慢性乙肝病毒感染各阶段患者外周血单个核细胞中IL-22 mRNA的表达水平及其临床意义

目的:分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)、慢加急性/亚急性重型肝炎(重型肝炎)、乙肝肝硬化和乙型肝炎病毒(HBV)相关性原发性肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素22(IL-22)mRNA的表达水平及其可能的临床意义。方法:收集20名健康对照者(健康对照组)、33例CHB中度患者(CHB中度组)、21例CHB重度患者(CHB重度组)、16例重型肝炎患者(重型肝炎组)、16例乙肝肝硬化患者(肝硬化组)和40例HCC患者(HCC组)的临床资料。RT-PCR半定量分析各组研究对象PBMCs中IL-22mRNA表达水平;Pearson相关分析法分析IL-22mRNA表达水平与临床重要检测指标的相关性。结果:CHB中度、CHB重度和肝硬化组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平均高于健康对照组(P<0.001);重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P=0.830);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平明显低于健康对照组(P<0.001)。CHB重度组患者和重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与总胆红素(TB)水平呈明显负相关关系(r=-0.383,P=0.043;r=-0.619,P=0.028);HCC组患者PBMCs中IL-22 mRNA表达水平与血清甲胎蛋白(AFP)水平呈明显正相关关系(r=0.664,P=0.000)。结论:慢性乙肝重症化过程中,患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平低下提示肝细胞再生障碍,且IL-22mRNA表达水平与TB一样能够反映患者病情严重程度。IL-22可能对HCC的发生发展起促进作用。

NLRP3、AIM2、IFI16炎症小体在慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中的活化水平和与HBV感染的相关性分析

目的:探讨乙肝病毒(HBV)是否激活了慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和干扰素诱导蛋白16(IFI16)炎症小体,分析HBV影响炎症小体活化的可能机制.方法:收集感染内科临床确诊CHB患者35例.同时选取健康住院医师28例为对照.以常规淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离健康对照组和CHB患者组静脉血得到PBMCs,采用逆转录、实时荧光定量PCR检测CHB患者组和健康对照组PBMCs NLRP3、AIM2、IFI16、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(CASP1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平,ELISA法检测两组血清中IL-1β蛋白分泌水平.结果:CHB患者组和健康对照组PBMCs ASC、NLRP3、AIM2、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平及两组血清IL-1β蛋白分泌水平无显著性差异.CHB患者组PBMCs IFI16、CASP1 mRNA表达水平显著上调,且IFI16 mRNA表达水平与患者血清HBV DNA载量显著正相关(r=0.699 8,P<0.01).结论:慢性HBV感染未导致CHB患者PBMCs NLRP3、AIM2炎症小体的活化;尽管HBV DNA可能诱导了CHB患者IFI16炎症小体的高表达,但通过抑制pro-caspase-1的活化、IL-1β的表达,HBV阻断了IFI16炎症小体的活化效应.

IL-22和IL-17 mRNA在慢性HBV感染者PBMCs中的表达及其意义

目的:探讨慢性HBV感染者外周血单个核细胞IL-22和IL-17 mRNA表达及其对病情转归的影响.方法:以慢性乙型肝炎中度患者33例、重度患者21例、重型肝炎患者16例、乙型肝炎肝硬化患者16例和健康对照10例为研究对象,采用RT-PCR方法检测患者外周血单个核细胞IL-22和IL-17 mRNA的表达.结果:CHB中度、CHB重度和肝硬化患者IL-22表达水平无统计学意义,但均高于健康对照组,差异有统计学意义(P=0.000);而重型肝炎患者IL-22表达水平低于该3组患者,高于健康对照组,但差异无统计学意义(P=0.064).各组IL-17表达水平相似但均高于健康对照组,差异有统计学意义(P=0.000);重型肝炎患者IL-17表达水平均低于其他3组患者,与CHB中度患者比较差异有统计学意义(P=0.014),与CHB重度和肝硬化患者比较差异无统计学意义(P=0.172,0.968).结论:IL-22的下调不利于肝细胞损伤后的修复,IL-22分泌的增加对减轻肝组织的损伤特别是重型肝炎的恢复可能是有意义的.慢性HBV感染患者IL-17均明显升高,提示其可能参与慢性HBV感染肝组织炎症的发生,且对慢性肝病纤维化起一定作用.

原发性肝细胞癌患者PBMC中IL-22和IL-17mRNA的表达及其临床意义

目的:探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononrclear cells,PBMCs)IL-22和IL-17 mRNA的表达水平及其临床意义。方法:收集2011年4月至10月暨南大学医学院附属深圳市人民医院感染内科经临床确诊为HCC患者40例,所有患者均为乙型肝炎表面抗原阳性。同时选取来自本科室健康人的外周静脉血20例作为对照。以常规淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离得到PBMCs,采用RT-PCR法检测HCC患者组和健康人对照组PBMCs IL-22和IL-17 mRNA的表达水平。结果:与健康人对照组相比,HCC患者组IL-22 mRNA表达水平明显下降(0.309±0.044 vs 0.560±0.029,P<0.01),而IL-17 mRNA的表达水平则显著升高(0.682±0.048 vs 0.541±0.038,P<0.01)。结论:IL-17 mRNA的高表达可能参与HCC的发生、发展,而IL-22 mRNA低表达可能与HCC患者的近期预后不佳有关。

先天性人巨细胞病毒感染的防治进展

先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染是目前我国胎儿畸形及新生儿迟发性感音神经性耳聋的重要原因之一。本文从先天性巨细胞病毒感染的流行病学、不同感染类型的胎儿预后、预防和治疗等方面阐述了先天性HCMV感染的最新进展,希望通过深入探讨目前妊娠期HCMV感染及新生儿HCMV感染的治疗方式,为治疗先天性巨细胞病毒感染带来新的思路。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达及其意义

目的:检测慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平,探讨其对慢性HBV感染者病情转归的影响。方法:选择86例住院患者,根据慢性乙型肝炎防治指南诊断标准,共分为4组,包括慢性乙型肝炎(CHB)中度组患者33例、CHB重度组患者21例、重型肝炎组患者16例和乙型肝炎肝硬化组患者16例,另选取健康者10名作为对照组。采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平。结果:CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组研究对象PBMCs中T-bet的表达水平分别为0.597±0.094、0.724±0.071、0.860±0.060、0.528±0.059和0.514±0.071;CHB重度及重型肝炎组患者T-bet表达水平均高于对照组(P<0.05);CHB中度组患者T-bet表达水平低于CHB重度组患者(P<0.05);CHB重度组患者T-bet表达水平低于重型肝炎组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组GATA3的表达水平分别为0.966±0.037、0.973±0.021、0.725±0.028、0.759±0.037和0.535±0.028;各组患者GATA3表达水平均高于对照组(P<0.05);重型肝炎组患者GATA3表达水平低于CHB中、重度组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组FoxP3的表达水平分别为0.935±0.034、0.919±0.047、0.804±0.021、0.984±0.060和0.772±0.083,除重型肝炎组患者外其他各组患者FoxP3表达水平均较对照组显著升高(P<0.05);重型肝炎组患者FoxP3表达水平低于其他各组(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和健康对照组T-bet/GATA3的表达分别为0.618±0.100、0.744±0.072、1.187±0.082、0.697±0.078和0.963±0.133,各组比值与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),CHB中度组患者T-bet/GATA3比值低于CHB重度组和重型肝炎组(P<0.05);重型肝炎组患者T-bet/GATA3比值高于其他各组(P<0.05)。结论:随着肝病炎症的加剧,T-bet与GATA3的表达呈反方向变化,慢性HBV感染患者T-bet/GATA3比值与FoxP3mRNA表达呈显著负相关关系。

原发性胆汁性肝硬化50例临床分析

目的总结原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床表现、血清学检查及治疗方法。方法回顾性分析50例确诊PBC病例的临床资料。结果50例患者中女49例,占98%,平均年龄52.62±9.28岁,9例(18%)无症状仅有肝功能轻度异常,8例(16%)呈急性起病,9例(18%)病情进展为失代偿期肝硬化。14%～18%合并类风湿性关节炎、干燥综合征。血清AKP(378.3±169.54U/L)、GGT(239.6±154.7U/L)、TBIL(86.68±84.48μmol/L)和IgM升高,全部患者AMA和AMA-M2阳性。熊去氧胆酸治疗对早期无症状或症状轻、黄疸低者疗效满意,31例(62%)患者病情有不同程度的好转,而对TBIL大于85μmol/L、Child-PughC级的患者(9例)治疗后疗效甚微。其中5例病情继续进展,终因慢性肝功能衰竭而死于并发症。结论加强对PBC的认识,对不明原因的长期肝功能异常的女性患者,尤其有胆汁淤积表现时,需常规检测AMA或AMA-M2,有助于对PBC的早期诊断和治疗。

肝细胞癌患者外周血单个核细胞Foxp3 mRNA水平变化

目的检测初发现未治疗肝细胞癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Foxp3 m RNA水平变化及其与血清AFP水平的关系。方法在HCC患者60例和健康人20例,采用RT-PCR法检测PBMCs中Foxp3m RNA水平,常规检测血清AFP水平。结果 HCC患者和健康对照组外周血Foxp3 m RNA水平分别为(0.976±0.073)和(0.772±0.083),差异有统计学意义(P<0.01);经Pearson相关性分析显示,HCC患者外周血Foxp3 m RNA水平与AFP水平呈正相关(r=0.226,P=0.025)。结论 HCC患者PBMCs中Foxp3水平明显升高,对肿瘤的发生发展可能具有一定的预测作用。

DNA微阵矩技术研究肝纤维化差异基因表达谱变化

应用DNA微阵矩技术研究乙型肝炎肝硬化组织差异基因表达谱改变,以寻找肝纤维化相关基因,探讨肝纤维化的发病机理。抽提正常肝组织和肝硬化组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机扫描分析正常肝组织和肝硬化组织基因表达谱的差异情况。在10000个候选基因中,筛选出99条差异表达基因,表达上调的有45条,表达下调的有54条。其中未知基因9条。因此基于DNA微阵矩技术的肝纤维化基因表达谱分析能够高通量筛选与肝纤维化发生发展相关的基因。

Smad7修饰的骨髓间充质干细胞通过肝星状细胞Smads信号与MMP-1/TIMP-1平衡的抗肝纤维化机制

目的:探究Smad7修饰的骨髓间充质干细胞(Smad7-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的潜在机制.方法:实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组,分别与Smad7-BMSCs和PBS共同培养.通过ELISA法检测各组细胞培养液中Col1和HA的含量; MTT法检测各组细胞增殖情况;培养72 h,收集细胞并提取总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中Smad7、Smad3、MMP-1、TIMP-1、Col1 m RNA的表达; Western blot检测细胞中Smad7、Smad3、p-Smad3、MMP-1、TIMP-1、Col1蛋白的表达.结果:(1)A组细胞培养液中Col1和HA的含量显著下降(P <0. 05);(2)A组细胞增殖显著降低(P <0. 01);(3)Western和PCR结果显示,A组细胞中Smad7、MMP-1的蛋白和m RNA表达水平较B组显著升高(P <0. 01),而p-Smad3、TIMP-1及Col1蛋白和m RNA表达水平显著降低(P <0. 01).结论:Smad7修饰的骨髓间充质干细胞BMSCs可能通过降低肝星状细胞Smad3蛋白的磷酸化,从而影响MMP-1/TIMP-1平衡,促进星状细胞外基质ECM的降解而实现抗肝纤维化的作用.

外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3检测在原发性肝癌诊断中的意义

目的探讨外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)检测在原发性肝癌诊断中的意义。方法应用酶联免疫吸附试验检测80例原发性肝癌患者、78例肝内良性占位病变患者和40例健康对照者外周血GPC3蛋白水平,了解GPC3蛋白在各组中的阳性率,探讨GPC3蛋白诊断原发性肝癌的敏感性和特异性。结果健康对照组血清GPC3蛋白水平为(196.76±112.24)pg/mL,肝内良性占位组为(248.56±123.35)pg/mL,原发性肝癌组为(678.23±325.22)pg/mL。原发性肝癌组血清GPC3蛋白水平高于肝内良性占位组和正常对照组(F=18.76,P<0.01)。根据ROC曲线,若外周血GPC3蛋白诊断原发性肝癌的界值为412.6 pg/mL,则敏感度为63.2%,特异度为89.3%,健康对照者GPC3蛋白阳性率为2.50%,肝内良性占位病变组阳性率为14.1%,原发性肝癌组阳性率为65.0%。各组间血清GPC3蛋白阳性率统计学差异有显著性意义(χ2=40.28,P<0.01)。若AFP诊断肝癌的截止值为400 ng/mL,AFP的阳性率为46.3%,联合检测AFP和GPC3的阳性率提高至77.5%。结论 GPC3蛋白可作为原发性肝癌诊断及鉴别诊断的重要指标之一。联合检测GPC3和AFP可能提高原发性肝癌的诊断敏感性。

干扰素诱导跨膜蛋白的抗病毒研究进展

干扰素(interferon,IFN)受外界刺激后可与细胞干扰素受体特异性结合,该信号通路的活化可诱导数百个干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表达,编码多种先天性免疫分子,从而启动或调节机体的免疫应答。干扰素诱导的跨膜蛋白(interferon-induced transmembrane protein,IFITM)正是一种重要的ISGs分子,它在抗病毒免疫、肿瘤形成、骨质代谢、细胞黏附、分化和胞内信号转导等方面发挥着多样的生物学功能,而其抗病毒作用是当前研究的热点,不仅可通过多种途径阻止病毒的侵入,而且IFITMs基因多态性与病毒易感性及严重程度也具有一定相关性。本文对IFITM抗病毒相关研究进展进行综述。

防控新发传染病,人类的永恒课题

新发传染病是指人群中新出现的传染病,或过去存在但在发病率或地理分布上在增加的传染性疾病。人类历史上许多重大传染病给人类造成了巨大灾难。20世纪70年代以来,几乎每年都有新发传染病被发现。最近30多年来全球约出现新发传染病40余种,已成为全球公共卫生中的重点和热点问题。近年新发传染病的流行特点包括:病原体种类繁杂,但以病毒最多;人兽共患为显著特点;传播速度快,流行范围广;感染方式复杂多变、流行趋势预测难度大;对公共卫生安全危害大。防范新发传染病要加大政府财政投入、完善新发传染病的监测能力建设、加强科学研究和疫苗开发研究。

尼帕病毒全球流行态势解析

尼帕病毒(Nipah Virus,NiV)是一种严重威胁人类与动物健康以及公共卫生安全的人兽共患病原体,可通过直接接触或气溶胶的形式进行传播,导致人或动物感染甚至死亡。本文总结了自1998年马来西亚发生第一例感染者至今,NiV暴发和流行过的国家和地区,并分析了NiV的主要传播方式。调查研究发现,NiV在西太平洋地区和东南亚地区的流行呈上升趋势,且我国的广西、云南等南方地区属于NiV流行的高危区域,虽然目前没有相关病例报告,但应当加强预警与流行病学研究,时刻监测该病毒对我国的入侵。

冠状病毒起源、受体及新型冠状病毒检测与疫苗最新研究进展

冠状病毒由来已久,1936年就分离到病毒并命名。冠状病毒种类很多,感染谱也比较广,一些病毒具有人兽共患特性,严重威胁人类与动物健康以及公共卫生安全,特别是2003年严重急性呼吸综合征病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)、2012年中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV),以及现在流行的新型冠状病毒,使得冠状病毒“名声大噪”。本文简要综述了冠状病毒的发现、起源、病毒受体以及我们在新型冠状病毒检测方法和疫苗研究方面的最新进展,以期人们更好的认识和理解冠状病毒,为新型冠状病毒及其他冠状病毒防控提供参考。

霍乱:不该被遗忘的老瘟疫

霍乱为一种烈性传染病,在历史上曾引起7次世界性大流行,造成数以百万计人死亡。由于本病往往来势凶猛,传播迅速,容易超越国界引起世界性大流行,因此被《国际卫生条例》和《中华人民共和国国境卫生检疫法》规定为必须实施国境卫生检疫的国际检疫传染病之一,也是我国强制管理的甲类传染病之一。近一段时间,霍乱在世界多个地区肆虐,危害巨大。本文对霍乱近期的流行情况作了详细描述,并对影响霍乱流行的因素和预防措施提出看法。复习霍乱流行史并对这一古老瘟疫流行因素进行分析具有重大现实意义。

1株登革Ⅰ型病毒的分离鉴定及系统进化分析

目的了解1株登革病毒分离株的来源及进化情况。方法分离获得1株登革病毒,通过对该毒株进行血清型分型鉴定及基因组序列测定,进而通过生物信息学方法对囊膜蛋白E进行系统进化分析。结果分离获得1株DENV血清Ⅰ型基因Ⅰ型毒株;且E基因的同源性分析显示,与Malaysia 0802aTw、Singapore株、浙江17-45株、YN176282株、BNJH17108株的核苷酸同源性均在99%以上;氨基酸水平,与NJX-14株、浙江17-45株、Malaysia 0802aTw株、1208aTw株等多种毒株的E蛋白的同源性均为99.8%,表明这些毒株可能源于同一株原始毒株,且E蛋白序列遗传进化稳定,与2002年以来多株广东省分离的毒株高度同源。结论近十年发现在我国的DENVⅠ型基因Ⅰ型遗传进化稳定,保守程度高,有利于针对该血清型登革病毒的防控。

基于微流控芯片技术的5种呼吸道病毒核酸快速荧光qPCR检测方法的建立

目的建立一种快速鉴别诊断5种重要呼吸道病毒(甲型流感病毒、乙型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒及麻疹病毒)的检测方法。方法基于微流控芯片技术,设计合成针对5种呼吸道病毒的特异性探针引物,利用快速反应体系及创新性温控模块研制的极速荧光定量PCR仪,评估探针引物的特异性、灵敏性及检测体系的重复性,并用临床样本进行测试。结果设计合成的5种病毒的探针引物具有较高的特异性和灵敏性,建立的检测体系可在5min内完成病毒核酸的制备,30min内获得检测结果,且具备良好的重复性。结论建立了5种呼吸道病毒核酸快速定量检测方法,有望用于不明呼吸道病毒感染的鉴别诊断及现场快速检测。

siRNA下调KMT2E表达对登革Ⅱ型病毒增殖的影响

目的探究下调赖氨酸甲基转移酶2(lysine methyltransferase 2E,KMT2E)蛋白表达对登革Ⅱ型病毒(dengue virusⅡ,DENVⅡ)增殖的影响,初步分析KMT2E在DENVⅡ增殖过程中的调控作用。方法针对KMT2E的编码序列设计3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染293T细胞以筛选出下调KMT2E表达效率最高的siRNA,并用实时荧光定量分析DENVⅡ在KMT2E表达下调后的增殖情况。结果编号为1的siRNA(siKMT2E-1)有最高的下调KMT2E蛋白表达效率,转染293T细胞后能明显抑制DENVⅡ增殖。结论KMT2E可能在DENVⅡ增殖过程中发挥正调控作用。

从近期美国加利福尼亚州甲型病毒性肝炎流行看其预防的长期性和复杂性

随着我国人民物质生活水平的明显提高及甲型病毒性肝炎疫苗接种的普及,我国甲型病毒性肝炎的发病率已明显下降。但近期美国加利福尼亚州的甲型病毒性肝炎暴发流行事件,提醒我们甲型病毒性肝炎预防绝不可放松,甲型病毒性肝炎的预防仍存在着长期性、复杂性和艰巨性。本文回顾了美国加利福尼亚州从去年至今的甲型病毒性肝炎流行情况;分析了加利福尼亚州甲型病毒性肝炎流行的可能原因;提出我国预防甲型病毒性肝炎的思路,包括加强甲型病毒性肝炎疫苗注射推广、加强爱国卫生运动、加强食品卫生检疫及加强甲型肝炎病毒和流行病学研究等,其中接种甲型病毒性肝炎疫苗是我国目前预防和控制甲型病毒性肝炎最经济和有效的措施。