重组人促红细胞生成素四环素调控真核表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定含有四环素调控的pTRE顺式作用元件的质粒型载体pTRE2hyg-rhEPO。方法设计含BamHI和ClaI酶切位点的hEPO基因引物,采用RT-PCR法从含有rhEPO基因的CHO细胞中克隆hEPO基因片段,亚克隆至pTRE2hyg真核表达载体。转化感受态大肠杆菌Top10,酶切鉴定阳性重组子,并进行序列测定。结果经RT-PCR能扩增出604bp的片段,与预期片段大小相符,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段,测序结果与预期序列完全一致。结论成功构建了重组人EPO四环素调控真核表达载体pTRE2hyg-rhEPO。