检测成纤维细胞生长因子生物学活性的一种新方法

9日龄来杭鸡鸡胚绒毛尿囊膜(chorfoallantoic mcmbrance, CAM)植入甲基纤维素九作为待测成分载体,于载体中加入50～100ng/10μl重组碱性成纤维细胞生长因子(rccombinant basic fibroblast growth factor, rbFGF),3天后,即可观察到rbFGF明显诱导尿囊膜血管增粗和载体周围新生毛细血管密度增加并呈辐辏状。该技术是一个能在体内检测rbFGF的生物学活性的简便适用的方法。

肠道微生物群的病理生理学进展

尽管人类是地球的主宰者，但是无论在数量或者多样性方面，地球上的微生物是主流。人体只是许许多多细菌、古生菌、病毒以及真核微生物的支架或者平台罢了。这些微生物栖息在多个人体解剖学上的壁龛里（消化道、泌尿生殖道、呼吸道和皮肤）与宿主形成共生关系，其数量大大超过人体的体细胞和生殖细胞一个或者多个数量级。

三株梭菌通过生物转化形成熊去氧胆酸的研究

用改进的薄层层析法定量测定了三株厌氧梭菌——产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)HS-10、丁酸梭菌(C.butyrium)DL-20和LQ-29形成熊去氧胆酸(UDCA)的生物转化能力,并用正交法确定了HS-10菌株的最佳转化条件。发现该菌株在含0.2mmol/L鹅去氧胆酸(CDCA)的RCM培养基中培养6—48小时内,UDCA转化率均在80%以上。而且,当CDCA的浓度高达0.8—1.0mmol/L时,其转化率仍在70%以上。此外,还初步发现未加任何营养成分的豆腐废水也可作为良好的转化培养基。本文是这两种菌能单独将CDCA转化为UDCA的首次报道。

牛大力多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

建立了热水提取、乙醇沉淀、三氟乙酸除蛋白、Sephadex G-75凝胶过滤层析法,从牛大力分离纯化得到一种水溶性多糖,命名为MSP-1。通过红外光谱和离子色谱对其结构和单糖组成进行初步分析,结果表明MSP-1主要由鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖组成。同时对牛大力水提物、醇沉物和粗多糖进行体外抗氧化活性研究,结果表明,三者的抗脂质过氧化作用和对·OH自由基和DPPH·自由基清除能力:VC>牛大力水提物>牛大力醇沉物>牛大力粗多糖,并呈量效关系。

云南省的平鳍鳅科鱼类

平鳍鳅科鱼类,在云南省曾有过零星记载。近年陈宜瑜(1978、1980a)对我国平鳍鳅科作了详尽整理,共记载有15属49种,其中云南省(包括金沙江的在内)有8属11种。作者(1980)又报道1个新种。现经进一步整理在云南省采得的标本,共有8属17种,其中包括5新种,现简要报道如下。

枯草杆菌电击法转化

高电压电击法转化枯草杆菌,以菌株BR151和pBC11质粒为材料,获得每微克DNA的1.6×10~3个转化子。此方法主要依赖于电流脉冲的两个性质:电场强度和脉冲时间RC(时间常数)。

重组碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测方法的建立

小鼠或家克经重组bFGF免疫后产生高滴度的抗血清,用此血清建立了间接ELISA检测方法,检测bFGF的灵敏度达10ng/ml.

一种快速简单的质粒DNA纯化方法

本文介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。本法对煮沸提取法进行改良后,快速提取质粒DNA粗制品,然后用国产滤纸从琼脂糖凝胶中回收纯化质粒DNA。同时对本法所提取的质粒DNA的回收率、浓度、纯度及可能的用途进行验证和讨论,证明此法简易,所得样品纯度高,可直接用于转化、酶切和基因克隆。

碱性成纤维细胞生长因子

成纤维细胞生长因子(Fibmblast Growth Factor,FGF)和其他细胞因子一样是哺乳动物和人体中一种正常的非常微量的物质,然而其生理功能却非常广泛,在临床上有重要价值。早在1940年,Trowcll和Hoffinan等就在组织提取液中发现一种能促进成纤维细胞生长的物质,但只是近十几年来,才对成纤维细胞生长因子的特性作出较为详细的研究,能促进成纤维细胞生长的因子也包括:白细胞介素(ILs),肿瘤坏死因子(TNFs),血小板衍生生长因子(PDGFs)。

弱精子症患者精子中DKKL1的表达

目的探讨精子顶体相关基因(DKKL1)在弱精子症患者精子中的表达特征及临床意义。方法收集正常男性和弱精子症患者精液,各取10μL精液用全自动计算机辅助精液分析系统(CASA)对精液进行常规分析。为了避免白细胞和生精细胞对结果的影响,剩余精液采用4个梯度的Percoll法离心分离和纯化精子。Trizol法提取精子RNA,实时荧光定量PCR从基因水平检测DKKL1基因在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异;最后采用Western blot方法从蛋白水平检测DKKL1蛋白在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异。结果精液常规分析结果显示,弱精子症和正常人两组之间的年龄、精液体积、精子浓度和正常精子形态比例均没有统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比,弱精子症组PR和PR+NP精子的比例显著降低(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组相比,DKKL1 m RNA在弱精子症患者精子中的表达量降低11.1倍。此外,Western blot结果显示,弱精子症组DKKL1蛋白的表达量与正常对照组相比,降低了2.4倍,差异具有统计学意义(P<0.01),该结果与实时荧光定量PCR结果一致。结论 DKKL1在弱精子症患者精子中的表达水平明显下降,表明其与精子运动密切相关,是导致弱精子症发生的原因之一。

蝮蛇毒联合加温对白血病细胞株的杀灭作用

应用细胞集落培养技术,定量观察浙江蝮蛇毒联合加温,对正常人骨髓细胞粒单集落形成和白血病细胞株HL60、K562、U937集落形成能力的影响。结果表明,单纯加温42℃45分钟与联合蝮蛇毒素0.001 mg/L加热42℃45分钟时,白血病细胞株集落的生存率HL60分别为18.7％与0;K562为30.7％与2.1％,两者差异比较P<0.001;U937为43.3％与37.8％P<0.05;在联合处理的条件下正常骨髓细胞集落生存率尚有50.9％。研究证实,浙江蝮蛇毒可明显地选择性增强加温对白血细胞株的杀灭作用。

二甲磺基乙烷处理生精小管体外培养模型的建立

目的建立二甲磺基乙烷(EDS)处理生精小管的体外培养模型。方法雄性SD大鼠于实验前7 d腹腔注射EDS,分离生精小管进行体外培养,分为基础处理组(加入胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠培养基添加剂ITS,即ITS组)和促黄体素(LH)处理组(加入ITS和LH,即ITS+LH组),采用Ed U标记技术检测睾丸间质干细胞增殖情况,放射免疫分析技术及3β-HSD染色检测睾酮分泌及睾丸间质干细胞的分化情况。取雄性成年小鼠睾丸并分离生精小管,分别以不同浓度的EDS处理,其后再进行分组(ITS组和ITS+LH组)处理连续培养,采用放射免疫法检测培养基上清液中睾酮的分泌情况。结果与ITS组比较,大鼠生精小管ITS+LH组睾丸间质干细胞增殖较为明显。睾酮的分泌呈现与体内睾丸间质细胞发育分化趋势一致;且该模型在LH作用下,睾酮产生量大,持续时间长,表明该模型对LH敏感。1.72 mmol/L EDS可有效杀死小鼠生精小管上的成熟睾丸间质细胞;该处理模型在经过培养后又有睾酮的产生,且ITS+LH组生精小管培养上清液中睾酮含量显著高于ITS组(P<0.01),表明EDS可以杀死成熟睾丸间质细胞,同样该模型也表现出对LH敏感。结论雄性大鼠和小鼠生精小管体外培养模型中,睾丸间质干细胞的发育分化过程与体内睾丸间质干细胞的发育分化相似,该模型是一个研究睾丸间质细胞发育分化的合适模型。

血清胸腺因子(STF)基因的合成

利用381A型DNA合成仪,合成了用于编码血清胸腺因子(STF)基因的DNA片段。该片段两端带有两个不同限制性内切酶(Sal I,BamHI)识别位点的粘性末端,中部则为以起始密码子ATG开头并以终止密码子TAG及TAA结尾的多肽(STF)编码序列。将合成STF基因克隆到单链噬菌体M13作双脱氧法定序,定序结果表明合成基因与设计预期结果相符。

HLA与妊娠高血压综合征相关的初步研究

本文对24例妊娠高血压综合征患者进行了HLA—A、B、C分型,与24例正常孕妇对照组比较,A_(33)、B_(46)、和C_2等抗原频率增高,A_(10)、A_(23)和C_7等抗原频率降低,经统计分析,变化无显著性意义(P>0.05)。本文结果提示:妊高征的发生可能与HLA无明显关系。

极谱氧传感仪快速测定超氧化物歧化酶的实验研究

超氧化物歧化酶 (简称SOD)是机体内超氧阴离子自由基 (O2 ·- )的清除剂 ,广泛存在于生物界 ,其检测方法较多。为探索一种快速检测SOD的新方法 ,我们自行设计、加工、组装成了极谱氧传感器SOD检测仪 ,并建立了相应的检测方法。用该检测仪测定SOD ,具有快速、简便、经济等优点。

蛤蚧产卵和孵化的研究

本文报道养殖蛤蚧的产卵行为、卵的形态、两种卵的孵化、幼蛤蚧出壳过程及其形态等的观察研究。

棒状杆菌亮氨酸操縱子在大肠杆菌中的克隆和表达

以质粒pTZ22为载体,用HindШ限制酶切割谷氨酸棒状杆菌染色体DNA进行克隆。分离到带有亮氨酸操纵子的4.5kb片段。用Southern切口移位分子杂交检测,证明在4.5kb的片段中既包含有leuB基因,而且对leuA基因也表现同源性。

应用聚合酶链反应与斑点印迹杂交产前诊断β地中海贫血

应用聚合酶链反应(PCR)体外基因放大,^(35)S 标记β-珠蛋白基因探针与 DNA分子杂交斑点印迹新方法,对携带者进行了基因分析,对胎儿进行了产前诊断检测。对3对夫妇的检验显示,他们分别是41-42,-28或17突变基因携带者,2例胎儿正常,1例为杂合子。

诱导型衰老细胞模型的建立及Klotho启动子截短型突变体的构建和活性检测

目的:建立诱导型衰老细胞模型并检测抗衰老相关的Klotho基因启动子的不同截短型突变体的活性,为下一步研究奠定基础.方法:原代的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)经过流式细胞术分离鉴定后,通过设置不同过氧化氢的浓度,按时间梯度摸索诱导原代HUVEC细胞衰老的条件并最终通过SA-β-gal染色及定量PCR技术来确定其诱导条件.以全长的Klotho启动子为模版,通过PCR的方法,获得不同长度的Klotho启动子截短型突变体,并通过双萤光素酶报告基因系统检测试剂盒检测不同的启动子截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度.结果:培养基中过氧化氢浓度为600μM,处理96 h后,成功构建了诱导型衰老细胞模型;通过PCR的方法成功构建了长度分别为1 711 bp、1 262 bp、785 bp和735 bp的4个长度截短型突变体,并发现735 bp的截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异.结论:成功建立了诱导型衰老细胞模型,并成功构建了Klotho基因的启动子截短型突变体,检测和发现这些突变子在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异,为下一步治疗衰老相关疾病奠定了良好的工作基础.