优化ALA-PDT的封包时间对豚鼠银屑病模型生物效应的影响

目的:通过采用局部不同封包时间的ALA-PDT治疗豚鼠耳背部寻常型银屑病模型,研究其生物效应并优化治疗参数。方法:豚鼠耳背部涂抹心得安建立寻常型银屑病模型;荧光分光光度计分别检测皮损经ALA封包1、3、15 h后组织中PpIX的含量;肉眼观察各组皮损治疗后不同时间段的愈合情况,HE染色观察组织病理学改变,免疫组化法染色观察表皮细胞增殖(PCNA)及CD4^+和CD8^+T淋巴细胞浸润情况。结果:皮损中PpIX含量随ALA封包时间的延长而升高,15 h组>3 h组>1 h组;封包后PpIX的生成速率3 h组>1 h组>15 h组;皮损痊愈所需时间:15 h组<3 h组<1 h组。皮损中的PCNA、CD4^+及CD8^+阳性表达率:15 h组<3 h组<1h组。结论:局部ALA-PDT治疗豚鼠耳背部寻常型银屑病模型有显著疗效。ALA封包时间的长短与局部皮损中PpIX生成量成正相关;与皮损痊愈所需的时间成负相关;3 h组PpIX生成速率最快且无副作用,为最佳封包时间。ALA-PDT可抑制表皮细胞的过度增殖,减少CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的浸润,其作用效果与ALA封包时间成正相关。

ALA-PDT对健康人及银屑病患者PBMCs生物效应的实验研究

目的:通过研究ALA-PDT对体外培养的PBMCs的生物效应,探讨ALA-PDT对银屑病的免疫功能的影响、治疗的可行性及优化参数。方法:将健康人及银屑病患者新鲜外周血分别进行PBMCs分离与培养,分设空白对照组、单纯ALA组、单纯照光组以及不同ALA浓度与不同用药孵育时间组进行PDT。Annexin V/PI双染法、MTT法检测PBMCs存活率,以确定ALA最佳药物浓度和最佳用药孵育时间;TEM观察PBMCs细胞超微结构的变化;RT-PCR检测PBMCs表达Th1、Th2相关细胞因子的水平。结果:0.6 mmol/LALA避光孵育1 h后PDT组PBMCs存活率最低(P<0.05);ALA-PDT后PBMCs结构呈现典型凋亡改变;银屑病患者PBMCs的IFN-γ、TNF-αmRNA表达量与健康人相比显著升高,ALA-PDT后表达量显著下降、IL-4 mRNA表达量较健康人显著降低,经ALA-PDT后显著升高(P<0.05);IL-10mRNA表达量较健康人略有减低,经ALA-PDT后有所升高,但无统计学意义。结论:0.6 mmol/LALA避光作孵育1 h后PDT可明显促进PBMCs凋亡,银屑病患者PBMCs经ALA-PDT后由Th1优势应答向Th1/Th2平衡方向转变。