舞蹈病一家系临床分析及基因诊断

目的从分子水平探讨Huntington舞蹈病(HD)的致病突变,为该家系的基因诊断和遗传咨询提供科学依据。方法对该病进行家系调查,应用巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳技术检测患者、HD症前高风险成员、正常人(CAG)n片段的长度,进行基因诊断。结果该家系符合常染色体显性遗传病特征,患者DNA电泳显示2条扩增区带,正常人显示1条扩增区带。结论舞蹈病为常染色体性遗传病,患者相关基因分端(CAG)n重复序列存在异常扩增。

Proteus综合征临床特征及病因分析

目的分析Proteus综合征临床特征及病因,有利于本病的临床诊断。方法体格检查、X线检查,文献复习。结果左腿比右腿略短,左腿、左足及臀部皮肤布满不规则红褐色斑块。X线显示:左侧股骨比右侧缩短,左足跖骨和趾骨增粗且非骨性并连。结论 Proteus综合征临床特征及病因分析对其早期诊断具有重要价值。

丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在健康人和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的差异表达

目的分析丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平,探讨该蛋白检测在系统性红斑狼疮病情判断中的可能应用。方法实验分为3组:SLE稳定组、SLE活动组和健康对照组,每组6例,分别收集其外周血单个核细胞,用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术对丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白进行鉴定和相对定量分析,用Western blot技术对该蛋白的表达水平进行较大样本的独立验证。结果基于质谱分析的蛋白组学结果表明,丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮活动期患者外周血单个核细胞中表达显著下调(与正常人的相对比值为0.2906),且该蛋白的低表达为Western blot实验进一步证实。临床资料分析表明,该蛋白的表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数呈负相关(r=-0.607,P<0.05)。结论丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白可能参与SLE的发病,该蛋白有望作为系统性红斑狼疮的活动阶段特异性标志物。

Turner综合征胎儿超声诊断价值的探讨

目的探讨超声检查对Turner综合征胎儿诊断的价值。方法对我院13年来经染色体核型分析确诊的28例Turner综合征胎儿超声影像资料进行回顾性分析,评估产前超声检查对该综合征的诊断价值。结果 28例Turner综合征胎儿有25例(89%)超声异常,其中,两种及以上超声指标异常的23例(82%)、淋巴水囊瘤23例(82%)、胎儿水肿14例(50%)、主动脉狭窄8例(29%)。结论超声检查可发现Turner综合征胎儿异常,结合染色体核型分析,对于提高Turner综合征胎儿的产前诊断,降低该患儿出生率具有重要意义。

ChIP-seq比较分析人体心脏和脾脏的H3K9三甲基化差异

目的分析人体器官心脏和脾脏的H3K9me3的全基因图谱,以期发现H3K9三甲基化的修饰与组织特异性的表达、功能和发育具有相关性。方法通过染色质免疫共沉淀的方法获取各标本DNA,通过q PCR验证ChIP结果,然后构建ChIP Sequencing文库,与目的基因组序列比对,获取比对Reads,接着进行全基因组的Peak分析,GO功能富集分析peak相关基因的生物学功能。结果心脏和脾脏间有169个基因有显著地H3K9me3差异,其中心脏中H3K9me3的基因中有64个特殊基因,脾脏中H3K9me3的基因中有87个特殊基因。从这些基因中,挑选出8个表现H3K9me3明显的基因,然后再从这8个基因中挑选出两个心脏和脾脏间表现H3K9me3差异最明显的基因,分别是PTPN3和RBMS。结论 H3K9me3差异可作为一个潜在的生物标志物或是表观遗传疾病的治疗靶点。

纳米免疫磁珠富集和检测非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞的临床意义

目的探讨利用自主研发的肺癌细胞富集检测试剂盒检测非小细胞肺癌(NSCLc)患者循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床价值。方法采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测4组标本(A组:Ⅰ期NSCLC组,18例;B组:Ⅱ～Ⅳ期NSCLC组,33例;C组:肺部良性病变组,20例;D组:健康志愿者组,20例)外周血中的肿瘤细胞;同时,采用单纯免疫细胞化学(ICC)法及巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞角蛋白19(CK19 mRNA)、肺特异性X蛋白(LUNX mRNA)的表达作对照。结果采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测,A、B、C、D组患者的CK阳性细胞检出率分别为33.3%、60.6%、0%和0%。采用巢式RT-PCR方法检测,A、B、C、D组患者CK19 mRNA表达的阳性率分别为38.9%、63.6%、20.0%和0%,A、B、C、D组患者LUNX mRNA表达的阳性率分别为44.4%、69.7%、10.0%和0%。采用单纯ICC法检测,4组患者的CTCs检出率均为0%。肺癌细胞富集检测试剂盒与单纯ICC法检测比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌细胞富集检测试剂盒与巢式RT-PCR方法检测比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与B、C、D组患者CK阳性细胞的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);阳性率与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.05)。结论开发的肺癌细胞富集检测试剂盒是检测早期NSCLC患者CTCs的敏感方法,有助于发现隐形微转移、重新确定临床分期及指导患者术后的个体化治疗。

定量蛋白质组学技术构建系统性红斑狼疮疾病的蛋白质组差异表达图谱

目的:应用定量蛋白质组学技术对系统性红斑狼疮(SLE)病人外周血单个核细胞中的"全组"蛋白进行鉴定和定量分析,获得SLE的蛋白质组差异表达图谱。方法:利用基于四重相对和绝对定量的等量异位标签结合多维液相色谱-串联质谱分析SLE稳定期和活动期病人以及类风湿关节炎病人和健康人的外周血单个核细胞总蛋白,用肽质量指纹谱经数据库检索鉴定蛋白质,并比较这些蛋白的表达差异。结果:共鉴定了400多个蛋白质。其中,与健康对照组相比,SLE稳定组和SLE活动组共发现2倍以上表达差异的蛋白质44个,上调的9个,下调的35个;与类风湿关节炎疾病组相比,SLE稳定组和SLE活动组2倍以上表达差异的蛋白共有52个,上调的19个,下调的33个;SLE活动组与SLE稳定组相比,表达上调和下调的蛋白分别为17个和13个。结论:定量蛋白质组学技术可有效地用于人外周血单个核细胞蛋白鉴定和相对定量;采用该技术获得了SLE病人外周血单个核细胞的蛋白质组差异表达图谱;深入研究这些蛋白的分子机制将有助于进一步阐明SLE的发病机制,为SLE的诊断和治疗提供新途径。

全基因组外显子测序捕获黏多糖贮积症Ⅶ型的致病基因GUSB

目的鉴定黏多糖贮积症Ⅶ型患者的致病基因,为产前诊断提供新的方法。方法应用全基因外显子组技术捕获该患者致病基因,结合现代生物信息学方法,采用Sanger测序验证基因突变位点是否存在该患者家系成员和健康人基因组内。结果发现该患者基因β-葡萄糖醛酸酶(GUSB)(g.65444706G>A)突变,健康人未见该突变,该碱基的突变导致苏氨酸变成丝氨酸,从而导致GUSB活性缺乏或GUSB量的不足。结论基因GUSB(g.65444706G>A)突变是该患者的致病基因,全基因组外显子测序能解决传统定位克隆技术常常面临该病家系患者太少、病例散发、基因位点的异质性、外显不全及候选基因太多等难题,为该病产前诊断提供了新的途径。

论外周血CD4^+淋巴细胞及Th1/Th2细胞因子变化与HIV/AIDS疾病发展的相关性

目的探讨CD4+细胞计数和Th1/Th2细胞因子与HIV/AIDS病程进展的相关性。方法利用流式细胞术及ELISA法检测15例HIV感染者和26例AIDS患者外周血CD4+细胞及Th1/Th2细胞因子水平。结果与正常组比较,AIDS组中CD4+细胞数与Th1细胞因子(IFN-γ)水平显著下降(P<0.01),而Th2细胞因子(IL-4)水平显著升高(P<0.01)。HIV组CD4+细胞数较正常组显著下降(P<0.01),Th1细胞因子(IFN-γ)与Th2细胞因子(IL-4)水平无显著性变化(P>0.05)。随着AIDS病情的加重,Th1细胞因子水平降低与CD4+细胞绝对数降低呈显著正相关(P<0.001),Th2细胞因子水平增高与CD4+细胞的绝对数降低呈显著负相关(P<0.01)。结论人体感染HIV后,CD4+细胞计数和Th1/Th2细胞因子水平在评估AIDS的疾病严重程度中可作为一个重要指标。

γδT细胞对系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞活化和凋亡的影响

目的探讨γδT细胞在系统性红斑狼疮疾病中的免疫保护作用。方法检测17例正常人群和44例系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞及亚群的表达情况。以TCRγδ单克隆抗体固相法体外选择性扩增获得17例活动期系统性红斑狼疮患者和10例正常人群外周血TCRγδ细胞系。测定γδT细胞毒活性。用正常人群γδT细胞系与异体活动期SLE患者外周血单核细胞(PMBC)以1∶5、1∶10比例共同培养48小时,活动期SLE患者PMBC作对照孔,观察γδT细胞系对活动期SLE患者PMBC活化和凋亡、细胞因子分泌的影响。结果SLE患者的γδT细胞及亚群数量明显减少(P<0.05)。IL-2可显著增强γδT细胞的细胞毒作用。正常人γδT细胞系与异体SLE活动期患者PMBC细胞共同培养,共同培养二组SLE患者PMBC的CD69表达和凋亡率均较对照组明显下降(P<0.01)。共同培养二组培养上清IL-10水平较对照组明显升高,具有明显差异(P<0.05)。结论SLE患者γδT细胞数及亚群较正常人群明显下降,γδT细胞对SLE外周血淋巴细胞的凋亡和活化具有抑制性作用,并使IL-10分泌水平升高,表明γδT细胞在SLE发病中具有保护性的免疫调节作用。

梅毒患者外周血树突状细胞亚型及血清IL-12I、FN-γ的检测

目的探讨树突状细胞(DC)各亚型及白细胞介素12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)在梅毒发病机制中的作用。方法流式细胞仪测定23例梅毒患者和15例正常人的外周血DC各亚型的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其血清IL-12和IFN-γ的水平。结果23例梅毒患者外周血髓系树突状细胞亚型(CD11c+)的表达为(1.51±2.04)%,与15例正常对照组(0.38±0.18)%比较显著升高(P<0.01),梅毒患者外周血淋巴系树突状细胞亚型(CD123+)的表达为(0.37±0.21)%,与正常对照组(0.38±0.22)%比较无显著差异(P>0.05)。梅毒患者血清中IL-12的水平为(52.70±103.04)pg/mL,与正常对照组(0.98±1.47)pg/mL比较显著升高(P<0.05);梅毒患者血清中IFN-γ的水平为(6.12±9.76)pg/mL,与正常对照组(0.25±0.18)pg/mL比较显著升高(P<0.01)。梅毒患者外周血CD11c+、CD123+百分数与血清中IL-12、IFN-γ的水平不存在相关关系(P均>0.05)。结论梅毒螺旋体(TP)进入体内后主要诱导CD11c+型DC表达,引发Th1反应,启动细胞免疫;IL-12及IFN-γ参与了TP进入体内后的免疫过程,可能在TP的清除过程中发挥重要的免疫调节作用;DC各亚型的表达与IL-12、IFN-γ的水平不存在相关关系。

遥控Zeus手术机器人与腹腔镜胆囊切除术后免疫功能的比较

目的比较遥控Zeus手术机器人胆囊切除术(RLC)与常规腹腔镜胆囊切除术(CLC)对患者术后免疫功能的影响。方法收集1年内诊治的胆囊结石、胆囊息肉患者5 2例的临床资料,其中行RLC 2 3例,CLC 2 9例。对两组手术前后免疫功能指标如T细胞亚群,IgA,IgM,IgG及补体C 3和C 4的变化进行比较。两组手术均顺利完成。结果RLC手术前后CD 4/CD 8分别为1.5 6±0.6 7和1.3 0±0.5 3,IgM分别为1.4 2±0.5 8和1.2 6±0.4 6,术后均有显著下降(P<0.0 5)。CLC手术后C 3从1.4 8±0.3 4下降至1.3 8±0.2 8,C 4则从0.2 5±0.0 9下降至0.2 2±0.0 7,差异有统计学(P<0.0 5)。两种手术方式手术前后所测定的其他免疫指标均无明显差异(P>0.0 5),且两组间差异无显著性(P>0.0 5)。结论RLC与CLC对患者术后细胞免疫功能的影响均不明显;但均对体液免疫功能有一定影响。

系统性红斑狼疮患者树突状细胞亚型水平与疾病活动指数的相关性

目的检测系统性红斑狼疮患者树突状细胞亚型水平,探讨与疾病活动指数的相关性。方法使用免疫荧光染色、流式细胞仪检测髓系树突状细胞(MDC)亚型CD11c+和淋巴系树突状细胞(PDC)亚型CD123+的表达,并与SLEDAI、ds-DNA、C3、C4进行相关性分析。结果显示SLE患者和活动期患者外周血中CD11c+和CD123+表达(0.21±0.12);(0.19±0.13)较正常对照组(0.36±0.07)和(0.29±0.9)明显降低(P<0.05)。在SLE病人中,活动期组(0.16±0.11);(0.13±0.06)和静止期组(0.26±0.13);(0.23±0.16)患者外周血CD11c+和CD123+百分率差异存在显著性(P<0.05)。CD11c+和CD123+水平与SLEDAI、ds-DNA具有明显相关性(r=-0.408、-0.436、-0.474、-0.528;P分别为0.018、0.013、0.009和0.003),与C3、C4无明显相关性。结论SLE患者外周血树突状细胞亚型明显降低,并且与SLEDAI相关明显,可作为观察狼疮活动的客观指标。

无精症患者的遗传因素与性激素水平的临床分析

目的探讨无精症患者的遗传因素与性激素水平的关系。方法选取本院2015年7月至2019年9月被确诊为无精症的113例患者作为试验组,30例精子数量正常人作为对照组,分别进行外周血染色体核型、Y染色体AZF微缺失以及性激素检测。结果在113例无精症患者中检出染色体异常核型36例(31.9%),异常核型具体如下:47,XXY共21例(58.3%)、性反转共6例(16.7%)、易位共1例(2.8%)、倒位共2例(5.6%)、Y缺失共1例(2.8%)、性染色体嵌合共1例(2.8%)、染色体多态共4例(11.1%),对照组未检出异常,试验组患者的染色体核型异常率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组Y染色体AZF微缺失16例(14.2%),其中AZFa缺失1例(6.3%),AZFb缺失2例(12.5%),AZFc缺失6例(37.5%),AZFb+AZFc缺失4例(25.0%),AZFa+AZFb+AZFc缺失3例(18.8%),对照组未见异常。试验组患者的AZF微缺失异常率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组的促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)与催乳素(PRL)水平均显著高于对照组,试验组患者的睾酮(T)水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。异常染色体核型患者中47,XXY(Klinefelter综合征)发生率最高。异常核型患者中46,XX(性反转)的发生率仅次于47,XXY。6例性反转患者染色体核型均为女性核型(46,XX),其LH、FSH、PRL水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组中其他染色体异常核型患者的LH、FSH、PRL、T水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论染色体核型异常、Y染色体AZF微缺失、性激素水平异常与无精症密切相关。因此对无精患者进行染色体核型、Y染色体AZF微缺失以及性激素联合检测,能更加科学、有效地了解患者病情,有助于为后续的生殖治疗提供合理的临床方案。

核酸条码标识法PSA检测试剂盒的研制及验证

目的:建立核酸条码标识法检测前列腺特异性抗原(PSA)的方法,临床血清标本验证灵敏度、特异性等指标,并与试剂盒ELISA及RIA检测结果比较。方法:采用自制免疫磁球和双标记纳米金探针,利用双抗体夹心法原理,将PSA的检测转化为对核酸条码片段的检测,制备核酸条码法PSA检测试剂盒,对45例前列腺癌患者,45例前列腺良性增生患者,15例其它肿瘤患者,30例正常人群血清标本进行验证。结果:临床血清标本灵敏度约92,特异性约为68,假阳性率32,检测平均回收率大于95,批内变异系数(CV)为6.24,重复性平行性良好。与ELISA及RIA进口试剂盒检测结果比较,三法的差异无显著性(P>0.05),相关性良好,吻合度强。结论:建立的核酸条码标识PSA检测方法,为超微量蛋白质检测提供一种新的方法。

哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的研究

目的探讨哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的改变及意义。方法建立大鼠哮喘模型,支气管-肺组织行HE染色,光镜及图像分析系统研究支气管内管壁、气道平滑肌的病理改变,流式细胞仪检测气道平滑肌细胞增殖周期分布。结果⑴哮喘组大鼠支气管内管壁厚度、平滑肌层厚度较对照组明显增厚(P<0.01)。⑵哮喘组大鼠G0/G1期气道平滑肌细胞比例显著低于对照组(P<0.01);S期、G2/M期气道平滑肌细胞比例显著高于对照组(P<0.01)。结论哮喘气道重构时平滑肌细胞异常增殖,处于增殖状态的细胞比例明显增多,抑制平滑肌细胞的细胞周期转换有可能阻止气道重构,可望成为治疗哮喘的新途径。

哮喘缓解期患者外周血T淋巴细胞亚群的增殖及其分子机制研究

目的探讨哮喘缓解期患者外周血 T 淋巴细胞亚群增殖规律及其分子机制。方法收集45例哮喘急性发作期患者(哮喘急发组)、哮喘缓解期患者(哮喘缓解组)和正常对照(对照组)的外周血标本(各15例),体外分离获得并培养3组患者的外周血 CD^+_4和 CD^+_8 T 淋巴细胞,用流式细胞术检测细胞周期时相分布、细胞周期调节蛋白[P27^(kipl)、细胞周期素(Cyclin)D、E]、PI_3K 和 STAT_6的表达水平。结果 (1)3组 CD^+_4 T 淋巴细胞的 G_0/G_1期分布比例、S 期分布比例,G_2/M 期和(S+G_2)/M 期比例差异有统计学意义(Z 值分别为12.35、8.05、9.16、12.80,均 P<0.05),3组 CD^+_8 T 淋巴细胞的 G_0/G_1期分布比例、S 期分布比例和(S+G_2)/M 期比例差异有统计学意义(Z 值分别为21.60、25.22和21.52,均 P<0.01);(2)3组 CD^+_4 T 淋巴细胞的 P27^(kipl)、Cyclin D 和 Cyclin E 表达水平差异有统计学意义(Z 值分别为10.63、10.66和6.64,均 P<0.05),3组 CD^+_8 T 淋巴细胞的 P27^(kipl)表达水平差异有统计学意义(Z 值为9.30,P<0.05);(3)3组 CD^+_4 T 淋巴细胞的 PI_3K、STAT_6蛋白表达水平差异有统计学意义(Z 值分别为9.04和18.08,P 值分别<0.05和0.01),哮喘缓解期患者处于增殖状态的 CD^+_4 T 细胞较正常对照者明显增多,与哮喘发作期患者相比处于增殖状态的 CD^+_4、CD^+_8 T 细胞显著减少。PI_3K 信号转导途径可能通过上调 CyclinD 和/或 CyclinE 影响 CD^+_4、CD^+_8 T 细胞增殖活化,而 JAK1-STAT_6信号转导途径可能通过下调 P27^(kipl)发挥作用。结论哮喘缓解期患者体内 CD^+_4 T 细胞存在过度增殖,可能与细胞周期蛋白和信号转导蛋白异常有密切关系。

Alport综合征肾脏损害的研究进展

Alport综合征（Alport syndrome,AS）,是一种主要表现为血尿、肾功能进行性减退、神经性耳聋和眼部异常的遗传性肾小球基底膜（glomerular basement membrane,GBM）疾病.AS最终将进展为终末期肾病（endstage kidney disease ES-RD）,需要肾脏替代治疗.本文综述了AS肾脏损害的发病机制、临床表现、诊断和治疗,重点阐述了AS与足细胞病理变化的关系以及AS治疗现状.

性逆转综合征6例病例及分子遗传学研究进展报告

目的报道6例性逆转病例,结合相关文献探讨性逆转综合征的发病机制。方法收集2017年来在本院进行遗传咨询患者的临床资料与外周血标本,采用G显带染色体核型分析等技术分析患者染色体核型.结果同期在本实验室行遗传咨询者共1513例,其中6例诊断为性逆转综合征。G显带染色体核型分析确诊46,X X男性性逆转综合征2例,46,X Y女性性逆转综合征4例。结论对性发育异常患者进行核型分析有利于明确诊断,但性别决定是以SRY基因为主导及多个基因参与的过程,对性发育异常患者进行相应的基因筛查有利于明确病因。