原人参三醇减轻MDA-MB-231细胞紫杉醇耐药性的机制研究

目的:探讨原人参三醇(PPT)对耐紫杉醇(PTX)人乳腺癌MDA-MB-231细胞(MB231-PR细胞)耐药性的影响。方法:构建MB231-PR耐药细胞作为细胞模型。以不同浓度的PPT作用于MB231-PR细胞一定时间。用Cell Titer-Glo试剂和集落形成实验测定MB231-PR细胞和MDA-MB-231亲本细胞(MB231-PT细胞)的活力。用流式细胞术测定PPT和PTX联合使用后细胞sub-G1期的变化。Western blot法用于评估细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、survivin、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。萤光素酶报告基因实验和免疫荧光染色用于检测核因子κB(NF-κB)活性。ELISA检测白细胞介素6(IL-6)和IL-8蛋白表达水平。q PCR检测IL-6、IL-8、CXC趋化因子配体1(CXCL1)、CC趋化因子配体2(CCL2)、CD44、NANOG、八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和醛脱氢酶1(ALDH1)的m RNA表达水平。肿瘤球形成实验用于评估干细胞特性。结果:(1)PPT以剂量依赖性方式显著降低MB231-PR细胞活力(P<0.01),半数抑制浓度(IC50)为18.17μmol/L。PPT和PTX联合治疗后,MB231-PR细胞活力显著降低(P<0.01),诱导sub-G1期的积累(P<0.01),Bax/Bcl-2的比值上调(P<0.01),cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白水平升高(P<0.05),survivin蛋白表达水平下降(P<0.01)。(2)PPT与PTX联合治疗后,炎症细胞因子(IL-6、IL-8、CXCL1和CCL2)和肿瘤干细胞标志物(OCT4、SOX2、NANOG、ALDH1和CD44)的m RNA表达水平下调(P<0.05),IL-6和IL-8的蛋白表达水平降低,显著抑制MB231-PR细胞NF-κB的活性(P<0.05),并损害MB231-PR细胞的肿瘤球体生长(P<0.05)。(3)PTX处理诱导了核p-p65的表达,这种作用可以被PPT减弱。结论:PPT联合PTX可通过抑制炎症细胞因子和肿瘤干细胞来降低MB231-PR细胞对紫杉醇的耐药性。

骨髓间充质干细胞外泌体在骨质疏松中的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病与骨代谢平衡的破坏有关,骨吸收作用增强,骨形成作用不足,骨稳态发生改变,均会引起骨质疏松。成骨不足与骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)分化方向密切相关。BMSC向成骨分化方向减少、成脂分化增多是骨质疏松症发病的重要机制,因此,寻找决定BMSC分化方向的关键因子为OP的研究和治疗提供了新思路。外泌体是由细胞分泌到胞外的膜性囊泡,富含不同种类的核酸、蛋白质、脂质和信号分子等多种生物学活性物质,参与调节和完成细胞间的信息交流与传递,影响胞内信号转导发挥生物学功能。研究表明, BMSC来源的外泌体可有效改善骨质疏松症状,促进BMSC增殖、成骨分化及骨再生。本文对BMSC来源的外泌体应用于OP的研究进展进行综述,旨在为今后的研究提供参考和思路。

“十四五”期间中西医结合教育工作的思考

建国至今,中西医结合教育工作经历了从萌芽到发展完善的蜕变,“十四五”期间中西医结合学科更是步入快车道,对中西医结合教育工作提出了更高的要求。但目前中西医结合还存在对中医文化认可度不够、人才培养模式尚未健全等问题。这就要求未来的中西医结合教育工作应当结合我国国情及学科特点,开创新局面:从基础理论到临床实践加强中医药底蕴,探索中西医深度融合范式,推动中医药文化进校园,将中医药文化融入日常生活;发展以院校教育为主体,继续教育为补充的教育方式,开辟多样化的人才培养模式,扩充人才培养渠道;设立长学制教育,延长优质人才培养周期,加快教学实践基地建设,加强人才激励引导,创造好的人才环境。

《黄帝内经》痹证思想探析

痹证为临床常见疾病,既是公认的疑难杂症,也是中医药优势病种之一。痹证理论体系的构建始于《黄帝内经》。该文基于其中有关痹证的病因病机、症状、治疗、转归预后诸方面的论述,重点阐述了其中蕴含的以阳为重、意象思维、法天则地、病位辨证、三因制宜5个方面的思想,旨在全面、客观地梳理总结《黄帝内经》痹证理论,促进该理论在中医药诊疗中的推广应用,并在此基础上,进一步挖掘其中宝贵的思维方法,以确立正确的中医思维,充分发挥其在临床实践过程中的指导作用。

G蛋白偶联雌激素受体抑制剂增加他莫昔芬诱导T-47DTR耐药细胞凋亡

目的研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)抑制剂G15对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞T-47DTR敏感性的影响。方法采用他莫昔芬在体内活性形式4-羟基他莫昔芬(4-OHT)进行实验。MTT实验检测乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系T-47DTR及其亲本细胞系T-47D对他莫昔芬的敏感性;膜浆分离分析抑制剂G15对GPER蛋白表达的变化;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染分析4-OHT联用G15对T-47DTR细胞凋亡的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9的表达水平。结果(1)相比于亲本细胞T-47D,T-47DTR耐药细胞对4-OHT的抵抗性显著增强。(2)给予4-OHT(2μmol·L^(-1)),与对照组相比,GPER在细胞膜分布增加,表明在T-47DTR耐药细胞中GPER被激活;与单用4-OHT相比,联用G15(5μmol·L^(-1))显著减少GPER表达。(3)GPER抑制剂G15能增加T-47DTR耐药细胞凋亡率同时下调抗凋亡蛋白Bcl-2,上调促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达。结论GPER抑制剂G15增加T-47DTR细胞的凋亡恢复耐药细胞对他莫昔芬的敏感性。

扶正消瘤汤辅助治疗乳腺癌患者的疗效Meta分析

目的:系统评价扶正消瘤汤辅助治疗乳腺癌患者的疗效。方法:通过检索维普(VIP)、万方(WanFang Data)、中国知网(CNKI)、PubMed、Cochrane Library、Web of Science数据库从建库至2021年3月的文献,搜集扶正消瘤汤辅助治疗乳腺癌患者的随机对照试验(RCT),共获得83篇文献。由2名研究员独立进行文献筛选、信息提取并对纳入的研究进行偏倚风险评估后,使用Revman 5.3软件进行Meta分析。结果:纳入15篇文献,共1258名受试者。Meta分析结果显示扶正消瘤汤能改善临床客观缓解率[RR=1.32,95%CI=(1.17,1.49)];能增强免疫力,升高CD4^(+)[MD=4.57,95%CI=(3.61,5.54)]和升高CD4^(+)/CD8^(+)[MD=0.20,95%CI=(0.08,0.33)]的比值,降低CD8^(+)[MD=-1.85,95%CI=(-2.64,-1.06)];降低肿瘤标志物CA153含量[MD=-13.29,95%CI=(-23.33,-3.26)]和CEA[MD=-3.94,95%CI=(5.35,2.52)]。结论:扶正消瘤汤辅助治疗乳腺癌患者疗效明确,可以有效改善患者临床客观缓解率、增强免疫力、降低肿瘤标志物含量。上述结论因为纳入的研究文献的质量与数量局限,期待更多的大型、多中心、前瞻性随机实验予以验证。

氧化苦参碱通过抑制心肌细胞焦亡改善脂多糖诱导的心肌损伤

目的:探讨氧化苦参碱对脂多糖(LPS)诱导心肌损伤的保护作用及对心肌细胞焦亡的影响。方法:将50只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林(25 mg/kg)阳性对照组及氧化苦参碱低(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,每组10只。各给药组予相应剂量药物灌胃,正常对照组和模型组予相应体积生理盐水灌胃,1次/d,共8 d。第8天给药1 h后腹腔注射LPS建立小鼠心肌损伤模型。采用心脏超声监测小鼠心功能;HE染色观察小鼠心脏组织病理学变化;免疫组织化学染色观察Cleaved Caspase-1表达;ELISA检测小鼠血清IL-18、TNF-α含量;Western Blot检测小鼠心脏组织中焦亡通路关键蛋白(NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β)表达。体外实验采用LPS作用原代大鼠心肌细胞12 h,给药组以相应药物预保护1 h,MTT法检测细胞活力;Calcein-AM/PI染色观察心肌细胞焦亡;Western Blot检测焦亡相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,体内实验中模型组小鼠出现心功能障碍,心脏组织出现炎性细胞浸润,血清炎症因子含量及焦亡相关蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);体外实验中,模型组心肌细胞活力显著降低,焦亡相关蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,体内实验中氧化苦参碱能改善心肌损伤小鼠心功能,减少心脏组织炎性细胞浸润,降低血清炎症因子含量及焦亡关键蛋白表达(P<0.05或P<0.01);体外实验中,氧化苦参碱能提高心肌细胞活力,降低焦亡相关蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:氧化苦参碱可改善LPS诱导的心肌损伤,其作用机制可能与抑制心肌细胞焦亡有关。

二甲双胍激活Sirt3信号抑制高糖诱导内皮细胞衰老的实验研究

目的:研究二甲双胍抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老的作用与机制。方法:传代培养HUVECs,高糖刺激HUVECs 48 h建立血管内皮细胞衰老模型,采用噻唑蓝法(MTT)检测HUVECs活力,2′,7′-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老水平。使用Sirt3抑制剂3-TYP作用HUVECs后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p53、PAI-1及Sirt3的蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,高糖组中HUVECs的活力降低,细胞内ROS的水平和MDA含量增加,IL-6、TNF-α的分泌量增加,衰老阳性细胞的百分比增加,二甲双胍干预后能明显改善高糖诱导HUVECs的上述变化。3-TYP能显著逆转二甲双胍对p53、PAI-1、Sirt3蛋白表达的调控作用。结论:二甲双胍对高糖诱导的HUVECs衰老具有明显改善作用,其作用机制与激活Sirt3密切相关。

中药熏洗联合西药治疗膝骨关节炎疗效与安全性的系统评价

【目的】系统评价中药熏洗联合西药治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的临床疗效与安全性。【方法】检索万方数据库(Wanfang Data)、中国知网数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文期刊数据库(VIP)、Cochrane Library、Embase、Web of Science、PubMed以及临床实验注册中心关于中药熏洗联合西药治疗KOA的随机对照试验(RCTs),依据Cochrane指南对纳入文献进行质量评估,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。【结果】共纳入12篇文献,总计997例患者。Meta分析结果显示,中药熏洗联合西药治疗KOA的总有效率高于单纯西药治疗[RR=1.13,95%CI(1.08,1.19),P<0.00001],且在缓解KOA患者疼痛视觉模拟量表(VAS)评分[WMD=-0.91,95%CI(-1.54,-0.29),P<0.05]方面具有一定优势,同时两组的不良反应发生率[RR=0.34,95%CI(0.02,4.71),P=0.42]无明显差异。【结论】中药熏洗联合西药治疗KOA可以提升单纯西药治疗的疗效,且不会增加不良反应。因受纳入研究数量及质量的限制,结论有待大样本、多中心、高质量的临床试验进一步证实。

基于“肾-精-髓-骨”理论体系探讨“补肾”在治疗膝骨关节炎中的作用

本文基于“肾-精-髓-骨”关系链阐释了“肾”与软骨的关系,重点解析了“补肾”法治疗膝骨关节炎的机制:一方面“肾藏精、生髓”,干细胞及其组织微环境作为“精”“髓”在细胞层面的体现,受到“肾”的调控,“补肾”法通过提高干细胞活性,改善局部微环境,可以促使受损的软骨组织再生;另一方面“肾主骨”,“肾”在机体生长发育及衰老的过程中处于决定性地位,“补肾”法通过延缓细胞衰老,抑制细胞凋亡,起到对抗衰老,延缓软骨退化的作用。