水氧化和活性白土吸附脱色的新方法。研究表明,25.0 g潲水油中加入3.0mL双氧水、再用1.25 g或2.50 g白土脱色时,脱色效率分别为88.1%和92.0%,若是将其放置1周,则脱色率分别可以提高到96.9%和98.1%。脱色处理后的潲水油无不良气味,可以作为洗涤产品中添加的皂化物的工业原料,具有可观的经济效益、环境效益和社会效益。

nm23-H1基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的:研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法:构建nm23-H1基因的真核表达载体,转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中,通过G418筛选出稳定表达克隆,RT-PCR及免疫组化检测nm23-H1在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-H1基因对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期,原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果:转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-H1基因,抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-H1基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少,停滞于G0期。转染nm23-H1基因后细胞边缘的伪足减少。结论:nm23-H1基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖,可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。

通痹灵总生物碱抑制关节破坏的细胞免疫作用机制

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗组和通痹灵总生物碱(以马钱子碱和士的宁为主的生物碱,TBL总碱)治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后35d,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生的情况;MTT法检测TBL总碱对Jurkat细胞增殖的影响;Western blot检测TBL总碱对Jurkat细胞ERK1/2磷酸化的影响。结果:造模成功后,MTX和TBL总碱给药35d都可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与造模加生理盐水组有统计学差异(P<0.01);TBL总碱可明显抑制CIA淋巴细胞、浆细胞的浸润和滑膜增生(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生。TBL总碱可显著抑制T细胞增殖以及ERK1/2的磷酸化。结论:TBL总碱具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过干预T细胞MAPK信号转导,抑制T细胞的活化和增殖来实现的,为TBL总碱治疗RA提供了实验依据。

TGF-β_1及其受体在PCOS大鼠卵巢中的表达及作用

目的探讨TGF-β1及其受体TGF-β1受体-Ⅰ(TGF-betatypeⅠreceptors,TβRⅠ)和受体-Ⅱ(TGF-betatypeⅡreceptors,TβRⅡ)mRNA在PCOS大鼠卵巢中的表达及作用。方法采用皮下注射脱氢表雄酮的方法建立PCOS动物模型,运用免疫组化方法检测卵巢中TGF-β1蛋白表达,并进行图像分析;采用RT-PCR方法检测TGF-β1受体TβRⅠ和TβRⅡmRNA在卵巢中的表达。结果与对照组相比,TGF-β1在PCOS各阶段卵泡卵母细胞、颗粒细胞的表达强度差异无统计学意义(P>0.05)。而在PCOS间质细胞、窦状卵泡膜细胞的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。凝胶图像分析显示TβRⅠ和TβRⅡmRNA相对含量显著高于对照组(P<0.05)。结论PCOS组TGF-β1表达异常是导致卵巢间质纤维化,包膜增厚的主要原因;TGF-β1也参与PCOS卵泡发育、闭锁的调控。PCOS大鼠TGF-β受体表达上调,是使TGF-β致纤维化功能增强的原因之一。

硒化麒麟菜多糖对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

【目的】探讨硒化麒麟菜多糖在体外对肝癌HepG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。【方法】处于生长期的人肝癌细胞HepG2.2.15分为3组,对照组、硒化麒麟菜多糖组和顺氨氯铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况。【结果】硒化麒麟菜多糖在体外可抑制肿瘤细胞的增殖,最高抑制率为97.2%,并且有时间依赖性。硒化麒麟菜多糖可阻滞肝癌HepG2.2.15细胞的生长使之停留在S和G2/M期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖,同时通过促进Fas表达14.4%±0.11%,明显高于对照组1.5%±0.01%(P<0.05),从而诱导HepG2.2.15细胞凋亡。【结论】硒化麒麟菜多糖可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,从而对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。

外伤性视神经损伤后视神经及视网膜形态的动态观察

目的 :了解外伤性视神经损伤后的病理变化、溃变特点与时相间的关系。方法 :参照Allen脊髓损伤法 ,造成视神经眶尖段间接 6 0 0gcm力冲击、挤压伤。伤后对视神经和视网膜行形态学动态观察。结果 :①伤后 4 8h ,视神经轻度肿胀和空泡反应 ;1周时损伤处视神经出现溃变 ,神经胶质细胞增生 ,视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells,RGCs)形态改变不明显 ;2周时神经纤维轴束间空泡样改变 ,局灶性坏死 ,RGCs核固缩和细胞数量减少。术后 3月 ,视神经损伤部位直径缩小 ,形成胶质疤痕 ,RGCs数量明显减少 ,核固缩细胞增多。②RGCs数量于术后 4 8h、1周、2周、1月和 3月分别比正常对照组低 3 35 %、13 2 3%、19 74 %、2 3 2 0 %、2 9 2 8%。③视网膜细胞在 4 8h内出现凋亡。结论 :本实验模型可造成明确的视神经和视网膜损伤 ,神经元的损伤程度从节细胞、中间神经元、感光细胞的次序依次递减。视网膜和视神经损伤的严重程度与时间呈相关性。RGCs数量在 4 8h至 1周时下降速率最快。

岗梅根水煎液对束缚应激条件下非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激的影响

目的观察岗梅根水煎液对束缚应激条件下非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激的影响。方法将48只Wistar雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、岗梅根水煎液组,建立高脂饮食性脂肪肝模型,并给予束缚应激负荷。检测各组大鼠血脂、肝脏指数、T-AOC、GST、MDA等指标的变化。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均显著升高(P<0.01),HDL-C含量降低(P<0.01),肝指数升高(P<0.05)。与模型对照组比较,辛伐他汀组、岗梅根水煎液组TC、TG、LDL-C含量均有不同程度的降低(P<0.01或P<0.05),HDL-C、T-AOC、GST均有不同程度的升高(P<0.01或P<0.05)。与辛伐他汀组比较,岗梅根水煎液组TC含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。结论岗梅根水煎液对束缚应激条件下非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激有一定干预作用。

ES细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究

探讨了肝细胞在胚胎干细胞 (EScell)体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法 .利用TGF ,bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导 .利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫细胞化学 (ICC)和放射免疫法 (RIA)动态检测肝细胞特异性基因和蛋白AFP ,ALB ,G6P ,TAT ,CK8,CK18等在培养体系中的表达 ,并测定肝细胞的尿素合成功能 ,最后测定肝细胞分化率 .结果 ,肝细胞特异基因AFP ,ALB ,G6P和TAT最早分别于第 3、 9、 11、 13天表达 ,肝细胞特异蛋白AFP ,CK8,CK18和ALB最早分别于第 7、 9、 9和 11天开始表达 .第 12天开始检测到尿素出现 ,浓度为 8 3μmol/L ,并随培养时间延长而浓度逐渐增加 .最后 ,测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为 32 % ,对照组肝细胞分化率为 8% .说明肝细胞可以在ES细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化 ,bFGF、HGF、OSM等可以明显提高细胞分化率和成熟度 ,有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望 .

鼻息肉组织T淋巴细胞IFN-γ、IL-4的表达

目的 :通过检测γ -干扰素 (IFN -γ)、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )两种细胞因子在鼻息肉组织T淋巴细胞(CD3+ 细胞 )中的表达 ,探讨鼻息肉的可能发病机制。方法 :采用流式细胞术检测 2 1例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T淋巴细胞IFN -γ、IL - 4的分泌情况 ,并与正常人下鼻甲粘膜及外周血进行比较。结果 :在正常人下鼻甲粘膜中几乎未见CD3+ IL - 4 + 和CD3+ IFN -γ+ 细胞。鼻息肉组织中有大量T淋巴细胞浸润 [(39.6 5± 2 0 8) % ],IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (13 6 0 6± 0 6 4 4 ) %、(32 938± 2 4 77) % ;患者外周血中IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (6 6 86±0 2 0 4 ) %、(6 4 312± 1 6 11) % ,与之相比 ,病人鼻息肉组织中IL - 4的含量显著高于外周血 (P <0 0 5 )而IFN -γ的含量明显低于外周血 (P <0 0 5 )。正常人外周血IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (0 5 6 0± 0 0 5 1) % ,(0 2 4 6± 0 0 2 0 ) % ,与之相比 ,病人外周血中IL - 4、IFN -γ的含量均显著高于正常人 (P <0 0 5 )。结论 :鼻息肉患者鼻粘膜局部免疫异常 ,Th细胞因子分泌优势发生改变 ,造成鼻腔粘膜“微环境”改变 ,可能与鼻息肉的形成有密切关系。

兔角膜缘上皮细胞在体外壳聚糖共混膜上的培养及生物学鉴定

目的:探讨壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜作为兔角膜缘上皮细胞体外培养载体的可行性。方法:采用消化培养法,用特殊培养液在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上培养兔角膜缘上皮细胞,第7d应用免疫组化方法对培养细胞作生物学鉴别并在扫描电子显微镜下观察细胞形态。结果:上皮细胞AE1/AE5单克隆抗体免疫组化阳性,培养第7d的上皮细胞有多种细胞形态,细胞胞体饱满,相互通过突起连接,表面可见微绒毛。结论:兔角膜缘上皮细胞可在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上生长,并具有分裂增殖能力。

通痹灵总碱对大鼠机体细胞免疫的调节作用

[目的]研究通痹灵(TBL)的有效部位总生物碱对细胞增殖及T淋巴细胞转铁蛋白受体(CD71)的影响,探讨通痹灵调节细胞免疫的作用机理。[方法]培养大鼠淋巴细胞,刀豆蛋白(ConA)刺激72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测通痹灵总碱对淋巴细胞增殖的影响;佛波醇酯(PDB)或ConA刺激48 h,流式细胞术检测T淋巴细胞CD71的表达率。[结果]不同浓度的TBL总碱可明显抑制ConA刺激下的淋巴细胞增殖;不同浓度的TBL总碱对PDB和ConA激活的T淋巴细胞CD71表达均有明显的下调作用,而且呈明显的量效关系,对ConA刺激下的CD71表达抑制要强于PDB。[结论]TBL总碱可抑制异常增殖的T淋巴细胞,其作用机制可能是通过抑制转铁蛋白受体来实现的。

新型可降解支架材料植入角膜的生物学反应研究

目的 探讨可降解交联剂交联乙烯基吡咯烷酮对兔角膜组织的生物学反应的影响。方法 将乙烯基吡咯烷酮植入兔角膜囊袋内 3个月 ,观察生物材料在角膜内生物学反应。结果 可降解交联剂交联乙烯基吡咯烷酮合成材料植入兔角膜囊袋 3个月 ,生物相容性良好 ,材料逐渐降解 ,材料内有胶原和角膜基质细胞长入。结论 新型可降解交联剂交联乙烯基吡咯烷酮合成材料植入后未见兔角膜有明显的炎症反应 ,材料的组织相容性好 ,可作为组织工程角膜的支架材料。

红螺菌对铅离子吸附作用的初步研究

研究了红螺菌对Pb2+的吸附情况。结果表明:红螺菌中有可能存在着某种对铅具有较高亲合性的生物活性物质,具有潜在的减少或是清除动物铅中毒饲料添加剂的开发价值。此外,还通过正交实验对红螺菌的培养,得出了光照强度、接种量、酵母量和培养温度4个因素的最适值分别为1 200lx、20%、1. 5g/L和25℃。