表皮干细胞标记物鉴定及应用现状

学术背景:大面积烧伤,创伤,癌症溃疡等造成的皮肤组织缺损问题越来越突出,尤其是大面积烧伤患者的自身皮源不足,因此需要一种有效的修复创面的方法。目的:总结表皮干细胞特异性标记物的研究及应用现状。检索策略:应用计算机检索PubMed1980/2006年有关表皮干细胞特异性标记物的研究及应用的文章,检索词为"epidermalstemcells,Specificmarkers",并限定文章语言种类为英文。共检索到50篇相关文献,排除重复文献,共纳入29篇。文献评价:文献的来源主要是关表皮干细胞特异性标记物的研究及应用的文章。所选用的29篇文献中,均为临床或基础实验研究。资料综合:表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞,不仅是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞,而且与创面修复紧密相关,是皮肤及其附属器发生、修复、改建的基础,因此可以作为组织工程皮肤的种子细胞。表皮干细胞的研究目前已经取得了长足进展,但是,仍有许多问题待解决:表皮干细胞缺乏特异性标记物,较难筛选;增殖周期长,体外培养中分化增殖的调控机制不十分清楚,目前研究的组织工程皮肤还没有皮肤附属结构,还不能称为是真正意义上的皮肤等问题。结论:表皮干细胞作为理想的种子细胞,为修复各种原因造成的皮肤缺损提供了机会窗口,开启了临床应用干细胞治疗的时代,这将为解决各种原因造成的皮肤缺损导致的皮源不足问题以及皮肤缺损的功能修复带来曙光。

几丁质膜作为表皮干细胞培养支架的实验研究

目的了解大鼠表皮干细胞（ESC）与几丁质膜共同构建皮肤组织工程覆盖物的可行性。方法采用冷消化法和Ⅳ型胶原贴壁法分离培养大鼠ESC。倒置显微镜观察细胞生长情况，激光共聚焦显微镜检测其DNA和RNA表达，澳玛蓝比色法测定ESC生长曲线，流式细胞仪检测ESC表面标志物CD29、CD71、CD49d和CD34，免疫组织化学法测定细胞角蛋白15（CK15）、CK19和P63阳性表达。检测不同倍比稀释几丁质膜浸出液对细胞的影响，并设常规培养为对照组；观察ESC在载体上的生长情况。结果分离培养的细胞经鉴定确认为ESC，细胞倍增时间为48h。其表面标志物CD29、CD49d为阳性，CD71、CD34为阴性；CK15、CK19、P63为阳性。几丁质膜浸出液培养的细胞与对照组比较，在1：8～1：512等比稀释时，有轻微的促细胞增殖作用但差异无统计学意义（P〉0．05）。ESC在几丁质膜上培养2～4周时，肉眼可见棋盘样细胞集落，显微镜下见大量ESC在纤维上增殖。结论几丁质膜可以作为ESC的培养载体，两者有较好的生物相容性。

几丁糖—胶原止血海绵的研制及其生物相容性评价

目的以几丁糖、胶原为主要原料,研制一种新型的创伤止血材料,并对其止血性能及生物相容性进行评价。方法首先制备高纯度的胶原蛋白溶液,使之与几丁糖溶液键合,冷冻干燥成为海绵体。然后进行毒理学检测,包括急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验和溶血性试验。再进行止血及埋植实验:在兔耳部制造1cm×1cm大小的出血创面,包括切断兔耳动脉,在兔肝脏切除1cm×1cm的组织形成渗血创面,分别用几丁糖—胶原海绵、明胶海绵压敷止血,记录止血时间,并把在肝脏止血的海绵缝合进行体内埋植实验。结果几丁糖-胶原海绵在兔耳动脉的平均止血时间为(120±6)s,而明胶海绵为(600±10)s;在兔肝脏的平均止血时间为(45±2)s,而明胶海绵为(75±3)s;体内肝埋植实验的实验组与对照组的结果一样,有轻微的炎性反应,5个月内能在体内完全降解。其余毒理学试验均呈阴性结果。结论几丁糖—胶原海绵具有优良的止血性能及良好的生物相容性。

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖和分化的影响

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响，建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速黏附法获取鼠表皮干细胞。分别在普通培养皿培养、与几丁质膜生物支架材料共培养及以几丁质膜生物支架材料作为载体植入裸鼠体内培养等不同培养体系下观察表皮干细胞生长情况。普通培养和与几丁质膜生物支架材料共培养4周后，对比表皮干细胞克隆形成率的差异。免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4周表皮干细胞的增殖、分化情况。结果表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右，细胞开始克隆增殖；12d左右融合成片；传代培养后增殖能力逐渐减低，融合成片时间逐渐延长，传代培养3～4代后细胞终末分化，失去增殖能力。几丁质膜生物支架材料培养表皮干细胞，2周后呈棋盘式集落生长，几丁质膜生物支架材料上有大量的表皮干细胞小集落，集落上有大量的增殖细胞附着生长，扫描电镜下见几丁质膜生物支架材料纤维直径约10μm，以纤维为主，上下两层呈纵横排列成十字孔，孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜生物支架材料培养表皮干细胞4周后，其克隆形成率明显高于普通培养皿培养[（12．6±2．7）％比（5．7±1．1）％，P〈0．05]。表皮干细胞几丁质膜生物支架材料植入裸鼠体内培养4周后，细胞大量增殖形成巢状排列，在表皮干细胞巢周围，可见有类似皮肤附件结构。结论表皮干细胞在体外普通培养皿培养可增殖生长，但维持增殖时间较短；与几丁质膜生物支架材料共培养，可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性；植入体内后表皮干细胞大量增殖。