与胎鼠胰腺干细胞共培养保护大鼠胰岛活性

目的：如何保护胰岛功能一直是胰岛移植中一个重要的研究内容。很多研究表明,干细胞除了自身具有较强的增殖分化能力之外,还可通过分泌一些细胞因子或者通过细胞-细胞接触、融合等方式促进损伤组织的修复,维持正常组织细胞功能。本实验利用胎鼠胰腺干细胞与大鼠胰岛共培养,观察其在保护胰岛功能、延长胰岛体外存活时间方面的作用。方法：实验于2006-07/2007-04在深圳人民医院中心实验室完成。①实验材料：选取体质量500g、孕16d的雌性SD大鼠1只,10周龄、体质量200～250gSD大鼠20只,雌雄不限,均由广东省实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：分离纯化孕16dSD大鼠胎鼠的胰腺干细胞,并应用免疫细胞化学法及流式细胞术鉴定;采用胶原酶Ⅴ消化、不连续密度梯度法分离纯化SD大鼠胰岛,并应用双硫腙鉴定。按随机对照表法将胰岛培养分单纯胰岛培养、胰岛与胰腺干细胞联合培养两组,15孔/组。③实验评估：观察胰岛形态变化及胰岛存活率,应用酶联免疫吸附法检测胰岛素分泌量并计算刺激指数。结果：①胎鼠胰腺干细胞培养传代3代后免疫细胞化学可见巢蛋白阳性细胞,流式细胞术测定巢蛋白阳性细胞含量占74.1%。②单纯培养组培养3d时,胰岛生长状况较好,轮廓清楚,培养7d时,胰岛结构变松散,边界不清,培养超过14d后,胰岛结构均已破坏。联合培养组培养3d时,胰岛生长良好,大部分胰岛悬浮生长,部分胰岛与贴壁干细胞松散黏附,培养7d后大部分胰岛仍完整,培养14d时仍可见完整胰岛。③联合培养组培养7,14d时胰岛存活率明显高于单纯培养组（P〈0.01）;④高糖刺激下联合培养组培养7d时胰岛素分泌刺激指数明显高于单纯培养组（P〈0.01）。结论：胎鼠胰腺干细胞与胰岛联合培养可以明显延长胰岛体外存活时间,并保持良好的活性。

胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状

目的:总结胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状,为利用胰岛培养准备更多更好的胰岛提供理论依据和技术支持。资料来源:以计算机检索Medline和Pubmed数据库1994-01/2007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为“isle,tculture”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索CNKI中国全文数据库1994-01/2007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为“胰岛,培养”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①与胰岛培养相关的文章。②1994年以后发表的文章。排除标准:Meta分析类文章。资料提炼:共检索到1384篇与胰岛培养相关的文章,入选33篇。对所检索文章的相关信息加以综合概括,其中关于胰岛培养中基础培养基、培养添加物、培养温度、密度等方面的文章18篇,关于胰岛培养新尝试的文章12篇。资料综合:将胰岛培养后再行移植有一定优势,包括降低免疫原性和为术前准备赢得时间等。目前对于挑选合适培养基及其添加物,调整合适培养温度、培养密度以及保护胰岛的活性等都有了比较深入细致的研究;同时很多学者开始尝试一些新的方法延长胰岛培养时间,改善胰岛功能,包括加入细胞外基质、与其他细胞共培养、选用微重力系统培养以及利用胶囊包裹培养等均显示良好的效果。结论:虽然胰岛培养可能会影响胰岛的活性和功能,但随着对胰岛生理和病理生理特性研究的深入,新的技术方法可将这些影响降到最低。胰岛培养给临床实践带来的便利是其最大的优势,加强胰岛培养的研究与应用有着重要的意义。