利用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠ES细胞H2-K1基因

利用CRISPR/Cas9和ES细胞技术,在小鼠ES细胞株上敲除小鼠H2-K1基因,为研发MHCⅠ类基因人源化小鼠打下基础。设计了两个单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),分别靶向H2-K1基因的外显子2和外显子3。以p X330质粒为骨架构建表达sgRNA的打靶载体。用电穿孔转染法将构建好的质粒以及p SUPER-puro共同导入小鼠ES细胞中,实现基因敲除。在嘌呤霉素筛选后,利用PCR初步检测靶基因的敲除情况,再通过测序以及流式细胞分析确定敲除H2-K1基因的小鼠ES细胞。结果显示:利用CRISPR/Cas9技术,小鼠ES细胞的H2-K1基因被成功敲除,通过PCR检测到4个克隆为H2-K1单等位基因敲除(19.0%),2个克隆为H2-K1双等位基因敲除(9.5%)。经过测序以及流式细胞分析,2株小鼠ES细胞被确认为H2-K1双等位基因敲除。本研究利用CRISPR/Cas9技术得到H2-K1基因敲除的小鼠ES细胞株,为MHCⅠ类基因的敲除和置换提供了参考。

Rett综合征1例及其MECP2基因新突变

1966年由德国医生Rett[1]首次报道Rett综合征（Rettsyndrome,RTT）,RTT是一种严重影响神经系统发育的疾病,发病率为1/15000？1I0000[23],多为散发,主要累及女性,是导致女性严重智力障碍的主要病因之一,仅次于21三体综合征.患儿一般在6？18个月前表现型基本正常,后逐渐出现严重的精神运动发育迟缓及倒退、手的失用和刻板动作、语言发育障碍或倒退和孤独症样行为等.

人SLC25A13基因内含子突变IVS6-11A>G导致转录子剪接异常

目的:通过minigene剪接实验分析SLC25A13基因内含子突变IVS6-11A> G是否导致转录子剪接异常,并确定其剪接方式,进而明确其在Citrin缺陷病的致病性.方法:构建携带突变的目的片段外显子捕获载体,转染293T细胞后逆转录PCR扩增转录产物,测序并分析.结果:IVS6-11A> G突变导致SLC25A13基因内含子6的3'端10个碱基保留于转录子中,致蛋白翻译提前终止,Citrin蛋白功能丧失.结论:SLC25A13基因IVS6-11A> G突变为剪接突变,其剪接方式为可变3'剪接,该突变为Citrin缺陷病致病突变.

晚期糖化终末产物受体基因多态性与中国汉族人群精神分裂症的关系

目的探讨RAGE基因多态性与中国汉族人群精神分裂症(SCZ)及其认知功能的关系。方法应用SNa Pshot技术,对582例SCZ患者(SCZ组)和602例健康人(对照组)的RAGE基因3个多态位点(G82S,-374T/A和-429T/C)的基因分型进行分析,并分别采用阳性阴性症状量表(PANSS)和简明精神分裂症认知量表(BACS)评定患者临床症状和认知功能。结果两组RAGE基因多态位点-429T/C的TC+CC基因型和C等位基因频率差异均有统计学意义(P=0.005,P=0.004);无论在男女混合样本,还是分别在男性、女性样本中,其余2个多态位点G82S和-374T/A在SCZ组与对照组间的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05);SCZ组G-T-C(G82S,-374T/A和-429T/C)单体型频率明显低于对照组(5.6%vs 8.3%,P=0.006);G82S位点GS+SS基因型阳性分数高于GG基因型,-374T/A位点TA+AA基因型阳性分数高于TT基因型,差异均有统计学意义(P=0.039,P=0.041);-429T/C位点TC+CC基因型BACS量表中符号编码测验分数高于TT基因型,差异均有统计学意义(P=0.031)。结论 RAGE基因-429T/C多态与SCZ的发生相关,并且影响患者的认知功能;G82S和-374T/A位点可能与SCZ的阳性症状有关。