1,25-二羟维生素D_3对T淋巴细胞的免疫调节作用

目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对佐剂性关节炎(AA)小鼠免疫功能的影响,探讨1,25(OH)2D3对T淋巴细胞介导的细胞免疫的调节作用及可能机制。方法将小鼠随机分成3组,每组6只,分别命名为正常组、模型组和干预组。除正常组外,每只小鼠右足跖部皮下注射完全弗氏佐剂诱导AA模型,并于初次注射后1周再次注射相同剂量的完全弗氏佐剂,强化免疫反应。从第2次注射后当天,干预组腹腔注射1,25(OH)2D3,1次/d,100 ng/次,同时其余两组给予同等剂量生理盐水,按照此方法,隔日给药1次,连续2周。观察各组小鼠脾指数、胸腺指数,脾淋巴细胞增殖及外周血T细胞亚群的情况。结果 1,25(OH)2D3能降低脾和胸腺重量指数,抑制脾淋巴细胞增殖,模型组与干预组T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值分别为2.9±1.1和2.2±0.5,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可通过调节T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比例来改善AA模型小鼠免疫功能紊乱,进而抑制病情的进展。

雷帕霉素对缺氧损伤视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

背景研究表明雷帕霉素（Rapa）可延缓人大脑细胞的衰老，改善大鼠局灶性脑缺血时脑组织代谢活动，对中枢神经细胞具有保护作用。视神经和视网膜神经节细胞（RGCs）属于中枢神经组织，但Rapa是否可对外伤后RGCs具有保护作用尚不清楚。目的探讨Rapa对氯化钴（CoCl2）诱导的缺氧损伤大鼠RGCs的保护作用，并探讨其可能的作用机制，为外伤性视神经病变（TON）的治疗提供新的思路。方法用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养大鼠RGC-5细胞，倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化。将细胞分为正常对照组及50、100、200、400和600 μmol/L CoCl2组，于细胞培养后24 h和48 h采用细胞生长分析系统检测各组细胞存活率。采用200 μmol/L CoCl2处理细胞以诱导建立RGC-5细胞缺氧损伤模型，然后将培养的细胞分为正常对照组、模型对照组和不同浓度Rapa干预组，Rapa干预组在缺氧模型细胞培养液中添加Rapa使其终浓度分别为0.1、0.4、1.6和6.4 μmol/L，处理细胞24 h。采用细胞生长分析系统检测各组细胞的存活率；采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用JC-1染色技术检测各组细胞线粒体跨膜电位（ΔΨm）的变化；采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞促凋亡基因bax mRNA的相对表达量。结果200 μmol/L CoCl2作用RGC-5细胞后24 h细胞相对存活率为（70.51±5.00）%，与正常对照组的（100.00±3.29）%比较，差异有统计学意义（P〈0.01），成功构建细胞缺氧损伤模型。正常对照组、模型对照组和0.1、0.4、1.6、6.4 μmol/L Rapa干预组细胞存活率的总体比较差异有统计学意义（F＝167.904，P＝0.000），其中0.1 μmol/L Rapa干预组细胞存活率明显高于模型对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。正常对照组、模型对照组和0.1 μmol/L Rapa干预组细胞凋亡率分别为25.4%、37.7%和25.3%，细胞线粒体膜电位分别下降了0.4%、6.3%和1.4%。正常对照组、模型对照组和0.1 μmol/L Rapa干预组细胞中bax mRNA相对表达量分别为1.01±0.21、3.52±0.30和1.66±0.20，总体比较差异有统计学意义（F＝88.034，P＝0.000），其中模型对照组细胞中bax mRNA相对表达量均明显高于正常对照组和0.1 μmol/L Rapa干预组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论Rapa可对CoCl2诱导的缺氧RGC-5细胞发挥保护作用，其主要作用机制是下调细胞中促凋亡分子bax的表达，并提高RGC-5细胞存活率。

婴幼儿鼻泪管螺旋CT三维重建及相关解剖学数据测量

目的应用螺旋CT三维重建技术探讨婴幼儿鼻泪管的解剖学特征。方法应用螺旋CT对27例(54眼)婴幼儿鼻泪管三维重建后,测量骨性鼻泪管长度、鼻泪管长轴与正中矢状切面、水平切面、冠状切面投影的夹角等解剖学数据,同时测量15例(30眼)成人骨性鼻泪管的相应解剖学数据作对照,应用SPSS13.0软件进行统计学处理。结果婴幼儿骨性鼻泪管长度为(10.06±1.76)mm,成人骨性鼻泪管长度为(11.51±1.54)mm,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。婴幼儿鼻泪管长轴与正中矢状切面、水平切面、冠状切面投影的夹角分别为7.96°±1.62°、73.24°±6.75°、12.31°±2.03°;成人鼻泪管长轴与正中矢状切面、水平切面、冠状切面投影的夹角分别为8.08°±0.63°、72.69°±3.85°、12.09°±1.21°,婴幼儿和成人鼻泪管长轴与3个切面投影间夹角之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论螺旋CT三维重建技术是测量婴幼儿鼻泪管解剖学数据的一种有效方法,所得解剖学数据对婴幼儿泪道疾病的手术治疗有重要的指导作用。

共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

异种全厚板层角膜和前板层角膜植片板层移植术后拆线时间探讨

目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移植组。术眼为右眼,植片直径为9.0mm,植床直径为8.0mm。A、C2组拆线时间为10d(A、C2组又合为G组),B、D2组拆线时间为1个月(B、D2组又合为H组)。观察时间为3个月。结果用两因素方差分析法分析3个月时的炎性反应指数:(1)角膜植片M组(2.560±2.065)与N组(5.250±2.887)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即M组炎性反应较轻;(2)拆线时间G组(2.560±2.128)与H组(5.250±2.840)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即G组炎性反应较轻;(3)角膜植片差异联合拆线时间差异:F=7.017,P=0.013<0.05,差异有统计学意义,即角膜植片差异和拆线时间之间存在交互影响角膜移植炎性反应作用。结论角膜植片差异和拆线时间差异均存在影响异种角膜移植炎性反应的作用,并且二者存在交互作用。

兔角膜重度碱烧伤后异种猫前板层角膜移植重建角膜眼表

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,细胞连接混乱、消失。结论用异种猫新鲜前板层材料对重度兔碱烧伤角膜进行板层移植手术治疗在一定程度上可减轻伤后炎症反应,防止严重并发症的发生,维持眼表结构并可达到一定的光学治疗效果。

体外细胞组织重建中共培养技术的应用

细胞共培养体系在维持细胞基本结构和性状的基础上,通过两种或多种细胞组织的相互作用,使体内外环境尽可能相吻合,弥补了单层细胞培养的缺陷,有利于构建更加接近生理状态的重建体外细胞组织,被广泛应用于现代细胞研究,成为角膜、牙周、软骨、心血管以及神经细胞组织等体外构建的重要技术应用。在干细胞研究中,多孔膜两侧直接接触共培养日益受到重视,三维细胞共培养将是未来发展的方向。

脱细胞角膜材料的生物相容性研究

目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组:A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组。用扫描电镜观察术后不同时期术眼角膜的组织病理学改变,抽取兔血测定CD4+/CD8+T细胞百分比。结果术后1个月3个组间角膜植片炎症反应指数组间比较差异均无统计学意义;2个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个组间术后同期7、15、30d兔外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞活化率差异均无统计学意义(P>0.05)。组织切片显示术后3个月内,B、C两组角膜植片炎症反应轻,植片内皮细胞吸收,组织结构基本正常。A组角膜植片炎症反应显著,结构较紊乱,新生血管增生。扫描电镜可见B、C2组角膜上皮结构基本正常,细胞连接较好。A组扫描电镜可见有上皮缺损。结论脱细胞处理的异种猫角膜移植后生物相容性较新鲜角膜差,免疫反应无显著差异。

CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

一青光眼大家系的致病基因筛查研究

目的:为了了解青光眼的可能致病基因,我们对一青光眼大家系致病基因进行了筛查研究。方法:采集外周血和绘制家系图,提取患者全基因组DNA,PCR扩增目的基因MYOC,CYP1B1,OPTN,WDR36的外显子并鉴定,测序后进行数据分析,与数据库中相应参考序列进行比对。通过基于目标区域捕获技术的眼科基因定制芯片对家系样本进行了测序分析,希望能鉴定该家系的致病基因或发现新的致病位点。结果:对该家系进行已知青光眼候选基因MYOC,CYP1B1,WDR36,OPTN测序分析及目标区域捕获技术的眼科基因定制芯片分析,并经家系内其他患者及正常成员测序验证,排除了已知青光眼候选基因突变,仅发现了5个多态性位点。结论:青光眼属多基因遗传疾病,已知致病基因并不能覆盖所有青光眼,推测可能存在某些我们目前尚不知道的青光眼致病基因,本青光眼家系的致病基因有待进一步研究。

转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶构建三维角膜基质

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显微镜下每日观察细胞生长情况、Alamar-Blue试剂检测细胞增生、免疫荧光法检测凝胶内细胞波形蛋白、检测透光度、酶消化法检测胶原凝胶抗消化能力。结果实验组细胞胶原凝胶内附着和生长优于对照组,细胞在凝胶内呈树枝状生长。2组细胞均随培养时间延长明显增生(P=0.000)。共焦显微镜下见2组细胞胞浆波形蛋白均阳性表达,实验组细胞伪足更丰富。实验组透光度稍差于对照组。实验组抵抗胶原酶消化的能力显著增强。结论酶交联的胶原凝胶对角膜基质细胞无毒性作用,重构的基质层结构更加稳定,有利于组织工程角膜基质层的构建。

一种培养原代小鼠角膜基质细胞的新方法

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化学染色Vimentin表型和RT-PCR检测Vimentin、Lumican和CK12基因表达对培养的细胞进行鉴别。结果倒置显微镜下可见小鼠角膜基质细胞呈三角形和树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接;免疫荧光化学鉴定小鼠角膜基质细胞表达Vimentin阳性;RT-PCR显示Vimentin和Lumican基因表达阳性,CK12表达阴性。结论 Dispase酶消化法联合组织块贴壁法培养可获得具有角膜基质细胞特性的细胞,本方法为体外获得单纯小鼠角膜基质细胞提供了简单高效的途径。

视网膜中央动静脉阻塞合并贫血一例

患者，女，38岁，左眼视力下降1d就诊。3d前头部不慎撞至桌角，当时神志清、无视物模糊，未曾处理。入院前1d自觉左眼视力明显下降，无疼痛、虹视、恶心、呕吐等症状，次日晨起后左眼视物不见。患者有贫血病史30年，曾行胆囊切除术和部分肝切除术，既往有全身多处骨折史、肾结石病史，无高血压、糖尿病病史，否认眼部外伤史。眼部体征：视力右眼1．0，

昼夜节律颠倒对小鼠角膜上皮创伤修复的影响

目的探究昼夜节律颠倒对角膜上皮创伤修复的影响。方法选取6~8周龄C57BL/6雄性小鼠90只,按照随机数字表法分为昼夜节律正常(LD)组和昼夜节律颠倒(DL)组。置于昼夜节律箱中饲养12d,在小鼠角膜中央标记直径为2mm的圆形区域,用高尔夫样刀刮除标记区域上皮层,分别使用荧光素钠、苏木精-伊红染色观察并记录角膜再上皮化过程。使用DAPI、FITC标记抗鼠Ly6G抗体和PE标记抗鼠γδTCR抗体进行免疫荧光染色,每隔6h观察角膜创伤后细胞分裂、中性粒细胞和γδT细胞数量的动态变化,直至42h。结果角膜上皮创伤后0、6、12、18和24hLD组角膜上皮缺损面积百分比分别为(100.000±0.000)%、(37.677±5.243)%、(14.959±1.739)%和(0.000±0.000)%,DL组角膜上皮缺损面积百分比分别为(100.000±0.000)%、(10.967±1.065)%、(1.985±0.106)%和(0.000±0.000)%,总体比较差异有统计学意义(F=213.718,P=0.000)。角膜上皮创伤前,DL组和LD组角膜上皮层厚度分别为(33.983±1.074)μm和(33.993±0.904)μm,差异无统计学意义(P>0.05);角膜上皮损伤后24h,DL组角膜上皮厚度为(19.473±0.856)μm,明显大于LD组(17.485±0.718)μm,差异有统计学意义(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示,创伤24h后2个组小鼠角膜上皮细胞皆排列疏松、紊乱、形态不规则。LD组角膜上皮主要为基底细胞,DL组除了基底细胞外,还有少量扁平细胞。角膜上皮创伤后LD组和DL组上皮分裂细胞数量、中性粒细胞数量和γδT细胞数量总体比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论昼夜节律颠倒可通过促进角膜上皮分裂细胞、中性粒细胞和γδT细胞募集高峰期提前,进而调节角膜上皮创伤修复过程。

兔角膜内皮细胞球形培养的活性和细胞表型

背景 组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的 建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. 方法 酶消化法分离和培养兔CECs并进行传代,经低黏附振动培养法产生兔CECs球,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态;采用扫描电子显微镜观察CECs球的表面超微结构;用吖啶橙染色法鉴定CECs球中细胞的活性;采用CCK-8试剂盒检测细胞的吸光度（A450）值,判断细胞的增生情况.将CECs球接种到6孔细胞培养板贴壁培养1周,球形培养的细胞为球形培养组,常规培养的细胞为常规培养组.采用免疫荧光法检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）和Na＋/K＋-ATP酶在细胞中的表达.结果 经球形培养的CECs呈聚集生长,培养1周细胞形态为六角形或多边形,融合成单层,呈铺路石状排列;扫描电子显微镜下可见兔CECs球体周围有细胞爬出,未长散的细胞球中细胞与细胞之间结合紧密,球体表面凹凸不平.吖啶橙染色表明,细胞球中90％细胞呈绿色荧光;球形培养组细胞平均A450值为1.524±0.013,常规培养组细胞平均A450值为1.265±0.021,球形培养组细胞增生值明显增加,2个组间差异有统计学意义（t=-3.436,P=0.010）.免疫荧光检测表明,培养的细胞中ZO-1和Na＋/K＋-ATP酶阳性细胞膜对FITC呈绿色荧光,细胞核DAPI染色呈蓝色荧光.结论 CECs的3D球形培养方法培养的细胞可保持细胞的高活性、高增生能力和细胞表型,为构建组织工程角膜内皮及细胞疗法提供了更好的角膜内皮种子细朐.

猫角膜内皮中央与周围部端粒酶活性比较及其与增生潜能关系的研究

目的比较不同年龄猫角膜内皮周围部和中央部的增生潜能。方法实验所用眼球取自不同年龄猫进行分组:幼年猫组(<6个月龄)和成年猫组(>18个月龄)各7只,每只猫均取一只眼球作中央部和外周部的分离,其角膜用9.5mm直径环钻分离巩膜组织,6.0mm直径环钻分离中央部和周围部,然后完整撕取带有角膜内皮细胞的后弹力层,根据每眼角膜取材部位不同分为周围部组和中央部组。用实时荧光定量PCR检测端粒酶活性,探讨角膜内皮中央部与周围部增生潜能是否存在差异。结果经实时荧光定量PCR检测猫角膜内皮周围部组和中央部组端粒酶表达,组间比较差异有显著统计学意义(F=58.510,P=0.000),周围部组高于中央部组,中央部组仅有微量表达。成年猫组和幼年猫组比较差异无统计学意义(F=6.210,P=0.028),即端粒酶活性表达不受年龄因素影响。结论猫角膜内皮周围部具有增生潜能,且其增生能力不受年龄因素影响。

兔同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的实验研究

目的:本研究旨在探索同种异体角膜缘移植免疫排斥反应规律并观察环孢霉素A(CsA)滴眼液的免疫抑制作用。方法:32只新西兰白兔随机分成实验组和CsA对照组,建立右眼角膜缘缺陷症动物模型,1月后实施同种异体角膜缘移植术,术后分别予生理盐水及1%CsA眼液滴眼并观察4周。术前1天及术后1～8周动态监测外周血T淋巴细胞上CD25的表达;分别取术后第4、8及10周的角膜缘植片观测淋巴细胞浸润及T淋巴细胞上CD25的表达。结果:实验组术后第1周外周血表达CD25的T淋巴细胞数就有增高,第3周已达到高峰,第5周开始缓慢下降。CsA组角膜缘植片中浸润的淋巴细胞及表达CD25的T淋巴细胞数目显著低于实验组。结论:同种异体角膜缘移植术后排斥反应的发生与表达CD25的T淋巴细胞数目密切相关;CsA眼液可抑制外周血及植片中T淋巴细胞上CD25的表达,从而抑制排斥反应发生。

快速精确获取小鼠角膜神经三维图像及其参数的技术方案研究

目的研究快速、精确获取小鼠角膜神经三维(3D)图像及其参数的技术方案。方法选取SPF级雌性C57BL/6小鼠4只,吸入过量乙醚麻醉后使小鼠安乐死,立即在解剖显微镜下获取具有完整角膜缘的角膜4个,经过常规固定、透膜和抗β-Ⅲ微管蛋白荧光抗体标记后整铺片处理。在高分辨率去卷积显微镜下采用科学互补性金属氧化物半导体探测器捕获图像,通过显微镜系统自携带图像处理软件对图像进行3D去卷积运算,Z轴数据平面投影以及自动拼接处理得到完整的角膜神经纤维3D图像。采用交互式显微图像分析软件Imaris的丝状追踪模块中的自动检测模式获得不同区域的角膜神经密度,采用自动路径模式手动指定计算起始点到终止点的神经纤维长度。结果在去卷积显微镜60倍油镜下,可以观察到角膜缘处呈密集网络状的基质层神经纤维在角膜缘附近进入前弹力层,并发出密集的分枝,形成基底下神经丛。这些神经丛向角膜中心伸展形成密集的神经网络样结构,在角膜顶点汇聚成漩涡状结构。少部分神经纤维丛垂直进入上皮层,并发出许多微小的神经末梢分枝。采用Imaris软件丝状物追踪模块中的自动检测模式自动统计,发现角膜神经末梢密度从角膜缘的(2488.88±282.84)μm/μm^(2)逐渐增多至角膜中央的(5766.66±298.55)μm/μm^(2);角膜基质神经纤维密度从角膜缘的(40.99±0.99)μm/μm^(2)递减至角膜中央的(34.57±1.28)μm/μm^(2)。通过自动路径模式手动测量发现,角膜缘处基质层神经纤维进入前弹力层约151μm处开始分枝形成基底下神经丛。结论去卷积显微镜系统可以获得整个角膜神经纤维的3D分布,Imaris图像分析软件可以自动、快速统计待测区域角膜神经纤维的不同参数。