循环肿瘤细胞检测及临床应用的研究进展

研究发现,实体瘤患者外周血中存在循环肿瘤细胞。循环肿瘤细胞的检测有助于发现早期肿瘤患者的微转移,重新确定临床分期,监测患者术后肿瘤是否复发与转移,评估预后,选择个体化的治疗策略。由于存在循环肿瘤细胞检测方法、原发肿瘤细胞的不连续脱落、基因组的不稳定性及无效转移等诸多问题,循环肿瘤细胞检测的生物学意义和临床意义仍存在很大争议。本文综述了对实体瘤患者循环肿瘤细胞检测的方法和结果,并探讨当前肿瘤研究领域面临的问题和潜在的进展。

大规模并行基因组测序技术应用于无创产前诊断染色体非整倍体的研究

目的利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA,行胎儿染色体非整倍体的无创产前诊断。方法选择2009年1月到2010年7月在深圳市人民医院产前诊断中心就诊,孕龄在8～30周之间高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常等同意介入产前诊断的孕妇941例,抽取孕妇外周静脉血,提取血浆DNA,制备测序文库,应用Illumina HiSeq2000高通量基因测序仪检测,测得的基因序列与人类的参考基因组比对并作统计分析。同时采集胎儿羊水或脐血,经细胞培养后行羊水或脐血细胞染色体核型分析确定染色体非整倍体。结果①941例孕妇血浆样本处理后经大规模并行基因组测序技术检测判定胎儿为唐氏综合征高风险共27例,非唐氏综合征914例;以羊水或脐血染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照,检测出的27例唐氏综合征高风险中2例误诊,其中一例核型为47,XXY,一例核型分析正常。经统计分析胎儿唐氏综合征的检出率为100%,检出正确率99.78%,误诊率0.22%;②941例样本中,检出18-三体高风险14例,18-三体低风险927例。与染色体核型分析相比,统计分析显示无创产前基因检测18-三体胎儿的检出率为93.33%(14/15),漏诊率为6.67%(1/15)、误诊率为0。结论利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA行无创产前诊断胎儿染色体非整倍体,其敏感性、特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。该技术具有无创性、高准确性、高通量等优势,具有临床实际应用价值。

轻微肝性脑病患者血清中代谢物组的研究

目的检测轻微肝性脑病(minimal hepatic encephalopathy,MHE)患者血清中的代谢物组,初步建立MHE诊断模型。方法采用核磁共振(NMR)方法检测25例肝硬化患者(肝硬化组)、25例轻微肝性脑病患者(MHE组)和30例健康对照(对照组)血清中的代谢物,应用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对NMR谱数据进行模式识别分析,并用临床标本验证代谢组模型诊断MHE的可行性。结果 OPLS-DA模型显示,健康对照与肝硬化患者(包括肝硬化组和MHE组患者)之间的区分非常明显,模型的质量参数R2X=35.1%,Q2Y=0.902;肝硬化组和MHE组标本可区分开来,模型质量参数R2 X=30.4%,Q2 Y=0.817。与对照组相比,肝硬化组和MHE组患者血清中葡萄糖、琥珀酸盐、柠檬酸盐等含量增高,低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、胆碱等含量减少;与肝硬化组相比,MHE组患者血清中的谷氨酰胺、苯丙氨酸、丙酮增高,缬氨酸和异亮氨酸降低。模型准确预测了10例MHE血清标本中的8例。结论基于1H NMR代谢组学技术可同时检测患者血清中多种代谢物质,有助于研究肝硬化和MHE的发病机制,可能为MHE的诊断提供一种新的手段。

表观遗传DNA甲基化和组蛋白修饰与疾病关系的研究进展

近年来,表观遗传修饰在许多重大疾病中的致病机制和临床应用的研究受到广泛关注。在表观遗传修饰中,DNA甲基化和组蛋白修饰调节剂作为疾病发生、发展和临床诊断治疗的生物标志物,而DNA甲基化水平的高低和组蛋白修饰位点的不同均可能对疾病产生影响,DNA甲基化导致抑癌基因转录失活,组蛋白的异常修饰与肿瘤发生、发展相关。因此,探讨DNA甲基化和组蛋白修饰与疾病的关系,在疾病治疗过程中寻找靶向标志物,更深入地研究疾病的致病机制,可为疾病的预防、诊断和治疗提供新途径。

桂北地区恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群和淋巴细胞亚群的相关性研究

目的探究桂北地区恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群和淋巴细胞亚群的数值及其临床意义。方法选取184例肿瘤患者,分别设有鼻咽癌组94例,乳腺癌组32例,宫颈癌组36例,肺癌组22例,并选取了40例符合性别年龄区间的健康体检人员作为正常对照组,运用流式细胞仪检测肿瘤各组和正常组的T淋巴细胞亚群表面因子CD3^+、CD4^+、CD8^+细胞绝对计数和CD4^+/CD8^+比值,淋巴细胞亚群表面因子相对计数CD3^+%、CD56^+%、CD19^+%,并进行统计学分析,比较肿瘤组和正常组之间的差异。结果肿瘤组患者T淋巴细胞亚群细胞绝对计数CD3^+、CD4^+、CD8^+和正常组对比有显著差异(P=0.000),CD4^+/CD8^+比值,鼻咽癌有显著差异(P=0.000),乳腺癌(P=0.634)、宫颈癌(P=0.409)、肺癌(P=0.629)差异无统计学意义。淋巴细胞亚群相对计数与正常组对比,乳腺癌、肺癌差异无统计学意义,鼻咽癌CD3^+%(P=0.000)、CD56^+%(P=0.001)有显著差异,CD19^+%差异无统计学意义;宫颈癌CD3^+%(P=0.000)有显著差异,CD56^+%(P=0.094)差异无统计学意义,CD19^+%(P=0.235)差异无统计学意义。结论恶性肿瘤患者免疫功能异常,通过流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、淋巴细胞亚群项目,对患者病情评估、身体免疫情况实时监测、后期治疗指导用药具有一定的临床应用价值。

循环肿瘤细胞检测的研究新进展

循环肿瘤细胞的检测有助于发现早期肿瘤患者的微转移、重新确定临床分期、监测术后患者肿瘤复发与转移、评估预后、选择个体化的治疗策略。本文综述了近年来免疫细胞化学法、逆转录聚合酶链反应、流式细胞术、免疫磁珠富集检测法检测循环肿瘤细胞的研究新进展。

间充质干细胞治疗糖尿病机制的研究进展

间充质干细胞(MSCs)移植后能使糖尿病鼠快速降低血糖水平,有效逆转其高血糖症状。本文针对目前MSCs治疗糖尿病可能存在的如横向分化、细胞融合、DNA甲基化、旁分泌及内源性干细胞修复等几种机制研究进展作一简要综述。

SLE患者外周血DC的表面标志及其分泌IL-12和IFN-α的研究

目的:分析SLE患者外周血中树突状细胞(DC)的表面标志,探讨DC和SLE发病之间的关系。方法:采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),在培养瓶中贴壁培养3h,吸去悬浮的细胞,联合应用GMCSF、IL4和TNFα刺激正常人及SLE患者外周血DC的增殖及分化成熟。用流式细胞仪分析DC的表面标志,用ELISA法检测培养9d的培养上清中IL12和IFNα的水平。结果:SLE患者DC表面CD1a、CD11c、CD40、CD83和CD123表达的阳性率,分别为:(58.88±7.64)%、(54.4±10.88)%、(37.29±8.08)%、(57.76±11.54)%和(13.14±4.44)%;健康志愿者(对照组)分别为:(47.71±4.01)%、(43.12±8.82)%、(28.59±7.07)%、(48.31±8.79)%和(9.85±3.97)%,两者相差明显(P<0.05)。SLE患者DC上CD80表达的阳性率为(55.16±10.12)%与对照组[(47.95±12.21)%]相差不明显(P>0.05)。培养上清中IL12的水平[(9.78±0.76)ng/L],较正常对照组[(7.49±0.74)ng/L]明显升高(P<0.05);SLE患者组IFNα的水平为[(2.95±0.61)ng/L]与对照组[(2.70±0.29)ng/L]相比升高不明显(P>0.05)。SLE患者非活动期与活动期培养上清中IL12和IFNα的水平无明显差异。结论:SLE患者的DC可能是通过其抗原递呈功能的增强及分泌IL12而参与本病的发病过程。

基于RNA-seq技术对13-三体综合征脐带血差异性表达环状RNA研究

目的本研究拟从circRNA为切入点,利用RNA-seq技术从13-三体综合征患者和产检正常的孕妇脐带血中筛选出差异表达的circRNA,为13-三体综合征患者的诊断和治疗提供基础性研究。方法选择在2017年1月1日至2018年1月1日期间深圳市人民医院确诊为13-三体综合征患者和一名产检结果正常的孕妇作为研究对象,使用RNA-seq技术检测出差异表达的circRNA,进行组间的差异分析,并对circRNA吸附相关的微小RNA(miRNA)进行预测和分析。结果通过与健康对照组分析可得到,共有8005个差异表达的circRNA具有统计学上的意义,其中表达上调的circRNA有4275个,表达下调的circRNA有3730个,hsa_circ_0002473是位于13号染色体上表达最上调的circRNA,与8种miRNA相互作用。结论 13-三体综合征患者脐带血与健康对照组的脐带血之间存在差异表达的circRNA,hsa_circ_0002473有可能成为13-三体综合征诊断和治疗的生物标志物。

tRNA影响肿瘤发生发展的研究进展

转运RNA(tRNA)是一类广泛存在于生物体内,在肽链合成中负责氨基酸转运的非编码小RNA分子。tRNA不仅是简单的翻译原件,还在胁迫信号转导和自适性翻译中发挥着核心作用。tRNA及其相关片段具有许多生物学功能,既可以在应激反应中作为信号分子,又可以作为基因表达的调节者,与人类疾病密切相关,特别是在肿瘤发生、发展中发挥着重要的调控作用。tRNA为肿瘤的诊断和治疗提供了新思路,有望成为疾病诊断的新型标志物。

卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球的制备和特征

目的制备双重物理机制载药的卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球,优选制备工艺,观测其特征。方法碳包铁纳米磁粉经稀盐酸处理后制得碳包铁纳米笼。以此纳米笼为磁性内核,壳聚糖为基质,采用反相微乳法制备卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球。该纳米球通过基质包裹和碳包铁纳米笼吸附双重物理机制载药。利用正交实验设计优选纳米球制备工艺,观测纳米球的形貌、粒径、载药量、磁响应性和体外释药性能。结果碳包铁纳米笼与其前体相比,比表面积由20.98 m2.g-1增至40.38 m2.g-1,孔容由70 mm3.g-1增至110mm3.g-1,对卡铂的吸附量为9.6%。卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球球形圆整,磁响应性强,平均粒径(207±21)nm,载药量为(11.40±1.31)%。纳米球的体外释药持续5 d,累计释药量依次为51%,68%,80%,87%,91%。结论良好的磁性内核和双重物理载药机制的有机结合能够优化纳米球的性能,制备出理想的磁靶向纳米药物载体。

MiR433靶向调控Notch1逆转人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的探讨miR-433在多西他赛对乳腺癌耐药机制中的作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/DOX),并用miR-433抑制剂及对照剂转染MCF-7/DOX细胞,采用酶标仪(Bio Tek)测量吸光度和FACS流式细胞仪检测来评估miR-433的功能和作用;通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因测定法等技术确定miR-433的下游靶标。结果实时定量PCR结果显示miR-433在MCF-7/DOX细胞中的表达下调;细胞活力测定结果表明miR-433抑制剂能促进产生多西他赛耐药,并减弱MCF-7细胞的凋亡,而miR-433过表达能增强多西他赛的敏感性并且诱导MCF-7/DOX细胞凋亡。荧光素酶报告基因测定结果显示在miR-433表达显著下调的MCF-7细胞中,Notch1的m RNA和蛋白质表达水平明显增强;miR-433mimics转染的MCF-7/DOX细胞与对照组(mimics-Ctrl)相比,Notch1的m RNA和蛋白表达显着降低。结论 miR-433可通过抑制Notch1的表达来逆转乳腺癌对多西他赛的耐药性,继续发挥药物的有效性。

C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的制备卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球(C-Fe@CN-CN),观察其对人肝癌细胞体外增殖的抑制作用。方法采用反相微乳法制备C-Fe@CN-CN,测定其表征,观察其体外释药行为。采用MTT法检测C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞体外增殖的抑制效应;计算IC50,绘制生长曲线。结果C-Fe@CN-CN球形圆整,平均粒径(2 0 7±2 1)nm,载药量为(1 1.4 0±1.3 1)%。C-Fe@CN-CN的体外释药行为包括快速相和平稳相两阶段,可持续5 d。C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,作用2 4 h时抑制效应低于原药,作用4 8 h和7 2 h时抑制效应等同于原药。C-Fe@CN-CN的2 4,4 8,7 2 h IC50分别为1 3 5,1 8.8 4,6.0 9μg/mL。空白微球对肝癌细胞增殖无影响。结论C-Fe@CN-CN具有长循环和肿瘤组织滞留潜能,磁靶向性强,可缓释药物。体外能有效地抑制肝癌细胞增殖,空白微球表现出良好的生物相容性。

卡铂碳包铁纳米壳聚糖微球的制备和特征

目的 制备卡铂碳包铁纳米壳聚糖微球，检测其性能，并与卡铂纯铁纳米壳聚糖微球进行比较。方法 以吸附药物的碳包铁纳米磁粉为磁性内核，壳聚糖为基质，卡铂为负载药物，采用反相微乳法制备卡铂碳包铁纳米壳聚糖微球。卡铂纯铁纳米壳聚糖微球的制备方法相似，不同的是以无吸附药物能力的纯铁纳米磁粉为磁性内核。检测和比较两种纳米药物微球的形态、粒径、磁响应性、载药量、包封率和体外释药。结果 两种药物微球的球形圆整，平均粒径（210±26）nm，粒径分布150-300nm，磁响应性强。碳包铁纳米微球的载药量（11．15±1．03）％，纯铁纳米微球载药量（9．21±1．10）％。碳包铁纳米微球1，2，3，4d的体外释药量分别为60％、74％、84％、92％；纯铁纳米微球1，2d的释药量分别为81％，91％。结论 通过活性碳吸附和物理基质包裹双重物理机制载药载药的卡铂碳包铁纳米壳聚糖微球不但载药量高，而且释药速度平稳。多重机制的有机结合是优化纳米微球性能的有效方法。

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳(2-DE)检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。

类风湿性关节炎患者循环microRNAs生物标志物的筛选及鉴定

目的:分析类风湿性关节炎(RA)患者血浆中差异表达的microRNAs(miRNAs)。方法:采用mi RNA芯片检测、筛选RA患者与正常人血浆中表达有显著变化的miRNAs,并采用RT-q PCR技术对芯片数据进行验证。数据处理采用Gene Spring GX软件,t检验和方差分析用于统计学分析。结果:RA患者与正常人间存在差异的循环mi RNAs共有40个,其中18个上调,22个下调。根据循环miRNAs在芯片中表达差异的倍数和潜在的生物学价值,选取4个miRNAs进行RT-q PCR验证,候选的miRNAs与正常对照间差异有统计学意义(P<0.05),证实芯片结果可靠性。结论:RA患者体内具有差异表达的循环miRNAs,这些循环miRNAs可作为一种潜在的RA候选生物标志物。

利用CRISPR/Cas9技术进行lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的:构建lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型,为探讨snhg17在肿瘤发生中的作用机制及体内实验研究提供更特异可靠的动物模型。方法:确定snhg17-KO基因敲除小鼠特异性靶标sgRNA1、sgRNA2,引导与核酸酶Cas9结合进行RNA的体外转录,将有活性的sgRNA和Cas9RNA通过C57BL/6小鼠受精卵的显微注射方式,获取snhg17基因敲除的纯合子小鼠。运用聚合酶链反应(PCR)和基因测序方法,针对获得的子代小鼠,进行基因型的鉴定。结果:lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型构建成功。结论:本研究采用CRISPR/Cas9技术首次构建出snhg17基因敲除小鼠的动物模型,为探讨snhg17在肿瘤发生、发展中的作用提供更为便捷、可靠的动物模型及研究平台。

人转铁蛋白修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球的制备与表征

通过人转铁蛋白修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球制备一种药物载体,拟解决抗肿瘤药物靶向治疗和肿瘤细胞多药耐药产生的问题.用优化的微乳化-离子交联方法制备包覆阿霉素的海藻酸钠复合纳米微球,以水溶性碳二亚胺为交联剂,将载药微球与人转铁蛋白连接,制备出了人转铁蛋白Tf修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球.结果显示其平均粒径为(170±5.12)nm,外观为圆球型,阿霉素包裹量为11.9%,人转铁蛋白的连接量为42.3%的纳米微球,为解决乳腺癌细胞的多药耐药性提供重要的体外实验基础和科学依据.

围手术期肠内免疫营养对肝硬化肝切除大鼠肝再生的影响

目的探讨围手术期内使用肠内免疫营养支持对肝硬化肝切除大鼠肝再生功能的影响。方法48只肝硬化大鼠随机均分为两组。A组为标准肠内营养组,B组为肠内免疫营养组。依标本采集时间的先后,A,B组再各分为4个亚组。两组大鼠用等热量肠内营养剂喂养8d后行68%肝切除术,术后再喂养至取标本时间。分别于术前、术后1,4和8d取相应亚组大鼠肝组织标本,检测肝细胞有丝分裂指数(MI)和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数。结果两组大鼠肝切除术后残肝表现出一定的再生能力。B组肝细胞MI和PCNA阳性细胞计数在术后4d和8d显著高于A组(P<0.05)。结论围手术期肠内免疫营养支持较之标准肠内营养支持更能增强肝硬化肝切除大鼠残肝再生能力,使肝再生在术后较长时间内保持高水平。

IgA肾病患者全基因组miRNA表达谱的特征及其染色体分布

目的:调查研究IgA肾病(IgA-N)患者全基因组miRNA的表达及其编码基因的染色体分布特征。方法:运用Illumina高通量测序技术分别对6例IgA-N患者肾活检组织和6例肾癌患者癌旁正常组织的全基因组miRNA表达水平进行检测,比较分析两组miRNA的表达差异,并对其编码基因的染色体分布情况进行分析。结果:在两组样本中共检测到370种具有显著性差异表达的miRNA,共同表达的miRNA有249种(在IgA-N组中53种表达上调,196种表达下调),另外还有4种和117种miRNA分别特异性表达于IgA-N组和对照组。两组样本miRNA基因表达的染色体分布趋于一致,染色体1、7、9、14、17和X对疾病的贡献值较高。结论:IgA-N患者肾脏组织具有特定的miRNA表达谱和染色体分布特征。染色体7、17、X可能在IgA1糖基化异常过程中起重要作用。