前房接种角膜抗原和角膜移植物诱导的前房相关免疫偏离

目的观察角膜抗原和角膜移植片诱导前房相关免疫偏离（ＡＣＡＩＤ）的可能性。方法分别将角膜抗原和带有完整内皮层的角膜移植片接种于新西兰兔眼结膜下和前房。７天后，使用添加完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）的角膜抗原或植片供体脾细胞免疫动物。１周后，评估抗原特异性迟发型超敏反应（ＤＴＨ）的诱导情况。结果结膜下接种抗原和移植片的动物均发生了抗原特异性ＤＴＨ。相反，前房接种抗原和移植片的动物未显示ＤＴＨ。结论由角膜抗原和角膜移植片诱导的ＡＣＡＩＤ可能参与了角膜移植片存活的维持。

染料木黄酮与环孢菌素A联合用药对小鼠淋巴细胞体外免疫应答的影响

研究染料木黄酮(Gen)与环孢菌素A(CsA)联合用药对小鼠体外淋巴细胞增殖、周期及混合淋巴细胞反应的影响,从而为将Gen开发为免疫干预药物以降低CsA的临床用量提供理论依据.以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖,通过CFDA-SE染色流式细胞术检测荧光强度的变化,用相关软件分析其增殖指数;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期的分布情况;MTT法测定体外混合淋巴细胞反应(MLR).结果显示,细胞培养48 h后,ConA诱导下小鼠淋巴细胞与空白对照组相比有明显增殖(P<0.01),5、10μmol/L Gen以及0.02μmol/L CsA均可抑制这种增殖作用,二者联合用药后,这种抑制增殖的作用加强(P<0.01).对细胞周期分析显示,Gen和CsA抑制细胞由G0/G1期向S期转化.MTT法测定的结果显示,二者联合用药后Q值分别为1.82、1.39,对MLR呈协同抑制效应.以上结果表明与单剂量Gen、CsA相比,二者联合使用对ConA诱导的淋巴细胞增殖、细胞周期的阻滞、体外混合淋巴细胞反应的抑制作用更加明显,呈协同效应.

破坏视网膜Muller细胞对眼免疫赦免的影响

目的探讨视网膜Muller细胞在眼免疫赦免诱导和维持中的作用。方法在Wistar大鼠和新西兰白兔的右眼玻璃体腔接种Muller细胞的特异性破坏剂L－α－氨基已二酸（L－α－AAA）和10g·L1牛血清白蛋白。不同时间分别摘除接种眼，进行透射电镜检查。动物模型建立1wk后，进行DTH的诱导和测量。结果玻璃体腔接种L－α－AAA4h，视网膜Muller细胞肿胀、电子密度降低；12h以上病变加重；48h以上病变减轻；72h恢复正常。玻璃体腔接种L－α－AAA和抗原组的动物DTH反应均呈阴性。非玻璃体腔抗原接种组动物均呈阳性反应。结论在短时间内、单一的破坏视网膜Muller细胞，并不能造成眼免疫赦免状态的削弱或破坏。眼免疫赦免是一多因素、多机制的免疫调节过程，各因素之间具有相互叠加和相互补偿的作用。

外伤性眼内炎对眼免疫赦免状态的影响

目的研究外伤后眼内炎症对眼免疫赦免状态的影响。方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠和新西兰白兔建立外伤性眼内炎模型。将牛血清白蛋白分别接种于受伤眼和正常眼玻璃体腔。接受附加佐剂的牛血清白蛋白免疫方案１周后，评价其诱导玻璃体腔相关免疫偏离的能力，并观察受伤眼组织病理学改变。结果眼外伤后５～７天发生中度到重度炎症反应。常规免疫组动物均出现抗原特异性迟发型超敏反应（ＤＴＨ）阳性；单纯玻璃体腔抗原接种组动物均显示ＤＴＨ阴性；受伤眼玻璃体腔抗原接种组和受伤眼玻璃体抗原接种后对侧正常眼玻璃体抗原接种组均显示ＤＴＨ阳性。结论外伤性眼内炎导致受伤眼和正常眼免疫偏离诱导的失败。眼相关免疫偏离的消失可能参与了交感性眼炎的发病过程。

玻璃体腔接种视网膜S抗原诱导的免疫偏离(英文)

目的：确立玻璃体腔（VC）是否具有支持针对视网膜可溶性抗原（S抗原）刺激诱导偏离式免疫反应的能力，并观察白细胞介素-1（IL－1）对玻璃体腔免疫特性的影响。方法：将视网膜S抗原接种于Wistar大鼠的眼前房和玻璃体腔。抗原接种后7d，使用S抗原和完全福氏佐剂免疫受主动物。然后，通过足部刺激评估迟发型超敏反应（DTH）。通过腹腔注射IL－1改变全身的免疫状态。结果：前房和玻璃体腔注射S抗原的动物没有发生抗原特异性DTH。与此相反，当全身给予IL－1时，注射于前房和玻璃体胶的S抗原则激发剧烈的DTH。结论：玻璃体胶具有通过抑制抗原特异性DTH，支持针对可溶性抗原的免疫偏离的诱导能力。全身使用外源性IL-1可以消除玻璃体腔针对局部接种可溶性抗原锈导免疫偏离的能力。

IL-6与登革病毒感染相互关系的实验研究

目的：研究ＩＬ－６对登革Ⅱ型病毒（Ｄ２Ｖ）复制的影响以及细胞感染Ｄ２Ｖ后ＩＬ－６产生能力的变化。方法：以人单核细胞为感染模型，用微量蚀斑法测定病毒滴度，用ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ－６含量。结果：重组ＩＬ－６能增强Ｄ２Ｖ的复制，Ｄ２Ｖ感染能引起人单核细胞产生ＩＬ－６，它们的水平与Ｄ２Ｖ感染量正相关。

两株肺癌细胞系体外培养细胞和裸鼠体内移植瘤细胞增殖状态的比较研究

目的：比较两株肺癌细胞系（经实验证明为高、低侵袭系）体外培养细胞和裸鼠体内移植瘤细胞的增殖状态；方法：采用激光流式细胞仪，测量单个完整细胞群体的ＤＮＡ含量，分析其各细胞周期的比率；结果：体外培养的高增殖系细胞，移植入裸鼠体内后其Ｇ２／Ｍ期细胞比率反而降低，体外培养的低增殖系细胞，移植入裸鼠体内后其Ｇ２／Ｍ细胞比率反而升高，两株肺癌细胞系的增殖指数间无显著差异；结论：两株肺癌细胞系在体内、外增殖状况的差异性，说明肿瘤细胞在体外增殖速度的快慢不能准确反映其在体内的增殖状态，必须结合肿瘤细胞的其它生物学特性，才能比较准确地分析和判断肿瘤细胞的恶性程度。

正常妊娠对灵长目前房相关免疫偏离的影响

目的 :最近发现兔正常妊娠期间伴随前房相关免疫偏离 (ACAID)的消失。本研究旨在进一步观察在接近人类的灵长目动物是否发生同样的事件。方法 :随机选取中期妊娠恒河猴。将牛血清白蛋白 (BSA)接种于非妊娠和中期妊娠猴眼前房。后使用加有佐剂的BSA免疫动物。然后再使用BSA刺激皮肤评估诱导的迟发型超敏反应 (DTH)。结果 :前房接种BSA的非妊娠猴均获得抗原特异性迟发型超敏反应的抑制。与此相反 ,将BSA接种于妊娠猴眼则消除对DTH的抑制效应。结论 :灵长目动物在正常妊娠期间ACAID消失 ;

脾脏在不同种类动物前房相关免疫偏离诱导和维持中的作用

目的:脾脏在小鼠前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation,ACAID)的诱导中起着重要的作用。在前房接种抗原4天内摘除脾脏可以消除免疫偏离而导致免疫反应。本研究旨在观察脾脏在其他种类动物ACAID的诱导和维持中的作用。方法:在脾脏切除和假性脾脏切除后,使用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为可溶性抗原分别接种于Wistar大鼠、新西兰白兔和猕猴的眼前房。使用BSA和完全弗氏佐剂混合乳剂免疫动物。通过抗原刺激皮肤测定抗原特异性迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),并定时评估免疫偏离的维持时间。结果:假性脾脏切除眼内抗原接种组和脾脏切除眼内抗原接种组所有动物均显示抗原特异性DTH抑制,且维持时间无显著差异。相反,单纯假脾脏切除组和单纯脾脏切除组动物均显示阳性抗原特异性DTH反应。结论:脾脏对于大鼠、兔和灵长目动物ACAID的诱导和维持不具有重要作用。这些发现提示随着进化程度的进阶,脾脏的功能可能被其他的淋巴器官所代替。眼科学报1999;15:221-224。

眼免疫赦免的现代概念及临床意义

眼的免疫赦免是一极其复杂和动态的免疫调节过程。维持其存在的主要生理特征有：完整的血－眼屏障、抗原缺乏淋巴管引流而直接通过血液途径转至脾脏、局部的免疫抑制微环境。其微环境包括：局部器官特异性细胞和含多种免疫抑制性调节因子的房水，这些因素可：（１）抑制抗原趋动的Ｔ淋巴细胞活化和增殖；（２）抑制活化的巨噬细胞的效益功能；（３）改变抗原提呈细胞的抗原处理过程和提呈性质；（４）抑制补体的活化。将组织或抗原植于眼前房、玻璃体腔、视网膜下腔或角膜基质层后，局部的抗原提呈细胞处理抗原并移行到脾脏，选择性激活调节性Ｔ细胞，从而抑制抗原特异性迟发型超敏反应的表达和结合补体性抗体的产生，但保留正常的细胞毒Ｔ细胞反应和非结合补体性抗体的产生。此现象称为前房相关免疫偏离（ＡＣＡＩＤ）。ＡＣＡＩＤ是构成角膜长期存活的主要因素之一，与葡萄膜视网膜炎、肿瘤排斥、眼病毒感染和其它免疫性疾病的发生有着密切关系。

灵长目前房相关免疫偏离的诱导和维持不需要脾脏的完整性

目的 观察脾脏在灵长目前房相关免疫偏离(ACAID)诱导和维持中的作用。方法 按照经典方法在猴眼建立ACAID模型。在前房抗原接种前切除脾脏。通过观察对抗原特异性迟发型超敏反应(DTH)的抑制来确定ACAID的诱导和维持。结果 在单纯脾脏切除组动物均显示阳性DTH反应;但在单纯前房抗原接种组、脾脏切除加前房抗原接种组均显示阴性DTH反应,且维持时间无显著差异。结论 灵长目ACAID的诱导和维持不需要功能性脾脏的存在。实验为研究人眼的免疫调控机制奠定了基础。

眼免疫赦免的两面性及其临床意义

眼的免疫赦免起因于眼自身对全身免疫反应诱导和表达的修饰。将抗原接种于眼前房可以诱导一种偏离形式的全身性免疫反应 ,称为前房相关免疫偏离 (ACAID)。ACAID的主要特征是 :( 1)抗原特异性迟发型超敏反应 (DTH)和补体结合性抗体反应的缺陷 ;( 2 )产生独特的调节性T细胞亚群。这种偏离式反应一方面保护了视力的完整性 ,免受诸如外伤、感染和炎症反应的持续性威胁 ;另一方面 ,也赋予了眼易发诸如肿瘤持续性生长和疱疹病毒感染后急性视网膜坏死的危险性。

视网膜下腔相关的免疫偏离

目的 确立视网膜下腔是否具有支持针对视网膜可溶性抗原 (S抗原 )刺激诱导偏离式免疫反应的能力。方法 将视网膜 S抗原接种于 Wistar大鼠的眼前房和视网膜下腔。抗原接种后 7d,使用 S抗原和完全福氏佐剂免疫受主动物。然后 ,通过足部刺激评估迟发型超敏反应 (DTH)。结果 前房和视网膜下腔注射 S抗原的动物没有发生抗原特异性 DTH。与此相反 ,而未预先进行前房和视网膜下腔抗原接种组动物和结膜下 S抗原接种组动物则诱发了剧烈的 DTH。结论 视网膜下腔针对可溶性抗原具有诱导免疫偏离的能力。

尿酸钠作为佐剂对BALB／c小鼠体液免疫应答的影响

目的：探讨尿酸钠作为佐剂对BALB／c小鼠体液免疫应答的影响及机制。方法：利用弗氏佐剂和尿酸钠悬浮液为佐剂、天花粉蛋白（TCS）为免疫原对BALB／c小鼠进行免疫，以酶联免疫测定法检测特异性抗体IgG的效价。结果：传统弗氏佐剂可极大地增强Tcs对小鼠的血清IgG效价，而尿酸钠对IgG效价不但没有促进，反而有明显的抑制作用。提示尿酸钠佐剂对抗体应答不但没有促进，与单独使用免疫原相比，抗体应答反而明显降低。结论：与弗氏佐剂相比，尿酸钠悬浮液作为佐剂，对体液免疫应答有一定的抑制作用。

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

华蟾素对乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤作用研究

目的研究华蟾素诱导人类乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用。方法利用CCK-8法检测华蟾素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测细胞的凋亡抑制率;利用倒置荧光显微镜观察细胞整体形态的变化;利用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,从纳米尺度上进一步观察细胞形貌及超微结构的变化。结果 CCK-8结果显示,华蟾素对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,且随着剂量的增加(6.25～50 mg.L-1)而增大,当浓度为50 mg.L-1时,抑制率达到(68.40±1.02)%。采用流式细胞术对细胞凋亡的检测结果也表明华蟾素浓度为50 mg.L-1时,细胞晚期凋亡率最大,可达到(55.5±1.2)%。AFM与对照组相比,药物作用后,细胞开始坍塌变矮、细胞变小,周围呈月牙状或环状,浓度最大时,细胞中间出现较大孔洞。结论华蟾素能有效抑制MCF-7细胞的生长增殖并诱导其凋亡。利用AFM在单细胞水平上分析华蟾素对MCF-7细胞的作用,使分析结果更加全面。

鹰嘴豆芽素A抗HIV-1活性及抑制CD4^+淋巴细胞早期活化作用

目的研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响。方法①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含量变化,以评价BioA的抗HIV-1活性。②以PHA刺激剂诱导人外周血CD4+淋巴细胞活化,利用流式细胞术检测不同浓度BioA对早期活化标志CD69分子的表达影响。结果①BioA在本实验所设浓度下均能减少由HIV-1介导的细胞融合数(EC50=5.1μmol.L-1,SI=39)及p24抗原的表达量(EC50=38μmol.L-1,SI=5.2)。②终浓度5、10、25、50μmol.L-1的BioA对CD4+淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显抑制作用(P<0.01),其中50μmol.L-1达到最大抑制率,能使活化率从(60.42±0.52)%降低到(19.70±0.38)%。结论BioA具有抗HIV-1介导的细胞融合和HIV-1复制的活性及抑制CD4+淋巴细胞早期活化作用。

应用原子力显微镜分析苯甲酸钠生物毒性

应用原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)在单细胞水平上研究食品防腐剂苯甲酸钠(Sodium benzoate,SB)的生物毒性,从可视化的角度分析了淋巴细胞与不同浓度SB作用不同时间后其形态及其膜超微结构的影响。结果与正常淋巴细胞相比,随着与淋巴细胞作用的SB浓度和作用时间的增加,细胞形态及细胞膜明显发生改变,其超微结构也趋复杂。经SB作用后的细胞高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Z4个几何参数值均明显发生改变。对经SB作用后的淋巴细胞进行统计学分析,并探讨了其作用机制。

棉酚对多克隆激活剂活化人T淋巴细胞的抑制作用

目的 :以体外培养的人外周血单个核细胞为材料 ,研究多酚类抗生育药物棉酚对正常人外周血T淋巴细胞体外活化作用的影响。方法 :利用双荧光染色流式细胞术分析棉酚对人T淋巴细胞在丝裂原或佛波醇酯刺激下早期活化抗原CD6 9表达的影响。结果 :10 0 μmol/L的棉酚预先与T细胞温育 ,能完全抑制 10mg/L植物血凝素(PHA)刺激的CD3+T细胞活化抗原CD6 9的表达 ,又可阻断 10 -7mol/L佛波醇酯 (PDB)对T细胞的活化作用。这种抑制作用呈剂量依赖性 ,棉酚对PDB及PHA抑制作用的IC50 分别为 (35 7± 2 9) μmol/L和 (32 8± 1 5 ) μmol/L。此外 ,棉酚对CD3-的淋巴细胞CD6 9表达也有类似的抑制作用。然而 ,它对多克隆激活剂引起的T细胞表面分子CD3的下调无明显影响。结论 :在体外活化模型中 ,棉酚能够同时抑制多克隆激活剂PHA和PDB对T细胞的活化作用 ,提示其作用部位可能位于PKC或下游 。