白藜芦醇通过抑制β-catenin表达诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化

[目的]观察白藜芦醇对人肌腱干细胞成骨分化的作用及其细胞信号通路。[方法]低密度接种法和胶原酶消化法分离培养人肌腱干细胞,结晶紫染色观察分离出的细胞形成的单克隆,体外诱导检测分离细胞的多向分化能力;在/无成骨诱导因子下,不同浓度白藜芦醇刺激人肌腱干细胞荧光定量PCR检测骨相关基因(Run x2和OCN)表达,免疫印迹检测Run x2蛋白表达,茜素红S染色观察钙盐沉积,免疫印迹检测β-catenin和NK-KB表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人髌腱组织中分离培养出肌腱干细胞,体外可被诱导成骨细胞和脂肪细胞;在/无成骨诱导因子影响下,白藜芦醇均促进骨相关因子Run x2和其下游因子OCN表达,且随着白藜芦醇的浓度升高而上调;无成骨诱导因子影响下,Run x2蛋白表达随着白藜芦醇浓度升高而增多,而在成骨诱导因子存在下,其蛋白表达变化不明显。在/无成骨诱导因子影响下,茜素红S染色显示白藜芦醇促进人肌腱干细胞的钙盐沉积。随着白藜芦醇浓度的提高,β-catenin表达减少,而NF-KB表达无明显变化。[结论]白藜芦醇可以体外诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化,可能通过调节β-catenin信号通路来调控。

人髌腱干细胞的分离培养与鉴定

[目的]研究从人的髌腱组织中分离出肌腱干细胞,并进行体外培养扩增鉴定。[方法]通过胶原酶消化法和低密度接种培养法从人的髌腱组织中分离出肌腱干细胞。通过三期分化鉴定,分离出的肌腱干细胞具有向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化的能力。通过流式细胞术,鉴定分离出细胞的干细胞表面标记因子的表达。通过免疫组织化学检测其肌腱细胞和软骨细胞相关蛋白的表达。[结果]从人的髌腱组织中成功分离出肌腱干细胞,大约有1.2%-1.4%分离出的细胞形成单细胞克隆。分离出的细胞表达CD44＋,CD105＋,CD29＋,CD45-,和CD14-,并具有向不同细胞分化的能力;另外,肌腱干细胞不仅表达肌腱细胞相关蛋白,如Ⅰ型胶原和tenascin C,也同时会表达软骨细胞相关的蛋白,如Sox 9和Ⅱ型胶原,但其并不表达糖氨多糖。[结论]成功分离鉴定人髌腱干细胞,虽然与间充质干细胞有相同的干细胞特性,是不同于其他间充质干细胞的一种特殊的间充质干细胞。肌腱干细胞的成功分离鉴定有利于以后干细胞相关的肌腱组织修复的研究,并有助于更好的理解肌腱干细胞在肌腱相关疾病和修复的作用。