雷公藤多甙防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

用兔同种异体角膜移植模型，观察了雷公藤多甙及联合环孢霉素A对植片存活时间和移植抗原诱导的迟发型超敏反应的影响。结果显示：与对照组相比，雷公藤多甙组、环孢霉素组和两种药物联合组植片存活时间显著延长，移植抗原诱导的迟发型超敏反应也显著受到抑制；其中联合组的作用又大于两种药物单独应用组。结果提示：雷公藤多甙具有显著延长角膜移植存活和防止免疫排斥反应发生的作用；与环胞霉素A具有一定的协同作用，为进一步应用于临床提供了实验依据。

转化生长因子-β防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

转化生长因子-β（TGF）是一具有免疫调节活性的多肽分子，包括抑制T细胞和B细胞的分化以及灭活巨噬细胞功能。本研究建立兔同种异体偏中心穿透性角膜移植和异位角膜移植模型，观察了TGF-β对角膜移植排斥反应的影响。发现使用TGF-β具有延长移植片存活和抑制供体特异性迟发型超敏反应的作用。结果提示TGF-β具有作为免疫抑制剂抑制角膜移植排斥反应的能力。

角膜上皮细胞的免疫调节网络

建立人角膜上皮细胞的原代和传代培养。在培养的上皮细胞单层上观察了上皮细胞对外周血淋巴细胞活性和功能的影响，并研究了上皮细胞与转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）、白细胞介素－１（ＩＬ－１）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）之间的相互作用。结果提示：在角膜上皮层以及周围组织存在着复杂且有多效性的细胞和细胞因子的免疫调节网络，这对于角膜的防御以及角膜移植片的存活具有一定的生物学意义。

细胞凋亡与眼的免疫赦免

眼内细胞构成性表达Fas分子的配体 (FasL)。FasL可以诱导入侵眼内的Fas+ 淋巴细胞发生凋亡。该机制具有双重作用 ,一是限制局部炎症的扩散 ;二是参与免疫偏离的建立。眼的免疫赦免除与被动的物理屏障和隔离机制有关外 ,还与多重的主动机制有关。这些机制的共同作用是免除眼组织发生免疫性炎症反应以维持眼器官的完整性。

脾脏在不同种类动物前房相关免疫偏离诱导和维持中的作用

目的:脾脏在小鼠前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation,ACAID)的诱导中起着重要的作用。在前房接种抗原4天内摘除脾脏可以消除免疫偏离而导致免疫反应。本研究旨在观察脾脏在其他种类动物ACAID的诱导和维持中的作用。方法:在脾脏切除和假性脾脏切除后,使用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为可溶性抗原分别接种于Wistar大鼠、新西兰白兔和猕猴的眼前房。使用BSA和完全弗氏佐剂混合乳剂免疫动物。通过抗原刺激皮肤测定抗原特异性迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),并定时评估免疫偏离的维持时间。结果:假性脾脏切除眼内抗原接种组和脾脏切除眼内抗原接种组所有动物均显示抗原特异性DTH抑制,且维持时间无显著差异。相反,单纯假脾脏切除组和单纯脾脏切除组动物均显示阳性抗原特异性DTH反应。结论:脾脏对于大鼠、兔和灵长目动物ACAID的诱导和维持不具有重要作用。这些发现提示随着进化程度的进阶,脾脏的功能可能被其他的淋巴器官所代替。眼科学报1999;15:221-224。

棘阿米巴角膜炎的感染免疫及防治

棘阿米巴角膜炎是棘阿米巴属引起的角膜表面的感染。通常由粘附于软性接触镜的棘阿米巴滋养体所传递。当寄生虫粘附于角膜上皮细胞表面时可触发感染。后来的过程包括:寄生虫介导的细胞病理效应、诱导凋亡和通过产生各种蛋白酶入侵角膜基质层。滋养体也可浸润角膜神经,造成放射状角膜神经炎。棘阿米巴包囊即具有免疫原性又具有抗原性。然而,诱导针对棘阿米巴抗原的细胞介导的免疫应答对棘阿米巴角膜炎即无减轻作用又无预防效应。但是,普通粘膜免疫系统对于棘阿米巴角膜炎却具有显著的预防作用。其机制是通过IgA抗体阻断感染性滋养体与上皮层的结合。局部使用糖皮质激素对于缓解疼痛和减轻炎症反应具有显著效果,但可通过诱导静止包囊的脱包囊、增加滋养体的细胞病理效应以及麻痹初始免疫系统使疾病复燃。因此,糖皮质激素的使用是一把“双刃剑”。

角膜移植术后可溶性白细胞介素-2受体水平的动态变化

目的:观察角膜移植术后血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平与排斥反应的相关性,将其发展成为角膜移植排斥反应早期诊断和指导临床用药的辅助性检查。方法:在Lewis大鼠建立同种异体穿透性角膜移植模型,使用放射免疫法动态测定了移植术后血清sIL-2R的变化。结果:同基因移植术后sIL-2R无显著变化。同种异体移植组术后sIL-2R第6天开始增高,第9天达高峰,第11天进入平台期。其显著变化出现于临床表现之前。结论:sIL-2R水平的消长与角膜移植免疫排斥反应的发生存在显著相关性,移植术后检测sIL-2R有助于排斥反应的早期诊断。眼科学服 1996;12;51—53。

接种于眼内腔可溶性抗原的释放和存留模式

目的 确立前房和玻璃体腔接种可溶性抗原后,其抗原释放和局部存留的模式。方法 分别将99mTc和125I标记的人血清白蛋白接种于兔眼前房和玻璃体腔。使用SPECT和放射免疫测定技术检测标记抗原在眼内腔短期和长期的存留和释放模式。结果 接种于眼内腔的99mTc标记抗原,在短时间内部分进入血流,大部分存留于眼内腔。接种于前房的125I标记抗原在7～11天后外周血达到高峰,34～36天消失。接种于玻璃体腔的125I标记抗原在17～24天后达到高峰,60～65天消失。结论 眼内腔对抗原的储集及其缓慢的释放模式,为眼免疫偏离的诱导提供了必要的条件。

减少房水分泌对眼前房免疫赦免和角膜移植免疫排斥反应的影响

本实验在兔眼建立睫状体冷冻术模型，观察了睫状体破坏和减少房水分泌对眼前房免疫赦免状态，以及角膜移植存活的影响。结果显示：冷冻伤术后6周眼房水的免疫抑制活性显著下降；ACAID现象消失；与正常对照组相比，免疫排斥反应加速，植片存活时间缩短。结果提示：正常睫状体的组织结构及分泌的房水及对于维持和介导前房免疫赦免、以及角膜移植的长期存活起着重要作用。这为进一步阐明角膜移植免疫排斥反应机制，并制定相应预防措施提供了新的理论根据。

Wegener肉芽肿与眼

Wegener肉芽肿是一种系统性炎症性疾病,其临床表现不特异。眼部表现约为1/6患者的首发症状,而且大多数患者最终都将出现眼部症状。眼前节和后节的任何组织都可受累。抗中性粒细胞胞浆抗体(尤其是抗蛋白酶-3)的发现,改变了临床上对Wegener肉芽肿可疑患者的评价方法。口服环磷酰胺和糖皮质激素治疗Wegener肉芽肿可降低发病率,提高生存率。有人正在研究三甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲异恶唑对降低Wegener肉芽肿复发次数及严重程度的作用。

眼表面的防御机制

眼表面持续暴露于各种应急状态。为了保护眼表面的完整性并维持角膜的透明状态 ,眼表面将动用多种防御机制。这些防御机制包括 :固有的解剖学屏障、分泌某些化学性杀菌物质和细菌裂解物质 ,如溶菌酶和乳铁蛋白 ,局部分泌Ig A抗体 (s Ig A) ,局部免疫活性细胞反应和局部特异性分子的表达 ,如细胞因子和 Fas配体。眼表在睁眼和闭眼 2种状态下使用 2种完全不同的防御策略。长时间闭眼将导致泪膜组成、起源和代谢的显著改变。这些改变包括 s Ig A、分泌小片、补体成分和炎症介质水平的增高 。

角膜基质细胞对淋巴细胞活化的抑制效应

建立人、大鼠和兔角膜基质细胞的原代和传代培养。在基质细胞单层上观察了淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应和单向混合淋巴细胞反应，并进一步分析了基质细胞与细胞培养上清对淋巴细胞活化的影响。结果显示：不同种系来源的角膜基质细胞和细胞培养上清对小鼠淋巴细胞具有同样的免疫抑制效应。提示：角膜基质细胞以及产生的可溶性免疫抑制介质对于角膜移植片免受免疫活性细胞识别和攻击，以及长期存活可能起着一定的作用。